Способ выделения фактора роста для культивируемых клеток дрозофилы
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (19) (11) (51) С 12 М 5/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, 13
H ABTQPCHQMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3719812/28-13 (22) 30.03.84 (46) 07.01.86.Бюл. Р 1 (71) Институт молекулярной генетики
АН СССР (72) В. А.Гвоздев, Я.M.Розовский и Л.Г.Полукарова (53) 577.95(088.8) (56) Cholii W ° J.et al. Purification
of Drosophilla acidic ribosomal
proteins.-Eur, I.Biochem., 1982, 127, Р 1, рр.199-205.
Wyss С. et а1. А cationic low
molecular Weight growth factor
from Drosophilla melanogaster and
the nutritional requirements of
КсНР ce11s-(insect.-Biochem, 1982, ч.12, Ф 5, рр.515-222. (54) (57) СПОСОБ ВЫ 1ЕЛЕНИЯ ФАКТОРА
РОСТА ДЛЯ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК
ДРОЗОФИЛЫ, включающий экстрагирование дроэофилы,, о т л и ч à 1о— шийся тем, что, с целью повыщения активности целевого продукта, куколОк дрозофил экстраГируют ГОМО генизацией в растворе солей щелоч— ных металлов при 4 С с последую0 щим хроматографированием экстракта на диэтиламиноцеллюлозе и элюированием 0,2 М NaC1.
1203107
Изобретение относится к области биохимии, а именно к способам выделения и очистки агента (фактора), стимулирующего рост культивируемых клеток насекомых.
Таблица 1
Состав раствора солей щелочных металлов, ммоль
Температура гомогенизации
4 С 20 С
NaC1. 69; КС1 21; NaHgPOy 3,3; NaHCOg 4„2
NaC1 69; КС1 21; ИаН„РО 3,2
Примечание.+ — активность активность фактора роста обнаруживается. фактора роста не обнаруживается, среды) необходим для роста пересеваемой и первичной культуры клеток, Данные отражены в табл.2,.
Экстракт центрифугируют в течение 20 мин при 4000xq. Выявлено, что при исходной концентрации клеток
1-2 10 /мл экстракт (0,03 мл/мл
Т а б л и ц а 2
Первичная культура
Пересеваемая культура
Показатель
С добавлением экстракта
Без добавления экстракта
С добавлением Без добавлеэкстракта ния экстракУвеличение количества клеток, и раз
10-15
10-15
Фактор роста, содержащийся в экс- yg Для выявления природы фактора рострактах, не удаляется диализом Экс та экстракт обрабатывают трипсином тракт подвергают тепловой обработке (традиционным способом). Резкое сни— в течение 5 мин для удаления приме жение активности действующего начала. сей при температурах, представлен— после обработки TpHIIcHHoM показало, ных в табл.3. что фактор роста является белком или
Т а б л и ц а 3 содержит белковый компонент.
Молекулярный вес фактора роста составляет 200 000 по результатам гельфильтрации на колонке с сефарозой 4В.
Влияние на активность фактора роста
Температура обработки
60 С
Не снижает
Для очистки фактора роста применяют хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе
Снижает в 5-6 раз
100 С
Фактор роста может быть использован в фундаментальных исследова-. ниях по клеточной биологии, а также в прикладных медицинских и вирусологических исследованиях, в которых
I применяется культура клеток насекомыхх.
Цель изобретения — повышение активности целевого продукта.
Пример. Проводят гомогениэацию куколок насекомых в гомогенизаторе Поттера в 3 мл раствора солей щелочных металлов на 1 r куколок при 4 С. Раствор солей щелочных ме10 таллов берут в соотношении, представленном в табл.1.
1203107
Составитель В.Каюкова
Редактор Н.Егорова Техред T,Äóáèí÷àê Корректор Г.Решетник
Заказ 8387/31 Тираж 524 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул.Проектная, 4
3 (ДЕ-23, Nhatman) . Активное начало элюируется 0,2 M NaCl При меньшей концентрации NaC1 (О, 1 М) активность в элюате не обнаруживается. В процессе очистки активность фактора роста в расчете на мг белка увеличивается в 5-10 раэ.
Предлагаемое изобретение позволяет получить белковый фактор роста насекомых, который интенсивно стимулирует рост эмбриональных клеток в культуре — количество клеток культуры при добавлении фактора роста увеличивается в 10-15 раз.
