Способ получения биомассы с днк-лигазной активностью
(19)SU(11)1179659(13)A1(51) МПК 5 C12N9/00(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯк авторскому свидетельствуСтатус: по данным на 17.01.2013 - прекратил действиеПошлина:
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ С ДНК-ЛИГАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
Изобретение относится к способам получения биомассы с активностью ДНК-лигазы (полинуклеотидлигазы, КФ.6.5.1.1). Целью изобретения является увеличение биосинтеза ДНК-лигазы за счет предотвращения эмминации гибридной плазмиды у дочерних клеток. Приготовление посевного материала. Исходную культуру E. coli ВКМ В-1449Д пересеивают в чашку Петри с селективным фактором (ампициллин 30 мкг/мл) и выращивают при 30оС в течение 18 ч. Культуру из чашки Петри пересеивают в пробирку с 10 мл мясо-пептонного бульона и выращивают на качалке при 30оС в течение 4 ч. Полученной культурой засеивают колбы, содержащие 350 мл среды следующего состава, г/л: Дрожжевой автолизат, мл/л 10 Глюкоза 5,0 MgCl2 5,0 KH2PO4 4,5 Na2HPO4 23,0 (NH4)2 SO4 8,0 Пептон 20,0 р-р микроэлементов, мл/л 10
рН среды 6,7-6,9. Выращивание инокулята проводят в колбах на качалке 180-200 об/мин при 30оС в течение 12 ч. Ферментация культуры производится после добавления инокулята из расчета 20 мл инокулята на 1 л питательной среды следующего состава, г/л: Дрожжевой автолизат, мл/л 3,0 Глюкоза 1,0 MgCl2 1,0 KH2PO4 3,0 Na2HPO4 16,0 (NH4)2SO4 3,0 Пептон 10,0 р-р микроэлементов, мл/л 5,0
Ферментацию проводят при 40оС при перемешивании и аэрации, обеспечивающей концентрацию растворенного кислорода в среде рО2 30-40% в течение начальных 2 ч и рО2 50-60% до окончания ферментации, рН поддерживают в пределах 6,9-7,1 10% -ным раствором NaOH. Процесс заканчивают в конце экспоненциальной фазы роста. Выход биомассы 4 г/л, активность ДНК-лигазы 50000 ед/г биомассы 2 105 ед/л культуральной жидкости.
Формула изобретения