Питательная среда для культивирования растительных клеток и протопластов
Изобретение относится к биотехнологии , в частности к использованию клеточной инженерии для селекции сельскохозяйственных растений. Целью изобретения является повьшение эффективности высева протопластов и клеток , увеличение выхода каллусной ткани, а также сокращение сроков получения клеточных линий и растенийрегенерантов. Питательную среду готовят путем растворения в бидистиллированной воде 28 компонентов. После полного растворения и установления рН среды до 5,6 раствор стерилизуют в автоклаве. Свежевыделенные протопласты помещают в питательную среду и в климатическую камеру, где из протопластов развивается каллусная ткань, а затем и растения-регенеранты. Применение данной питательной среды позволяет увеличить эффективность высева протопластов на 5-50%, ускорить ими регенерацию клеточной стенки на 25-50% и первое деление на 40-60%. 1 табл. 91
союз советских
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (29) (111
А2 (51)4 С 12 N 5/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ
К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4065976/30-13
{22) 25. 03. 86 (46) 23. 08. 87. Бюл. В 31 (71) Украинский научно-исследова тельский институт картофельного хозяйства и Институт ботаники им. Н.Г.Холодного (72) В.А.Сидоров, А.А.Кучко, M.Ê.Çóáко и Ю.Ю.Глеба (53) 578.085.23(088.8) (56) Myrashige T., Scoop F. Revised
medium for rapid growth and Biaassays with tobacco tissue cultures. — Physiol. plant, 1962, v.15, У 12, р ° 473-497.
Nagata T, Takebe I. Planting of
isolated tabacco mesophyll protoplasts
on agar medium. — Planta, 1971, v. 99, Р 1, р. 12-20.
Gamporg О.Z Eleleigh D,Е. Culture methods and detection of glucanases in culture of voheat and Barlay-Can. Y.Biochen, 1968, v.46, Р 5, р. 417-421. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК И ПРОТОПЛАСТОВ (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к использованию клеточной инженерии для селекции сельскохозяйственных растений. Целью изобретения является повышение эффективности высева протопластов и клеток, увеличение выхода каллусной ткани, а также сокращение сроков получения клеточных линий и растенийрегенерантов. Питательную среду готовят путем растворения в бидистиллированной воде 28 компонентов. После полного растворения и установления . ф рН среды до 5,6 раствор стерилизуют в автоклаве. Свежевыделенные протопласты помещают в питательную среду и и в климатическую камеру, где из протопластов развивается каллусная ткань, а затем и растения-регенеранты. Применение данной питательной среды позволяет увеличить эффективность высева протопластов на 5-50Х, ускорить ими регенерацию клеточной стенки на 25-50Х и первое деление на 40-60Х. 1 табл.
После установления рН среды
5,6 раствор в колбах стерилиэуют в течение 15 мин в автоклаве при избы,точном давлении 0,7-0,8 атм.
В стерильном боксе или в потоке стерильного воздуха при использовании ламинар-боксов КПГ-1 свежевыделенные протопласты помещают в питательную среду (плотность 10 -10 протоплас4 тов/мл1 и разливают по 2,5-3,5 мл 25 суспензии в стерильные чашки Петри (ф 60х11 мм) . Чашки Петри стерилизуют сухим жаром в сушильном шкафу при 140-160 С. Помещают чашки Петри в климатическую камеру (24-25 С, 16- gp часовой световой день, освещенность
4000-5000 лк), где из протопластов развивается каллусная ткань, а затем и растения-регенеранты. Растения пересаживают в почву известным способом по типу рассады.
