Способ моделирования диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1336088

А1 (д 4 G 09 В 23/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ASTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

; 131

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3903785/28-14 (22) 05.06.85 (46) 07.09.87. Бюл. № 33 (71). Саратовский государственный медицинский институт (72) В. Ф. Киричук, Н. П. Чеснокова и М. В. Синькеева (53) 615.475 (088.8) (56) Voshikawa Т. et аl. Res. Exp. Meel., 1981, 179, 3, р. 223 — 228. (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ДИССЕМИНИРОВАННОГО ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ (57) Для воспроизведения пролонгированного течения гиперкоагуляции экспериментальным животным внутримышечно однократно вводят ботулинический токсин типа С в дозе 2,2 — 2,5 мышиных LD /êã массы тела. 3 табл.

1336088

Через 72 ч после инъекции токсина развились параличи задних конечностей. Наблю- 35

55

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и может быть использовано в целях выяснения механизмов динамического нарушения равновесия компонентов системы, регулирующей агрегатное состояние крови, а также установления возможностей фармакологической коррекции изменений тромбоцитарного и плазменно-коагуляционного гемостаза в условиях патологии инфекционной природы.

Цель изобретения — воспроизведение пролонгированного течения гиперкоагуляции за счет того, что экспериментальным животным внутримышечно вводят однократно ботулинический токсин типа С в дозе 2,2—

2,5 мышиных LD 50/êã массы тела.

Пример 1. У контрольной крысы массой

220 г показатели системы гемостаза харак теризовались следующими показателями: время свертывания крови 120 с, силиконовое время свертывания крови 120 с. индекс диапазона контактной активации 33,33О/p, антитромбин 111 — 14 с, гепарин 4 ед.

Опытной крысе массой 230 г внутримышечно вводят однократно в икроножные мышцы обеих задних конечностей ботулинический токсин типа С в дозе 2,2 мышиных

LD50/êã массы тела.

Через 1 ч после введения ботулинического токсина при отсутствии клинических проявлений интоксикации в показателях системы гемостаза произошли следующие изменения: время свертывания крови 90 с, силиконовое время свертывания крови 90 с, индекс диапазона контактной активации Оо/о, антитромбин 111 — 10 с, гепарин 3 ед. даются следующие изменения в показателях системы гемостаза: время свертывания крови 240 с, силиконовое время свертывания крови 480 с, индекс диапазона контактной активации 50О/p, антитромбин 111 — 33 с, гепарин 9 ед.

Таким образом, через 1 ч после введения экзотоксина у экспериментального животного развилась гиперкоагуляционная фаза диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдрома)., связанная с усилением контактной и фосфолипидной активации процесса свертывания крови, а через 3 сут — гипокоагуляционная фаза с возникновением дефицита плазменных факторов свертывания крови.

Пример 2. У контрольной крысы массой

220 г определяют наличие в крови комплексов фибрин-мономера с продуктами деградации фибриногена и состояние системы фибринолиза: этаноловый тест отрицательный, протамин — сульфатный тест отрицательный, фибриноген Б отрицательный, суммарная фибринолитическая активность крови

113 мм, плазминовая активность 60 мм, 5

2 активаторы плазминогена 53 мм, антиплазминовая активность 158 мм .

Опытной крысе массой 200 г однократно внутримышечно вводят в икроножные мышцы обеих задних конечностей ботулинический токсин типа С в дозе 2,5 мышиных

1.050кг массы тела.

Через 1 ч после введения ботулинического токсина при отсутствии клинических проявлений интоксикации определение продуктов паракоагуляции и показателей системы фибринолиза дало следующие результаты: этаноловый тест положительный, протамин— сульфатный тест положительный, фибриноген Б положительный, суммарная фибринолитическая активность 141 мм, плазминовая активность 86 мм, активаторы плазминогена 55 мм, антиплазминовая активность

108 мм .

Через 72 ч после инъекции токсина развились параличи задних конечностей. Определение продуктов паракоагуляции и показателей системы фибринолиза дало следующие результаты: этаноловый тест положительный, протамин-сульфатный тест положительный, фибриноген Б положительный, суммарная фибринолитическая активность 154 мм, плазминовая активность 78 мм, активаторы плазминогена 76 мм, антиплазминовая активность 99 мм .

Таким образом, через 1 ч и в течение

3 сут после инъекции животному ботулинического экзотоксина в крови отмечается появление комплексов фибрин-мономера с продуктами деградации фибриногена, усиливается фибринолитическая активность крови, обусловленная повышением активности плазмина и активаторов плазминогена и снижением антиплазминовой активности, характерных для ДВС-синдрома.

В табл. 1 приведены показатели коагуляционного гемостаза в динамике ботулинической типа С интоксикации у белых крыс.

В табл. 2 приведены показатели, характеризующие появления комплексов фибрин-мономера с продуктами деградации фибриногена у белых крыс в динамике ботулинической интоксикации (/p положительных проб).

В табл. 3 приведены показатели фибринолитической системы крови в динамике ботулинической типа С интоксикации у белых крыс.

В табл. 1 и 3 р — рассчитано к контролю, в каждой серии опытов использовано в среднем по 15 животных.

