Способ определения поливинилового спирта в тканях на гистологическом препарате

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИВИНИЛОВОГО СПИРТА В ТКАНЯХ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ путем фиксации ткани, обезвоживания, заключения в парафин, приготовления срезов и их окрашивания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, фиксацию ведут в растворе содержащем 96-градусный этиловьй спирт и формалин в соотношении 9:1, а в качестве красителя используют 1%-ный водный раствор конго красного , при этом срезы перед окраской и после окраски помещают в 70-75-градусный этиловый спирт при 33i3°C. В

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУ6ЛИН (! 9) (! !) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPGKOIVIV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

llO ДЕЛАМ ИЭО6РЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3630785/28-14 (22) 03.08.83 (46) 15. 10.85. Бюл. Р 38 (72) В.И.Евсюков, Т.А.Земляная и E.Ã.Ðîáà÷åâñêàÿ (53) 616-088.8(088.8) (56) Пирс Э. Гистохимия. М.: Ино.странная литература, 1964, 944.

Седов А.А. Изучение биологических свойств некоторых полимеров и сополимеров — .кровозаменителей:

Дис. 1972, л. 113. (5!)4 С 01 N 1/28 А 61 В 10/00 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИВИНИЛОВОГО СПИРТА В ТКАНЯХ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ путем фиксации ткани, обезвоживания, заключения в парафин, приготовления срезов и их окрашивания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, фиксацию ведут в растворе содержащем 96-градусный этиловый спирт и формалин в соотношении 9:1, а в качестве красителя используют

1%-ный водный раствор конго красного, при этом срезы перед окраской и после окраски помещают в 70-75-градусный этиловый спирт при 33+3 С.

1185162

Пример 2. Опыт проводят по примеру 1, но срезы приготовляют на

75-градусном спирте.

Результат тождественен тому, котоprrA показан в примере 1.

Пример 3. Опыт проводят по примеру 1, но срезы дифференцируют в 75-градусном спирте, Результат тождественен тому, который показан в примере 1.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки токсичности и качества выпускаемых образцов поливинилового спирта, предназначенного для использования в разных областях народного хозяйства.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом. 10

Фиксируют кусочек ткани. Причем фиксацию ведут в растворе, содержащем

96-градусный этиловый спирт и формалин в соотношении 9:1, после чего гистологический материал обезвожива- 15 ют и заливают парафином. Приготавливают парафиновые срезы толщиной

5-7 р которые затем окрашивают. При этом срезы до и после окраски помещают в 70--75-градусный этиловый спирт 2 при 33 3 С. Окраску проводят 1Х-ным водным раствором конго красного.

Пример 1. Кусочки ткани почек крысы размером 0,5 0,5 см помещают в спиртоформол на 24 ч, после чего 25 гистологический материал проводят через одну порцию (обезвоживание), две порции хлороформа и заливают парафином. Парафиновь;е срезы толщиной

5,6 и «р» расправляют на 707-ном спир-ЗО те при 33 3 С, затем подсушивают их при комнатной температуре. Далее срезы депарафинируют, погружая их последовательно в 2 порции ксилола и 2 порции 96-градусного спирта, Ф 35 быстро споласкивают в воде и помещают срезы в 1Е-ный водный раствор конго красного на 3- мин, дифференцируют в 70-градусном спирте, помещают в 2 порции 96-градусного спирта, 2 порции

40 ксилола и заключают в канадский бальзам.

В результате окрашенные капли полимера (ПВС) красного цвета ясно прослеживаются в извитыхканальцах почек, 45 цитоплазме дегенерирующих эпителиаль. ных клеток и в просвете капилляров клубочков почек.

II p H e p 4 (KOHTpOJIbHbIH), Опыт проводят по примеру 1, но приготовленные срезы расправляют на 80-гра-. дусном спирте с температурой 33+3 С.

В этом случае срезы мгновенно рас. правлялись на поверхности спирта, разрывались, а морфологические структуры повреждались, тем самым трудно было судить о наличии ПВС.

Пример 5 (контрольный). Опьгг проводят по примеру 1, но срезы расправляют на 60-градусном спирте с той же температурой.

Расправить срезы удавалось с трудом, часть отложений ПВС вымывалась и на месте включений ПВС образовывались пустоты.

II p и м е р 6 (контрольный). Опыт проводят по примеру 1, но приготовление срезов осуществляют на 70-.градусном спирте с температурой 26+3 C.

