Способ получения целлобиаз грибов
союз советских социалистических Респувлик гоюдмствеинок иинтиое
ВЕДОМСТВО СССР (OCIIATEllT СССР)
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1 (21} 3792232/13 (Йф 30.0734
146} Ж1193 Бюл. Na 43-44
{71) Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР (в) SU (и) 1244941 А1 (51) 5 С И N 9 42 (72) Белецкая ОЛ. Рязанова ЛП„Иванова ГС„Кулаев И.С„Окунев ОН„Головлев Ей (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛОБИАЗ ГРИБОВ (57}
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения целлобиаз из различных грибов.
Целью изобретения является расширение спектра области применения способа и упрощение процесса.
Сущность способа заключается в том, что фильтрат культуральной жидкости грибов-продуцентов или какой-либо другой раствор, содержащий целлюлолитический комплекс грибов, хроматографируют на СМсвфадексе, уравновешенном 0,01-0,02 М эцетатным буфером, рН 3,9-4,1, проводят элюцию, линейно изменяя концентрацию
NaCl в буфере, целлобиазы, содержащихся в элюатв, разделяют на QAE-сефадексе с элюцией тем же элюентом.
Пример 1. Гриб Азрег9!Пиэ terreus выращивают, мицелий отфильтровывают и отбрасывают. Белки иэ фильтрата культуральной жидкости сорбируют на СМ-сефа. дексе С-25, уравновешенном 0,02 M ацетатным буфером, рН 4,1. Злюцию проводят, линейно изменяя концентрацию NaCl в исходном буфере от 0 до 0 5 М, Затем проводят хроматографию элюата на колонке с
QAE-сефадексом А-50, уравновешенном
0,05 М трис-HCI буфером, рН 8.0. Целлобиазы элюируют, линейно изменял концентрацию NaCl, в исходном буфере от 0 до 0,5 М, Получают три целлобиээы с выходом 2,4;
96,7; 1,97 (таблица).
Пример 2. Гриб Asperglllus clavatus выращивают, мицелий отфильтровывают и очистку целлобиазы проводят, как в примере 1, но белки из фильтрата сорбируют нэ
СМ-сефадексе С-50, уравновешенном 0,01 M ацетатным буфером, рН 4,0, а хроматогра. фию элюата проводят на коллонке с QAE-ceфадексом А-25. Выход четырех целлобиаз
6,4; 8,3; 8,7 и 19 .
Пример 3. Фирменный препарат целлюлолитического комплекса гриба
5 Aspergllfus alger(Serve) растворяют в 0,01 М ацетатном буфере, рН 3,9, и очистку âðoâoдят, как описано в примере 1, но используют
0,01 М буфер с рН 3,9. Выход двух ферментов (целлобиаз):55 и 28 )((таблица).
Пример 4, Гриб Trichoderma vlrlde выращивают и очистку целлобиаз из фильтрата культуральной жидкости проводят, как описано в примере 3. Выход трех целлобиаз
15,0; 15,0; 30 /.
Пример 5:, Очистку целлобиаз гриба
Pen)elf llum cfavlforme проводят, как описано в примере 2, Выход двух форм целлобиаз . 12.6 и 87,4, В разработанном способе подобраны
20 условия сорбции на CM-сефадексе, универсальные для выделения целлобиэз из различных грибов-продуцентов, схема очистки включает две стадии вместо трех, Разработанный способ позволит бвз
25 изменения аппаратурного оформления и затрат времени на разработку индивидуальных схем очистки получать множественные формы целлобиаз из различных грибов-продуцентов, необходимые для изу30 чения механизма действия целлюлолитической полиферментной системы и для обогащения целл1ололитических комплексов, дефицитных по целлобиазе.
Результаты очистки целлобиаз из раз35 личных грибов приведены в таблице. (56) Иванова Г.С., Белецкая О.П., Окунев
О.Н., Головлев Е.Л., Кулаев И.С. Фракцио нирование целлюлазного комплекса гриба
Asð. terreus. Прикладная биохимия и микро40 биология, 1983, т., t9, с.362-368.
1244941
Продолжение таблицы
Составитель О.Скородумова
Редактор M.aýñèëüåâà Техред М.Моргентал Корректор H.Êîðoëü
Тираж Подписное
НПО "Поиск" Роспатента
Заказ 3332
113035. Москва. Ж-35, Раушская наб„4/5
Производственно-издательский. комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина. 101
Формула изобретения
CA0CG5 ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛОБИАЗ
ГРИБОВ; предусматривающий хроматографию на карбоксиметил-сефадексе и при рН
8,0 на диэтил-2-оксипропил-аминоэтил-се-; фадексе с элюЦией градиентом йаС1 от 0 до 0,5 М в исходном буфере, отличающийся тем, что, с целью расширения спектра области применения способа и упрощения процесса, хроматографию на.карбоксиме,тил-сефадвксе осуществляют в условиях, 0,01 - 0,02 М ацетатного буфера, рН 3,9 4,1.