184-186
13, 1-13, 3
0,24-0, 26
О, 024-0, 026
0,9-1,1
99-101 кислота
Глютамин
Гидролизат казеина
Ксилоза
Тиамин
Пиридоксин
e -Нафтилуксусная кислота
6-Бензиламинопурин
2,4-Дихлорфеноксиуксусная кислота
Глюкоза
Дистиллированная вода
495 — 505
249-251
9, 9-10, 1
0,9-1,1
Питательная среда для культивиро.вания растительных клеток и протопластов, содержащая калий азотнокислый, кальций хлористый, магний сернокис— лый, борную кислоту, марганец сернокислый, цинк сернокислый, калий йодист»|й, натрий молибденовокислый, медь сернокислую, кобальт хлористый, железо сернокислое, мезоинозит, никотиновую кислоту, тиамин, пиридок55 син, 2,4-дихлорфеноксиуксусную кисло1,9-2, 1
0,4-0, 6
0,19-0,21
71900-72100
До 1 л
1 1331
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к использованию клеточной инженерии для селекции сельскохозяйственных растений, Целью изобретения является повышение эффективности высева протопластов и клеток, увеличение выхода аплусной ткани, а также сокращение сроков получения клеточных линий и растений-регенерантов, Среду готовят путем растворения в бидистиллированной воде при соотношении, представленном в таблице.
Выход растений-регенерантов по сравнению с известным способом дает для картофеля ускорение на 13-60i, для гороха получены регенеранты эа
14-18 недель.
Формула изобретения
892
2 ту, отличающаяся тем, что, с целью повышения эффективности высева протопластов и клеток, увеличения выхода келлусной ткани, а также
5 сокращение сроков получения клеточных линий и растений-регенерантов, питательная среда дополнительно содержит
1 аммоний хлористый, калий фосфорнокислый, натрий ЭДТА, глютамин, гидролизат казеина, ксилозу, Ы -нафтилуксусную кислоту, 6-бензила-минопурин и глюкозу при следующих соотношениях компонентов, мг/л:
Аммоний хлористый 133,5-134.
Калий азотнокислый 94 9-951
Кальций хпористый (2-водный) 219-221
Магний сернокислый (7-водный)
Калий фосфорнокислый однозамещенный 84-86
Борная кислота 2,9-3,1
Марганец сернокислый (4-водный)
Цинк сернокислый (7-водный) 1,5-2,5
Калий йодистый 0,74-0,76
Натрий молибденовокислый (2-водный)
Медь сернокислая (5-водная) 0,024-0,026
Кобальт хлористый (6-водный)
Железо сернокислое (7-водное) 27,7-27,9
Натрий ЭДТА (2-водный) 37,2-37,4
Мезоинозит 99-101
Никотиновая
13318 92 ная ная ная
133,5
133,75 134
949
950
951
219
220
221
185
186
85
3,0
Борная кислота
2,9
3,1
13 2
13,3
1,5
2,0
2,5
0,74
Калий йодистый
0,75
0,76
0,24
0,25
0,26
О, 024
0,025
0,026
0,024
0,025
0,-026
27,7
27,8
27,9
37,2
37,3
37,4
Мезоинозит
100
101
0,9
1,0
100
9.9
Глю тамии
101
495
505
500
Состав питательной среды
Аммоний сернокислый
Аммоний хлористый
Калий азотнокислый
Кальций хлористый (2-водный) Магний сернокислый (7-водный) Калий фосфорнокислый однозамещенный
Натрий фосфорнокислый однозамещенный (водный) Марганец сернокислый (4-водный) Цинк сернокислый (7-водный) Натрий молибденовокислый (2-водный) Медь сернокислая (5-водная) Кобальт хлористый (6-водный) Железо сернокислое (7-водное)
Натрий ЭДТА (2-водный) Никотиновая кислота
Гидролизат казеина
Концентрация, мг/л
Иинималь- Оптималь- Максималь1331892
Продолжение таблицы
Состав питательной среды
Концентрация, мг/л
Минимапь- Оптимапь- Максимальная ная ная
249
Ксилоза
250
251
Тиамин
10,0
10,1
1,0
0,9
Пиродокеин
a(-Нафтилуксусная кислота
2,0
1,9
2,1
6-Бензиламинопурин
0,4
0,5
0,6
2,4-.Дихлорфеноксиуксусная кислота
0,19
Сахароза
Глюкоза
71900
72000
72100
Дистиллированная вода
До 1 л
Составитель С.Светлышев
Техред В. Кадар
Корректор M.Øàðîøè
Редактор И.Егорова
Заказ 3770/23 Тираж 499
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное,Производственно-полиграфическое предприятие, r.Ужгород, ул.Проектная,4
