Штамм @ @ лу-122-продуцент декстрана,обладающего иммуностимулирующим действием

 

Штамм Leuconostoc dextranicum Лу-122 ВКМ В1526Д (Всесоюзная коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР) - продуцент декстрана, обладающего иммуностимулирующим действием .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

И

РЕСПУБЛИК

09) (1И

8 А

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТЮ (21) 3710807/28-13 (22) 15.03.84 (46) 07.01.86. Бюл. У 1 (71) Институт биологической и медицинской химии АМН СССР (72) М.Е.Преображенская и Н.А.Морозова (53) 612.396.11 (088.8) (56) Дволайцкая-Барышева К.М.,Сельцовская Г.С. в ж. "Проблемы гематологии и переливания крови", 1956, У1, с. 47. р 4 С 12 Р 19/08 // С 12 P 19/08

С 12 R 1/00 (54) ШТАММ LEUCONOSTOC DEATRANICUM

ЛУ-122-ПРОДУЦЕНТ ДЕКСТРАНА, ОБЛАДАЮЩЕГО ИММУНОСТИМУЛИРУИЗЦИМ ДЕЙСТВИЕМ. (57) Штамм Leuconostoc dextranicum

Лу-122 ВКМ В1526Д (Всесоюзная коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР) - продуцент декстрана, обладающего иммуностимулирующим действием.

1144378

Изобретение относится к микробиологической промьппленности и касается получения декстрана, обладающего иммуностимулирующим действием.

Известен штамм Leuconostoc mesentегоides СФ-4 — прбдуцент декстрана, обладающего иммуностимулирующим действием.

Однако известный штамм продуцирует декстран, обладающий слабым имму- 1О ностимулирующим действием.

Цель изобретения — штамм, продуцирующий декстран - с павьппенным иммуностимулирующим действием.

Эта цель достигается с помощью 15 ,штамма Leuconostoc dextranocum ЛУ-122.

Штамм Leuconostoc dextranicum

Лу-122 выделен с плодов винограда .

Депонирован по Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и 20 физиологии микроорганизмов АН СССР под номером BKM В1526Д и характеризуется следующими признаками.

Культурно-морфологические признаки. 25

Мелкие кокки О, 5-0, 6 1, 2-1, 6 мкм, собраны в пары или цепочки по 3-8 клеток. Грамположительны.

На средах, содержащих сахарозу, образуют слизистую капсулу, непод вижные.

На среде, содержащей 0,5 г дрожжевого экстракта, 0,25 г триптона, 0,25 г К НРО, 10 r глюкозы, 2 г агара и 100 мл дистиллированной воды, З образует гладкие серовато-белые округлые колонии диаметром 0,7-1,0 мм.

На среде того же состава с 2 r сахарозы (беэ глюкозы) образует слизистые, мутно-белые полусферические колонии диаметром 1,5-2,0 мм.

Физиолого-биохимические признаки.

Аэроб. Оптимум температуры 23

2ф С, Оптимум рН среды 7,0-7,2..

Растет на средах, содержащих пептон, дрожжевой автолизат и витамины.

На -картофеле не растет.

Крахмал не гидролизует.

Перекись водорода не разлагает. .Желатину и агар не разжижает.

Глюкозу, сахарозу, фруктозу, маннозу сбраживает до кислоты.

Не сбраживает маннит и сорбит.

Усваивает без образования кислоты арабиноэу, ксилозу, мальтозу, лактозу, галактозу, мелецитозу, рафинозу.

Пример. Для получения декстрана 20-30 мп живой культуры переносят в среду следующего состава, г:

КС f О, 1; МД804 7Н О О, 1; КН РО4

1,75; Иа НРО 12Н О 4; ЙН4С 3 0,5;

Fe (NH„) „S04 6Н О О, 01; парааминобензойная кислота 0,05; пептон

1,0; дрожжевой автолизат О, 1 мл, сахароза 100; дистиллированная вода до 1 л; рН среды доводят до 7,2 с помощью 1Н. NaOH и выращивают при

25 С 48-72 ч. В процессе выращивао ния рН среды падает до 4,2, что является признаком окончания биосинтеза, Для выделения декстрана культурамьную жидкость разводят водой в два раза, добавляют этанол до концентрации 25 по объему и смесь оставляют в холодильнике на 3 ч. Смесь центрифугируют (1800 g ° 30 мин) осадок отбрасывают, к раствору добавляют этанол до концентрации 40 по объему и оставляют на ночь в холодильнике. Выпавший в осадок декстрана отделяют центрифугированием, промывают 40Х-ным этанолом, дважды переосаждают и высушивают лиофильно. Выход составляет 15-20 г /30-40 / от теоретического.

Полученный декстран хорошо раство. рим,в воде. В концентрации 1-5 дает голубоватый опалесцирующий раствор.

Удельное вращение / at. / = +219(С =

1,0 в формамиде). При полном гидролизе образуется только глюкоза. По данным метилирования и С-ЯМРи спектроСкопии содержит 75Х глюкозных остатков, соединенных -1,6-гликозидными связями и 25 глюкозных остатков, соединенных ж -1,2-гликозидными связями, расположенными в точках ветвления молекулы.

Проверку иммуностимулирующего действия декстрана проводят по двум критериям.

1. Увеличение фагоцитарной активности макрофагов. и

Декстран в дозе 0,2 мг вводят внутрибрюшинно белым мьппам весом 1820 г. Через 1,3,5,и 10 сут макрофаги брюшной полости извлекают и инкубируют с суточной культурой Staphylococcus aurt;ns.

На каждый срок берут 5 подопытных и 5 контрольных животных. Через 3 сут. после инъекции декстрана наблюдают увеличение фагоцитарной активности макрофагов в 3,.9 раза по сравнению с контролем. Фагоцитарный индекс возрастает в тот же срок в 4,6 раза.

1144378

Составитель

Редактор Л.Письман Техред М.Пароцай

Корректор М.Иаксимишинец

Заказ 8555/5 Тирах 524 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, R-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðoä, ул.Проектная,4. 2.Увеличение неспецифической резистентности к инфекции. Декстран вводят внутрибрюшинно белым мышам весом 18- 22 r по 0,4 мг в 0,2 мл . физиологического раствора. Контрольной группе мышей вводят физиологический раствор в том же объеме. Через

24 ч обе группы мышей заражают патогенным штаммом кишечной палочкц

Е.cori 094 в дозе, вызывающей гибель

957. животных в контрольной группе.

Гибель животных наблюдают в течение

5 сут.

В опытной группе из 110 мышей выжило 85, погибло 25. Процент выживаемости в этой группе 77+4X, В контрольной группе из 90 мышей выжило 4, погибло 86. Процент выживания в этой группе 4+2X °

Проверка влияния полученного и из"вестного декстранов на неспецифическую резистентность к инфекции у мышей показывает, что выживаемость мышей под действием полученного декстЦ рана увеличивается на 197 (25+2X против 6g1X прототипа).

Использование изобретения позволяет повысить иммунологическую

15 активность декстрана; à также

его выход.