Способ определения состояния противокоревого иммунитета

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ПРОТИВОКОРЕВОГО ИММУНИТЕТА путем выявления специфических антигемолизинов в сыворотках крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, упрощения и сокращения времени исследования, выявление специфических антигемолизинов осуществляют при 45±1°С в течение 1,5-2 ч в реакции задержки прямого гемолиза, при этом используют стабильный гемолизирующий антиген , полученный обработкой вируссодержащей жидкости твином-эфиром.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 А 61 К 39 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМЪ(СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3618589/28-14 (22) 03.06.83 (46) 30.08.85. Бюл. № 32 (72) Т. А. Мамаева, Н. Т. Тихонова и Г. Б. Данилова (71) Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г. Н. Габричевского (53) 615.373 (088.8) (56) Norrby E.-Separasion of messles virus

componen tes by eguilib rium cen tryf ugasion

in CsC1 gradients. J. Crude and Tween and

ether treated concentrated tissue culture material — Arch. ges. Virusrorsh., 1964, 14, 3, р. 306 — 318.

„„SU„„1175487 A (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ПРОТИВОКОРЕВОГО ИММУНИТЕТА путем выявления специфических антигемолизинов в сыворотках крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, упрощения и сокращения времени исследования, выявление специфических антигемолизинов осуществляют при 45 -1 С в течение 1,5 — 2 ч в реакции задержки прямого гемолиза, при этом используют стабильный гемолизирующий антиген, полученный обработкой вируссодержащей жидкости твином-эфиром.

1175487

Зо

40

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для определения состояния противокоревого иммунитета у людей, больных и переболевших корью, у привитых коревыми вакцинами, а также у экспериментальных животных.

Целью изобретения является повышение точности определения, упрощение и сокращение времени исследования.

Способ осуществляется следующим образом.

В реакции используют не живой вирус кори, а коревой гемолизирующий антиген, полученный из суспензии живых вирусных частиц путем обработки ее твином-эфиром по методу Norrby, а контакт антигена исследуемой сыворотки и эритроцитов обезьян проводят в течение 1,5 — 2 ч при 451-1 С.

При обработке твином-эфиром гемолитическая активность увеличивается в 10 — 20 раз по сравнению с исходной, в результате чего получают коревой антиген, обладающий способностью вызывать полный лизис эритроцитов обезьян, что является основой разработки нового способа определения состояния противокоревого иммунитета — реакции задержки прямого гемолиза (РЗПГ).

Определение титра противокоревых антигемолизинов в испытуемой сыворотке проводят в РЗПГ с 2 гемолитическими единицами коревого антигена, с 5g-ной взвесью эритроцитов обезьян, при инкубации смеси при 451-1 С. Учет реакции осуществляется сразу же после наступления полного гемолиза в контроле антигена, представляющего смесь двух гемолитических единиц антигена и 5Я взвеси эритроцитов обезьян. За титр антигемолизинов в испытуемой сыворотке принимают ее наивысшее разведение, вызывающее видимую задержку гемолиза по сравнению с полным лизисом в контроле антигена.

По сравнению с прототипом в реакции задержки гемолиза (РЗГ) разработанный способ определения состояния противокоревого иммунитета — РЗПГ, более прост в исполнении. Твином-эфиром обрабатывается исходная культуральная вируссодержащая жидкость, а не концентрированный вирус и, следовательно, исключается необходимость использования ультрацентрифуг. Учет результатов проводится визуально без применения спектрофотометров, что не только упрощает метод, но и существенно снижает время проведения исследований. Время, затрачиваемое на постановку и учет реакции, сокращается также за счет повышения температуры инкубации смеси антигена, исследуемой сыворотки и эритроцитов обезьян до 45+-1 С, что позволяет уменьшить время контакта до 1,5 — 2 ч.

Полученный гемолизирующий антиген стабилен и высокоактивен, что повышает точность определения специфических антигемолизинов в сыворотках не менее чем на 10Я. Так, при обследовании 198 детей в возрасте 6 — 10 лет, привитых живой коревой вакциной Л-16 (ЖКВ Л-16) 3 — 8 лет назад, специфические антигемолизины выявлены в РГЗ (1) у 96 детей (48,4Я), в РЗПГ у 127 детей (64,1Я). При обследовании 52 детей в возрасте от 1 до

3,5 лет, не болевших корью и не привитых против этой инфекции, противокоре. вые антигемолизины не были выявлены ни с помощью известного, ни с помощью разработанного способов. На 20 — 27 день после введения этим детям ЖКВ Л-16 противокоревые антигемолизины выявлены в

РЗГ в сыворотках 37 детей (71,1Я), в РЗПГ

У 43 детей (82,7 Я) .

Пример 1. Больная М., 19 лет, поступила в 1 КИБ г. Москвы с подозрением на корь (Юа истории болезни 5907). С целью подтверждения клинического диагноза больная обследована на 3 и 10 день с момента появления сыпи. С помощью РЗПГ в первой сыворотке п ротивокоревые антигемолизины выявлены в титре 1:16, во второй — 1:512.

Более чем 4-кратное нарастание титра противокоревых антител подтвердило правильность клинического диагноза.

Пример 2. При обследовании В. Е.

1975 года рождения до и после введения

ЖКВ Л-16 с помощью РЗПГ установлено, что до вакцинации ребенок не имел в крови противокоревых антигемолизинов, на 27 день после введения вакцины специфические антитела выявлены в титре 1:160. Результаты обследования свидетельствуют о формировании у данного ребенка поствакцинальной невосприимчивости к вирусу кори.

Следовательно, предлагаемый способ позволяет оценить состояние противокоревого иммунитета при заболевании и вакцинопрофилактике.

К настоящему времени с помощью данного способа обследовано 171 человек в возрасте от 1 r до 33 лет, больных корью, 67 человек в возрасте 45 — 60 лет, переболевших корью в раннем детстве, 296 человек в возрасте от 1 г до 16 лет, привитых ЖКВ Л-16, и 52 ребенка в возрасте от 1 г до 3 5 лет, не болевших корью и не привитых ЖКВ (контрольная группа).

Всего исследовано 757 сывороток. Установлено, что заболевание корью и введение

ЖКВ Л-16 приводит к интенсивному синтезу противокоревых антигемолизинов, которые обнаруживаются в течение длительного периода времени после заболевания или вакцинации. Однако у 23Я привитых противокоревые антигемолизины не выявляются через 4 — 6 лет после вакцинации, что свидетельствует о возможности утраты с годами

1175487

Составитель Г. Крюкова

Техред И. Верес Корректор М. Самборская

Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )К вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП <Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Т. Митейко

Заказ 5247j6 поствакцинального противокоревого иммунитета у некоторых привитых детей.

Таким образом, предлагаемый способ определения состояния противокоревого иммунитета позволяет выявлять иммунных и неиммунных к вирусу кори лиц среди разных контингентов населения, при этом отличается простотой и легкостью постановки и учета реакции, сокращается время проведения исследований, а получение стабильного активного гемолизирующего антигена увеличивает точность исследований не менее чем на 10Я.