В табл. 1 — 3 приводятся сравнительные данные, подтверждающие, что в течение

1 — 1,5 ч после инъекции ботулинического токсина в дозах 2,2 — 2,5 Ш50/кг развивается начальная фаза (гиперкоагуляция) диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, в течение которой происходит контактная и фосфолипидная активация фак1336088

Формула изобретения

Таблица 1

Сроки развития ботулинической интоксикации, ч, после введения токсина

11оказатели

Контроль

1го

24

1 — 1,5

М+м

М+м

М+м

М+м

М+м

Время свертывания крови,мин

0,29

О,ОО1

5,53 р

4,0 0,32 р . . 0,001

0,14

С,О1 з,о р

3,О О,1 р О,О1

0,09

0,О1

2,3 0,2 1,57 р(Силиконовое время свертывания

9,4 р (6,87 0,34 р (0,001

0,44

О,О1

5,07 р (4,0 0,16

p ) 3,2 0,4 1,77 р

0,5

О,ОО1

0,15

О,О1 крови

Индекс диапазона контактной активации, 4О,О1

p (2,83

0,05

41, 67

P C

4,77

0,05

43,3 р (23,95 р>

30,2 3,09 7,56 4,06.p < О,001

3,63

О,05

3, 11

0,1

Антитромбин

III, с

25,87 1,23

p (O,ÎÎ1 о,зз

0,05

16,6 р

14,0 1,0 10,07 р (0,35

0,05

31 оЗ 1 4 р (О,СО1

11,г р (0,31

О,О1

Антитромбиновое

14,8 0,9 10,75 р (18,87 р (0,95

О,001

0,63

О,ОО1

1,06

0,05

15,86 р >

33,6 р (0,65

О,ОО1

0,23

О,O1

26,6 р (0,52

О,O1

1,45

0,05 время,с

8,2

p (5,27 ра о,г1

0,05

4,87 р

0,19 о,ог

4,2 0,17 3,47 р (Гепарин, ед.-мл

3 торов свертывания крови (статистически достоверное укорочение индекса диапазона контактной активации), что приводит к статистически достоверному укорочению как обычного, так и силиконового времени свертывания крови; угнетается антикоагулянтная активность крови (статистически достоверное падение активности антитромбина Ш, сумм арной антитром би новой активности, уровня гепарина в крови), усиливается фибринолиз (статически достоверное возрастание суммарной фибринолитической активности, связанное со статистически достоверным усилением активности протеолитического фермента плазмина и статистически достоверным снижением антиплазминовой активности), что приводит к появлению в крови комплексов фибрин-мономера с продуктами деградации фибриногена (положительные этаноловый и протамин-сульфатный тесты, появление в крови фибриногена Б).

При моделировании диссеминированного 20 внутрисосудистого свертывания крови ботулиническим типа С токсином получают длительную начальную фазу — гиперкоагуляцию, особенности течения и развития которой предопределяет вторую — гипокоагуляционную — фазу ДВС-синдрома.

В известном способе, где токсин вводят внутривенно, происходит быстрая активация системы гемостаза и, как следствие этого, выпадение первой фазы синдрома — гиперкоагуляционной — или длится она в течение нескольких минут, что делает невозможным выявление эффективных методов терапии ДВС-синдрома, осложняющего течение многих заболеваний.

В предлагаемом способе гиперкоагуляционная фаза длится 1 — 1,5 ч, что позволяет использовать модель в целях разработки эффективных принципов фармакологической коррекции пусковых механизмов нарушения коагуляционного гемостаза и фибринолиза.

Способ моделирования диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови путем введения токсина, отличающийся тем, что, с целью воспроизведения пролонгированного течения гиперкоагуляции, в качестве токсина вводят в мышцу ботулинический токсин типа С в дозе 2,2 — 2,5 мышиных

Ж50)кг массы тела.

1336088

Таблица 2

Контроль Сроки развития ботулинической интоксикации, ч, после введения токсина

Показатели

1 — 1,5 6 24 72

n=19

n=18

n=15

n=16

n=15

Этаноловый тест

63,2

77,8

66,7

60,0

Протамин-сульфатный тест

47,4

63,2

53,3

60,0

100,0

100,0

100,0

100,0

Фибриноген Б 0

I ëблица3

Показатели

Сроки развития ботулинической интоксикации,ч,после введения токсина

Контроль

72

1 — 1,5

120

И+м

И+м

И.м

И+и

И+м

И+м

Суммарная фибринолитическая

1,07 141,2 2,27 191,45 12,21 р40,001 р (0,001

227,65 10,67 р 0,001

110,3

156,39 3,53 146,69 4,34 р 0,001 р 0,001 активность мм2

Плазминовая активность,мм

2,04 84,85 3,0 84,23 4,6 р- 0,001 р 0,001

61,2

82,32 1,75 р 0,001

79,88 3.66 106,26 3,29

p =- 0 01 р 0,001

Активато49,08 1,64

56,35 2,84 р G,G5

145,33 10,92 р е 0,001

107,0 10,34 ра 0,001

40,43 5.44 р 0.01

76,52 5,88 р (0, G01 ры плазминогена,мм-"

Антиплазминовая активность мм2

154,0

4,1

118,8 3,79 р G,001

89, 76 2. 52 рс 0,001

110,16 3,78 р 0,Ь01

112, 17 4,22 р 0,001

Составитель М. Позняк

Редактор H. Бобкова Техред И. Верес Корректор В. Гирняк

Заказ 3807/48 Тираж 433 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4