Способ определения супрессорной активности лимфоцитов, подавляющих образование реагинов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУПРЕССОРНОЙ АКТИВНОСТИ ЛШФОЦИТОВ, ГОДАВЛЯЩИХ ОБРАЗОВАНИЕ РЕАГИНОВ, включающий совместное введение животнымреципиентам клеток-супрессоров с клетками-продуцентами, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, интактному реципиенту внутрикожно вводят при соотношении 2:1 клетки-супрессоры и 210 клеток-продуцентов, полученных через 48-72 ч после внутр1йр ошинного введения 0,2 мл аллергена пыльцы амброзии , и через 24 ч определяют содержание реагинов в месте введения клеток.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (w ® (> >i

I . (51)4 А 61 К 39/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМ У СВИДЕТЕХЗЬСТВЪ а !

4 ! с.

f

E (21) 3282282/28-13 (22) 24 ° 04.81 (46) 23.07.85. Бюл. Ф 27 (72) З.В. 11оллинг и Л.А. Дюговская (71) Киевский научно-исследовательский институт отоларингологии им. проф. А.И. Коломийченко (53) 615. 373 (088. 8) (56) Int. Archs Al 1 erg арр1.

Immunol, 1977, 53, В 5, р. 395-401. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУПРЕССОРНОА AKTHBHOCTH ЛИИфОДИ ОВ, IIOgASЛЯЮЩИХ ОБРАЗОВАНИЕ РЕАГИНОВ, включающий совместное введение животнымреципиентам клеток-супрессоров с клетками-продуцентаик, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, интактному реципиенту внутрикожно вводят при соотношении 2: 1 клетки-супрессоры и

2 10 клеток-продуцентов, полученнык

6 через 48-72 ч после внутрибрюшннного введения 0,2 мл аллергена пыльцы амброзии, и через 24 ч определяют содержание реагинов в месте введения клеток.

1168256

Составитель В. Дроздов

Техред Т.Фанта

Корректор В. Синицкая

Редактор О. Юрковецкая

Заказ 4536/8 Тираж 722

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицине, в частности иммунологии.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа.

Пример. Мьппей линии СВА имму- 5 ниэируют внутрибрюшинным введением

0,2 мл аллергена пыльцы амброзии, содержащего 10 000 PNU/ìë. Через 4872 ч животных забивают для получения клеток, селезенку или брыжеечные лим- 1О фоузлы диспергируют с помощью препаровальных игл, фильтруют через нейлоновый фильтр, клетки селезенки освобождают от примеси эритроцитов путем "шокирования" дистиллированной водой, дважды отмывают средой 199 и ресуспендируют в ней клетки, доводя конечную концентрацию до 4 10 в 1 мл.

Аналогичным образом получают клетI ки тимуса йнтактных животных (конеч- 20 ная концентрация тимоцитов 8х10 кле7 ток в 1 мл). Супрессорную активность индуцируют путем инкубации тимоцитов с неполипептидным диализабельным фактором тимуса в течение 1 ч при 37 С.

После двукратного отмывания 4х10 ти6 моцитов в объеме 0,05 мл н 2х10 клеь ток-продуцентов Ig P -антител в том же объеме среды 199 смешивают в одном шприце и вводят внутрикожно интакт- 30 ным крысам (нли мышам) — реципиентам.

Метод, включающий внутрикожное введе,ние клеток продуцентов, позволяет выявить только клетки, образующие антитела, поскольку только иммуноглобули.-з5 йы этого класса способны длительно сенсибилизировать кожу. В качестве контроля вводят аналогичное количество клеток-продуцентов, смесь клетокпродуцентов и нормальных необработьн1 ных тимоцитов и клетки селезенки или лимфоузлов неиммунизированных мьпней.

Учет реакции проводят через 24 ч, сопоставляя у1астни посинения на внутренней поверхности кожи реципиентов в месте введения клеток через

40 мин после внутривенной инъекции смеси, состоящей иэ 0,5 мл З -ной синьки Эванса и 0,5 мл пыльцевого аллергена амброзии, содержащего

20 000 PNU/Mé.

Диаметр посинения в месте введения клеток-продуцентов (2х10 )

5,3+0,7 мм, в месте введения интактных тимоцитов и клеток-продуцентов6,1+0,4 мм, в месте введения продуцентов Igf -антител и клеток-супрессоров — не более 1 мм, такое же посинение отмечено и в месте введения клеток неиммуниэированных животных.

Таким образом, предложенный способ позволяет уже в течение 3-4 дней тестировать супрессорную активность лнмфоцитов, подавляющих образование реагинов. При этом на одном и том же животном, используя одни и те же клетки-мишени (в данном случае тимоциты), можно тестировать супрессорную активность, индуцированную различными исследуемыми веществами, что позволяет использовать метод не только для изучения механизмов образования ЕрЕ -антител в эксперименте, но и использовать его в клинике для отбора препаратов, подавляющих образование Ig t -антител, обусловливающих развитие аллергии немедленного типа.