Способ определения активности тимозина
Изобретение повышает точность определения активности тимозина. Лимфоциты выделяют из гепаринизированной крови в градиенте фиколла и верографина, отмьшают средой 199, взвесь лимфоцитов доводят до концентрации 10 в 1 мл средой 199. Клеточную взвесь инкубируют 1 ч при 37 С с различными концентрациями тимозина, добавляют эритроциты мьши (2.10 клеток ), центрифугируют и инкубируют 30 мин при 37 С. К осадку добавляют 0,6% раствор глутаральдегида, готовят капли на предметном , фиксируют метанолом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Активность тимозина определяют по числу розеткообразующих клеток при минимальной концентрации тимозина. ffi к о со сд о:
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (19) (11) (S1) 4 G 01 N 33/48
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ц
Н д BTOPCHOIVlY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
$; "л (21 ) 370857.5/28-14 (22) 04.01.84 (46) 28.02.87. Бюл. 11 - 8 (71) Киевский научно-исследовательский рентгено-радиологи(еский и онкологический институт (72) 10.А. Гриневич, И.С. Никольский, Л.А. Титоренко, T.Н. Селезнева, Г.Л. Бендюг и И.Ф. Лабунец (53) 615.375 (088.8) (56) Гюллинг Э.В., Самбур М.Б.,,Кравчук Г.П. Способ количественного опреДеления активности тимоэина.
Авторское .свидетельство СССР
Р 824051, кл. G 01 N 33/48, 1982.. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ
ТИИОЗИНА
{57) Изобретение повьппает точность определения активности тимозина. Лимфоциты выделяют иэ гепаринизированной крови в градиенте фиколла и верографина, отмывают средой 199, взвесь лимфоцитов доводят до концентрации
10 в 1 мл средой 199. Клеточную
6 о взвесь инкубируют 1 ч при 37 С с различными концентрациями тимоэина, 6 добавляют эритроциты мьппи (2.10 клеток), центрифугируют и инкубируют
30 мин при 37 С. К осадку добавляют
0,6Х раствор глутаральдегида, готовят капли на предметном стекле, фиксируют метанолом и окрашивают по
Романовскому-Гимза. Активность тимозина определяют по числу розеткообраэующих клеток при минимальной концентрации тимозина.
Изобретение относится к биологий, медицине, медицинской промышленности и может быть использовано для определения активности тимозина — гормона, выделяемого из вилочковой железы, широко применяемого в экспериментальных исследованиях и клинике для лечения больных с иммунодефицитами различной этиологии.
Цель изобретения — повышение точности определения активности тимозина.
Составитель И. Башкаев
Техред А.Кравчук
Редактор В. Ковтун
Корректор Л. Пилипенко
Заказ 381/50
Подписное
Тираж 777
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, И-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
II р и м е р 1. Лимфоциты выделяют из гепаринизированной крови в градиенте фиколла и верографина. Полученную взвесь лимфоцитов дважды отмывают средой 199 по 10 мин при
1500 об/мин. Надосадочную жидкость отбирают, осадок помещают в 1 мл среды 199 и считают количество выделенных лимфоцитов. Взвесь лимфоцитов доводят до конечной концентрации 10 в 1 мл средой 199. Для одно6
ro определения берут 0,1 мл указанной клеточной взвеси. Клетки инкубируют 1 ч при 37 С с различными коно центрациями тимозина, добавляемого в пробирки в объеме 0,1 мл. Контролем служат.лимфоциты, инкубируемые при 37 С в течение 1 ч с тем же объемом питательной среды. После инкубации с тимозином клетки дважды отмывают центрифугированием при
1000 o6/мин в течение 5 мин, К
0,l мл взвеси проинкубированных с тимозином лимфоцитов (10 клеток) до5 бавляют 0,1 мл суспензии трижды отмытых физиологическим раствором эритро6 цитов мыши (2. 1 О клеток) . Смесь клеток центрифугируют в течение
5 мин при 1000 об/мин и инкубируют о
30 мин при 37 С. Затем к осадку до93656 бавляют по 0,1 мл 0,6Х-ного раствора глютаральдегида, осторожно ресуспендируют осадок и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жид5 кость сливают,, к осадку добавляют
0,1 мл дистиллированной воды, ресуспендируют смесь, готовят капли на предметном стекле, Высохшие капли фиксируют метанолом и окрашивают по
®О Романовскому-Гимза. Подсчет произво,дится при увеличении 7х90. Розеткой считают образование из лимфоцита, инкубированного с минимальной дозой
У тимозина и трех и более присоеди нившихся к нему эритроцитов. Подсчет розеток производится на 200 лимфоцитов и-выражается в процентах. Например, после инкубации лимфоцитов в среде было зарегистрировано 47
20 Ем-РОК, а,после инкубации лимфоцитов с тимоэином в концентрациях 60 и
30 мкг/мл соответственно 8 и 4X, активность тимозина равна 60 MKI /ìë, что более чем,на ЗОЖ повышает точность способа по сравнению с прототипом, возможность определения которого равна 125 мкг/мл.
Формула изобретения
Способ определения активности ти.мозина, включающий выделение лимфоцитов человека, инкубацию лимфоцитов с тимозином в различных концентрациях и добавление эритроцитов с последующим определением активности тимозина по числу розеткообразующих клеток при минимальной концентрации тимозина, о т л H ч а ю шийся тем, 40 что, с целью повышения точности способа, выделение лимфоцитов осуществляют иэ периферической крови и после инкубации их с тимозином добавляют эритроциты мыши.
