Способ определения активности церулоплазмина
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК ()9) ()!) (5!) 4, 6 01 1 1 33/4 8 ф! 1,ДЯДЕЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ к авто сном св тельств
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3679220/28-14 (22) 26.12.83 (46) 07.03.86. Бюл.й 9 (71) Областная клиническая больница
r„ Калинина и Калининский государственный медицинский институт (72) M,П.Антонов, Т.В.Лапутина и Л.А.Антонова (53) 612.398,12(088.8) (56) Ravin Н.A. J, Lob Clin. Ме
1961, v,58, У 1, р. 161-168. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА путем инкубации биологического материала с и -фенилендиамином и последующего фотометрического определения окрашенного продукта, отличающийся тем, что, с целью повьппения чувствительности и точности способа, в среду инкубации дополнительно вводят соль двухвалентного железа в концентрации 0,23-0,26 мМ, а в качестве стандарта используют бензохинон.
1216265
Составитель H.Ãóëÿåâà
Редактор А.Шишкина Техред З.Палий Корректор П.Пилипенко
Заказ 965/32 Тираж 778 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к биологической химии, в частности к способу определения активности ферментов.
Цель изобретения — повышение чувствительности и точности способа.
Пример. Для реализации способа используют. реактивы: 0,4 M ацетатный буфер (pH 5,5), буферно-субстратную смесь (готовят перед употреблением ) — 0,5 r и -фенилендиамина гидрохлорида и 9,8 мг соли Мора растворяют в 100 мл ацетатного буфера (концентрация 25 и 0,25 мМ)соответственно), 1,5Х-ный раствор роданида калия.
Аналитические процедуры: в две пробирки, содержащие по 0,05 мл исследуемой сыворотки, вносят по 0,5 мл буферно-субстратной смеси и инкубио руют в водяном термостате при 37 С.
Через 5 мин -в одну пробирку вносят
2 мл роданида калия (контрольная проба) и еще через 10 мин 2 мл роданида калия вносят во вторую пробирку опытная проба) и измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре в кюветах с длиной оптического пути
0,5 см с зеленым светофильтром (максимум абсорбции 530 нм). Разность оптической плотности опытной и контрольной проб используют для расчетов по калибровочному графику.
Для построения калибровочного графика к 0,05 мл раствора бензохинона в интервале концентраций 2 — 10 мМ добавляют 0,5 мл буферно-субстратной смеси и через 10 мин 2 мл роданида калия. Результаты фотометрии используют для построения калибровочного графика. Активность церулоплазмина выражают в мМ бензохинона за l ч на 1 л.
С помощью предлагаемого способа проведено определение активности церулоплазмина у 246 больных, из них 6 больны гепатолентикулярной дегенерацией. Контролем служила группа
Zn иэ 20 здоровых лиц обоего пола. Активность церулоплазмина составила у здоровых мужчин 18,9 и 3,6 мМ бензохинона за 1 ч на 1 л, у здоровьгх женщин 18,2 < 5,6 мМ бензохинона за
2. 1 ч Hà l л у больньгх с гепатолентикулярной дегенерацией 2,5" 0,6 мМ бензохинона за l ч на 1 л.

