Способ выявления солей кальция в хряще при электронно- микроскопическом исследовании

 

Изобретение бтносится к области медицины, а именно к морфологии, и может быть использовано, в частности, для приготовления препаратов для световой и электронной микроскопии из биологических объектов. Целью изобретения является выявление водорастворимых соединений кальция. Образцы эмбрионального кальцифицирующегося хряща человека фиксируют в 1-3%-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2:1 при 3-5°С в течение 30-60 мин, затем производят дегидратацию в безводной смеси эфира и ацетона при последовательных соотношениях 2:1, 1:1, 1:2 соот- . ветственно при 4 С. Следующим этапом дегидратации является троекратное погружение образцов каждый раз в свежие порции ацетона абсолютного по 30 мин в каждую при 4 С. Далее образцы заливают в эпоксидные смолы с применением абсолютного ацетона. Получаются сериальные ультратонкие гистологические срезы. i (Л С 1C 00 о: со со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 G 01 N 1/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3847150/28-14 (22) 21.01.85 (46) 30.01.87. Бюл. У 4 (71) Астраханский государственный медицинский институт им. А.В.Луначарского (72) P.È.Àñôàíäèÿðîâ и А.Е.Лазько (53) 616-0.88.8(088.8) (56) Теггас1о L. Schwahe К.G. Treezing and drying of biological fissues for electron microscopy, Hormone and Netabol. Res., 1981, v. 13, р. 1021-1028.

Bernard G.W. Pense D.Ñ. An electron microscopic study of initial

intramembranons osteogenesis Amer.

J. Апай., 1969, v. 125, р. 271-290. (54) СПОСОБ ВЬИВЛЕНИЯ СОЛЕЙ КАЛЬЦИЯ

В ХРЯЩЕ ПРИ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к морфологии, и

„„SU„„1286931 А 1 может быть использовано, в частности, для приготовления препаратов для световой и электронной микроскопии из биологических объектов ° Целью изобретения является выявление водорастворимых соединений кальция. Образцы эмбрионального кальцифицирующегося хряща человека фиксируют в 1-3Х-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2:1 при

3-5 С в течение 30-60 мин, затем производят дегидратацию в безводной смеси эфира и ацетона при последовательных соотношениях 2:1, 1:1, 1:2 соото ветственно при 4 С. Следующим этапом дегидратации является троекратное погружение образцов каждый раз в свежие порции ацетона абсолютного о по 30 мин в каждую при 4 С. Далее образцы заливают в эпоксидные смолы с применением абсолютного ацетона.

Получаются сериальные ультратонкие . гистологические срезы.

1 12869

Изобретение относится к области медицины, а именно к морфологии, и может быть использовано, в частности, для приготовления препаратов для световой и электронной микроскопии из биологических объектов.

Цель изобретения — выявление водорастворимых соединений кальция за счет фиксации раствором четырехокиси осмия в смеси органических растворителей и дегидратации в смеси этих растворителей с изменяющимся соотношением ингредиентов.

Способ осуществляют следующим образом.

Осуществляют фиксацию в 1-Зоном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2: 1 в течение 30-60 мин при 3-5 С и произо водят дегидратацию в безводной смеси эфира и ацетона при последовательных соотношениях 2:1, 1:1, 1:2 соответственно. Затем в три смены, в течение 20-40 мин каждая, погружают образцы в заливочную среду. Четыре этапа дегидратации осуществляют при

3-5 С.

Пример 1. Обработке подвергают образцы эмбрионального кальцифицирующегося хряща человека размерами 1х1х1 мм, Фиксацию образцов проводят в 27-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соото ношении 2:1 при 4 С в течение 60 мин.

Затем образцы последовательно переносят в ряд дегидрирующих жидкос" о тей, имеющих температуру 4 С. Первая из них представляет собой смесь эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 2: 1. В ней образцы находятся 1 ч. Затем переносят их в смесь эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 1: 1 также на 1 ч. Третья жидкость представляет собой смесь эфира этилового и ацетона абсолютного в объемном соотношении 1:2. В ней

50 образ цы находя тс я 1 ч.

Следующим этапом дегидратации является троекратное погружение образцов каждый раз в свежие порции ацетона абсолютного по 30 мин в каждую о 55 при 4 С.

31 2

Далее образцы заливают в эпоксидные смолы с применением абсолютного ацетона по известным методикам.

В результате такой обработки получают сериальные ультратонкие гистологические срезы. Полностью сохраняется и четко выявляется структура из изучаемой ткани как на уровне световой, так и электронной микроскопии.

Пример 2, Обрабатывают образцы эмбрионального кальцифицирующегося хряща человека размерами 1х1х х1 мм. Фиксацию осуществляют в 17.-ном растворе четырехокиси осмия в смеси эфира этилового и ацетона абсолютного при их объемном соотношении

2:1 в течение 30 мин. Температура фиксатора 3 С.

Далее проводят дегидратацию в трех смесях эфира этилового и ацетона абсолютного с различными их объо емными соотношениями при 3 С по

30 мин в каждой. 1 смесь — эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотно шении 2:1, 2 смесь " эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотношении

1: 1, 3 смесь — эфир этиловый и ацетон абсолютный в соотношении 1:2.

Продолжают дегидратацию в трех о сменах ацетона абсолютного при 3 С по 20 мин в каждой.

Затем заливают в эпоксидные смолы.

В результате получают ультратонкие гистологические срезы.

Формула и з о б р е т е н и я

Способ выявления солей кальция в хряще при электронно-микроскопическом исследовании, путем фиксации в

1-З -ном растворе четырехокиси осмия о при температуре 3-5 С с последующей дегидратацией, заключением в смолы и определением кристаллов кальция на препарате, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью выявления водорастворимых соединений кальция, фиксацию проводят в течение 30-60 мин при этом используют четырехокись осмия на смеси эфира и ацетона при их соотношении 2:1, а дегидратацию ведут в смеси эфира и ацетона при последовательных соотношениях 2:1, 1:1, 1:2 соответственно.

ВКИИПИ Заказ 7704/41 Тираж 776 Подпис ное

Произв.-па тигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4