В этом случае срезы не расправлялись и исследование морфологической картины под микроскопом невозможно было проводить.

Пример 7 (контрольный). Опыт проводят. по,примеру 1, но срезы дифференцируют в 60 градусном спирте. В результате дифференцировки происходит окрашивание фона, что затрудняет оценку вложений ПВС.

Пример 8 (контрольный). Опыт проводят по примеру 1, но срезы дифференцируют в 80-градусном спирте. В результате дифференцировки происходит быстрое вымывание фона, что затрудняет оценку отложений ПВС.

Пример 9. Приготавливают на замораживающем микротоме срезы почек толщиной 14 р, фиксацию осуществляют в фиксирующих растворах, состоящих из сульфата аммония и насыщенного раствора периодата„ калия в соотношении

1:1, в которые добавляют йодистый калий, последующую фиксацию проводят в 107.-ном водном растворе нитрата уранила, в который добавляют кристаллический иод. После этого срезы обрабатывают последовательно следующими растворами.

I раствор — 3 ч. абсолютного спир. та + 7 ч. ксилола, II раствор — 1 ч. абсолютного спирта + 9 ч. ксилола

III раствор — ксилол.

Смена растворов идет через 30 мин, .во все растворы введен кристалличес кий йод. Окраска происходит во время

1185

Составитель В.Головин

Редактор М.Бандура Техред А.Ач Корректор А.Зимокосов

Заказ 6353/36 Тираж 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãoðîä, ул.Проектная, 4 всей фиксации гистологического материала. Затем срезы заключают в канадский бальзам.

В результате из-эа толщины срезов затруднено распознавание мест отложений ПВС в морфологических структурах; из-эа частичного вымывания полимера наблюдались пустоты в гистологическом срезе почек.

Пример 10. Крысам самцам 10 вводили однократно внутрибрюшинно

10 -ний раствор ПВС с ММ 10000-12000 с содержанием ацетатных групп 5-15 .

Окраску серийных срезов почек и селе зенки производили по методу Янксо в 15 модификации В.П.Теодоровича и по предлагаемому способу (см.пример 1).

В результате окрашивания гистологических серийных срезов по предлагаемому способу в просветах капилляров 20 клубочков и извитых канальцев почек, а также в области красной пульпы селезенки обнаруживали капли ПВС во всех серийных срезах. При использовании метода Янксо в модификации 25

В.П.Теодоровича были видны только отдельные капли полимера в единичных срезах. Количество выявленного ПВС по методу Янксо в модификации

В.П.Теодоровича составило 20-30 от gp содержанич ПВС на срезах, окрашенных предлагаемым способом. Во всех срезах использован для окраски 1Х-ный водный раствор конго красного.

О непригодности 0,5 и 1,5 -ных водных растворов конго красного свидетельствуют такие примеры.

Пример 12 (контрольный).

Опыт проводят по примеру 1, но срезы помещают в 0,5 -ный водный раствор

40 конго красного на 3 мин. Концентрация раствора недостаточна для окра162 4 шивания морфологических структур, содержащий ПВС, а дифференцировка обеспечивает гистологические срезы.

Пример 13 (контрольный).

Опыт проводят по примеру 1, но срезы помещают в 1,5Х-ный водный раствор конго красного на 3 мин. В результате опыта происходит интенсивное диффузионное окрашивание фона среза и отдифференцировать отложения

ПВС оказалось невозможным.

Использованный в способе спиртоформол представляет собой смесь 9 ч.

96Х-ного спирта и 1 ч. 40Х-ного формалина.

Во всех примерах конкретно указаны органы животных (печень, почки), а также дано формологическое описание отложений ПВС даже в тех случаях, ког. да полимер откладывается в виде единичных капель.

В контрольных примерах в каждом случае указано,iz чему приводит нарушение режимов обработки гистологического материала.

Преимущества предлагаемого способа состоят в том, что благодаря минимальному контакту гистологического материала с водой в процессе проводки, фиксации и окраски ПВС не вымывается и мы обнаруживаем его полностью. Кроме того, исключается использование дефицитного, токсичного и радиоактивного нитрата уранила. Иэ-за химической токсичности естественного урана вдыхание урана любого изотопного состава в растворенной форме не должно превышать

2,5 в сут., а поглощение растворимого урана с пищей не должно превышать

150 мг в сутки.

Вместо четырех осевых реактивов используется один реактив — конго красный.