Штамм @ . @ @ 853,содержащий гибридную плазмиду @ 4- продуцент 3,5-циклического аденозинмонофосфата

 

Штамм Е. coli L BG 853, содержащий гибридную гшазмиду р TG 4, № 287 (коллекция Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им . Н.Ф. Гамалеи АМН СССР) продуцент З, 5-циклического аденозинмонофосфата .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

РЕСПУБЛИН (191 (111

3(511 C 12 N 15/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬС ГВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3612698/28-13 (22) 29.06.83 (46) 07.08.84. Бюл. М- 29 (72) В.Н. Гершанович, Т.А. Гольцмайер и М.Н. Розинов (71) Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного акад. H.Ô. Гамалеи (53) 576.8(088.8) (56) 1. Fraser А.D. Vamazani Н."Сап Е.

Biochem", 1978, Р 56, 849-852, (54) ШТАММ Е.COLT L BG 853, СОДЕРЖАЩИЙ

ГИБРИДНУЮ ПЛАЗМИДУ P TG 4 — ПРОДУЦЕНТ

3,5 -ЦИКЛИЧЕСКОГО АДЕНОЗИНМОНОФОСФАТА. (57) Штамм Е. coli L BG 853, содержащий гибридную плазмиду р TG 4, Р 287 (коллекция Ордена Трудового Красного

Знамени научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи АМН СССР) продуцент 3,5 -циклического аденозинмонофосфата.

110б836 ми.

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и медицине, в частности к получению 3,5 -циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) путем микробиологического синтеза.

ГАМФ широко используется в клинической практике в диагностических целях, в частности при диагностике патологических состояний нервной системы (эпилепсии, шизофрении и др.). Определение содержания цАМФ в крови, цереброспинальной жидкости и т.д. является важным диагностическим признаком. Кроме того, этот циклический нуклеотид необходим в научных ис- 15 следованиях, связанных с изучением бактериальных и эукариотических аденилатциклаз.

Известен штамм-продуцент цАМФ, полученный на основе введения мутации 20 по белку CRP в штамм Е. coli (1 ).

Однако известный штамм характеризуется низкой продукцией .цАМФ0,12 мг/мл.

Цель изобретения — создание генно- 5 инженерным способом высокопродуктивного штамма-продуцента цАМФ, непатогенного для человека и животных и нетребовательного к питательным средам. ЗО

Предлагаемый штамм L BG 853, содержащий гибридную плазмиду р Т G 4, продуцирует в среду в 10 раз больше цАМФ по сравнению с известным штаммом-продуцентом.

Этот штамм создан на основе Е. coli К- 12, которая не может колонизи ровать тонкий кишечник животных и человека. Штамм содержит гибридную плазмиду р TG 4, которая несет ген 40 аденилатциклазы E. со1i.

Указанная гибридная плазмида р TG 4 создана на основе мультикопий" ного вектора р ВР 325 и содержит вставку J1HK в pst 1 сайте размером

3,6 Мд. Количество копий плазмиды р TG 4 составляет около 15-18 в расчете на одну бактериальную хромосому.

Штамм L BG 853 содержит мутацию по структурному гену сгр. Совмещение 50 мутации ло белку СРР и гибридной плазмиды в одном штамме делает его значительно более продуктивным: содержание цАМФ в среде достигает более высокого уровня по сравнению с бесплазмидным 55 штаммом.

Получе«ный штамм хранится в музее культур н лиофили зиро«а««см виде в

Ъ лаборатории генетической регуляции биохимических процессов ИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи AMH СССР под регистрационным номером 287.

Характеристика штамма, Морфологические признаки.

Клетки прямые палочковидной формы, 1,1-1 5х2,0-6,0 мк, подвижные с перитрихальными жгутиками, граммотрицательные, неспорообразующие.

Культуральные признаки.

Индикаторная среда МакКонки с мальтоэой (1 ). Колонии светло-розового цвета, блестящие с гладкими краями, через 24 ч культивирования достигают

1,5-2 мм в диаметре. Среда Хоттингера.

Мелкие компактные колонии с ровными краями. Через 24 ч культивирования достигают 1,5 мм в диаметре. Среда

M-9 с триптофаном (50 мкг/мл), аденином (20 мкг/мл) и глюкозой (2 r/ë), Колонии светло-серого цвета, мелкие компактные с ровными краяФизиолого-биохимические признаки.

Оптимальная температура культивирования 37 0. Бактерии в качестве источника азота используют минеральные соли в аммонийной и нитритной форме, а также органические источники азота, такие как пептиды, аминокислоты. Желатину не разжижают. Индола не образуют. Устойчивы к тетрациклину и хлорамфениколу. Непатогенны

I для лабораторных животных и человека.

Для количественного определения цАМФ в культуральной среде используют набор реактивов для определения цАМФ фирмы "Амершам" (Англия).

Пример.Штамм L BG 853,содержащий гибридную плазмиду р TG, 4 выращивают на минимальной синтетичес" кой среде M-9 с казаминовыми кислотами и глюкозой (0,5 ). Через 24 ч о культивирования с аэрацией при 37 С определяют содержание цАМФ в среде.

Для этого используют набор реактивов для определения цАМФ фирмы "Амершам".

Процедуру по определению концентрации цАМФ проводят в соответствии с прилагаемой фирмой прописью. В случае штамма L BG 853, содержащего плазмиду р TG 4, содержание цАМФ в среде составляет 1,1 мг/мл.

Таким образом, непатогенность и высокая продуктивность преплагаемого, Составитель В. Кузьмичев

Редактор Г. Волкова Техред Ж.Кастелевич Корректор Д. Мельниченко

Заказ 5724/20

Тирак 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Укгород, ул. Проектная, 4 з 1 штамма делает его перспективным для производства цАМФ путем микробио", логического синтеза. Среда для

106836 4 культивирования относительн недорогая н проста. по,соста" ву