Способ выделения альбумина из плазмы крови

СОЮЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (21) 3718811/28-14 (22) 03.04.84 (46) 23.02.86. Бюл. № 7 (71) Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови им. проф. P. О. Еоляна (72) А. М. Егикян, P. К. Антонян и М. А. Александрян (53) 616.07 (088.8) (56) Препараты крови. М.: Медицина, 1976, с. 107 — 110.

„.Я0„„1212416 А

yg 4 А 61 В 10/00; G О1 N ЗЗ/48

f54) (57) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АЛЬБУМИНА ИЗ ПЛАЗМЫ КРОВИ путем последовательного осаждения фибриногена и глобулинов с последующим осаждением из полученного супернатанта альбумина этиловым спиртом, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта, стадию осаждения глобулинов проводят добавлением стабилизатора и нагреванием до 14 — 15 С при рН 3,3 с последующим доведением рН до 4,6.

1212416

Состав итель В. Поздняков

Редактор В. Иванова Техред И. Верес Корректор Т. Колб

Заказ 664/5 Тираж 659 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к технологии получения белковых препаратов и может быть использовано в медицинской промышленности.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Пример. Флаконы с сухой плазмой длительных сроков храие1 ия (до 4 лет) вскрывают в день начада фрЪкционирования.

Сухой порошотк.,Взвешивают и высыпают в реактор с рубашкой„ » к !нему при непрерь1вном перемешиваний- 4дбавляют апирогенную дистиллированную веду для получения:„гомогенной м@ссы H охлаждают смесью до . 0 С. г1а„.. QO" г порошка сухой плазмы, берут 1000 мл апирогенной воды. К охлажденной до 0 С плазме 15 медленно при перемешивании добавляют охлажденный до (- 15) — (-20 ) 53Я -ный этиловый спирт из расчета 180 мл на

1000 мл плазмы. Конечная концентрация спирта в смеси составляет 8Я. Температуру смеси в процессе добавления спирта постепенно понижают от 0 до — 3 С к концу осаждения. По окончании добавления спирта смесь оставляют от 3 до 6 ч при (— 3+-1) С. В данных условиях в осадок выпадает 1-я фракция белков плазмы, содержащая в основном фибриноген. Выпавший осадок отделяют центрифугированием.

Центрифугат замеряют и загружают в реактор.

Осаждение фракции (2+3) проводят путем медленного (не более 12 л в час) ЗО добавления спирта к центрифугату из расчета 610 мл на 1л. Спирт перед добавлением охлаждают до (- 15) — (-20) С. При этом температуру находящейся в реакторе смеси постепенно снижают до (-5) — (- 6) С.

По окончании осаждения смесь перемеши- 35 вают не менее 2-х часов.

Выпавший осадок отделяют центрифугированием. Центрифугат (2+3) замеряют и загружают в реактор, снабженный мешалкой, и подают в рубашку реактора 40 воду с температурой 35 — 50 С.

Третья стадия является наиболее ответственным этапом очистки альбумина при его выделении из сухой плазмы. На этой стадии происходит удаление о(и Р глобулинов, следов гемоглобина, расщепление комплексных соединений альбумина и удаление последних с примесями белковой природы.

В мерник загружают каприлат натрия из расчета 30 мл 10Я-ного раствора на 1л центрифугата (2+3) .

В мерник загружают н. раствор соляной кислоты из расчета 70 мл на 1 л центрифугата.

В мерник загружают 1 н, раствор едкого натра из расчета 45 мл на 1 л центрифугата.

Центрифугат (2 + 3) загружают в реактор, включают мешалку и подают в рубашку реактора воду с температурой от 35 до 50 С. После подачи тепловой воды в рубашку реактора из мерника подают в реактор 1ОЯ-ный раствор каприлово-кислого натрия. Затем из мерника начинают подавать 1 н. раствор соляной кислоты до достижения рН смеси 3,3.

После того, как рН смеси установлен (3,3), а температура достигла 14 — 15 С, смесь выдерживают 20 мин. По истечении

20 мин в реактор начинают подавать из мерника раствор едкого натра до достижения рН 4,6. Для полного созревания осадка смесь выдерживают до начала центрифугирования при рН 4,6 в течение

20 мин. Затем центрифугируют при 17 С.

Центрифугат фильтруют на Нутч-фильтре.

Фильтрат, имеющий температуру 18 C собирают в реактор, в рубашке которого циркулирует охлажденный раствор. В мерник загружают 96о-ный этиловый спирт из расчета 220 мл на 1 л фильтрата. Спирт охлаждают до температуры (- 15) — (- 20) С, включают мешалку реактора и тщательно перемешивают, избегая вспенивания, загруженный на предыдущей стадии фильтрат.

Для того, чтобы осадить весь альбумин к фильтрату добавляют охлажденный

96Я-ный спирт. Температуру смеси к концу осаждения снижают до (- 8) — (- 10) С и оставляют до созревания осадка на 10 ч.

Затем центрифугируют, центрифугат является отходом производства, а осадок фракции содержит электрофоретический чистый альбумин. Сырой осадок альбумина растворяют, пристенчато замораживают, «закаливают» и лиофильно высушивают, из сухого порошка готовят раствор нужной концентрации, стерильно фильтруют, разливают во флаконы.