Штамм дрожжей @ @

 

ШТАММ ДРОЛОКЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE ВКМ У-2449Д (коллекция Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР) , предназна чеиный для выявления у дрожжей генетической информации, детерминируняцей киллерные свойства.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) -4 1 (Я) ф С 12 Х 1/О

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬГП4Й

ОПИСЛНИК ИЗ0Б ЯтСНил

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3368214/30-15 (22) 10.12 81 (46) 23.11.85.Бкл.№ 43 (71) Институт ботаники АН Лит ССР (72) Д.А.Лауринавичене и T.Ô.Éîêàí тайте (53) 663.13/14 (088.8) (56) Нестерова Г.Ф. Инфекция прорастающих спор Saceharomyres cerevisiae цитоплазматическим фактором К."Генетика", т.10, ¹ 6, 1974, с.78-82.

Наумов Г.И., Наумова Т.И. Сравнительная генетика дрожжей. "Генетика", т.9, № 11, 1973, с.140-145. (54) (57) ШТА1Я ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE ВКИ У-2449Д (коллекция

Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР), предназначенный для выявления у дрожжей генетической информации, детерминирующей "киллер-, вые" свойства.

1061461

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетики, в частности к получению нового тестерного штамма дрожжей, и может быть использовано в микробиологической промышленности, иммунологии, эколо гии.

Известны штаммы, например Saccharomyces cerevisiae S3, SX и 7А-П192, происходящие из. Оксфордской и Петергофской генетических коллекций соот-, ветственно, которые имеют. следующие морфологические и физиологические признаки: штаммы являются гетероталличными, относимыми к,а и к 1, типам спаривания. Споруляция у них отсутствует. Клетки овальной формы размером {3,12+0,11) х (3,42 + 0,12) мк.

Штамм . 83 сбраживает сахарозу, рафинозу, мелибиозу и не сбраживает галактозы и мальтозы, а $Х сбражи-. вает сахарозу, рафинозу, мелибиозу, мальтозу и не сбраживает галактозу.

А 7А- П192 сбраживает мальтозу, сахарозу, рафннозу, галактозу fl) .

Однако эти штаммы обладают малой чувствительностью к киллерным штаммам типов .К, KV и образуют зоны лизиса размером. 3-4 мм.

Наиболее близким по чувствительности к штаммам — убийцам К, К и

KV является штамм Saccharomyces cerevisiae SBY 2576, происходящий иэ коллекции Национального агрономического инс титута (Мадрид), имеющий следующие морфологические и физиологические признаки: он является гомо- талличным. образующим двухспоровые, трехслоровые и четырехспоровые аски.

Форма клеток штамма эллипсоидная, РазмеРом (5, 04+0, 14) х (4, 10+0, 12) мк. . Сбраживает глюкозу, галактозу. Не сбраживает мальтозу, сахарозу, рафиноэу (2J .

Однако штамм Saccharo ces

globosus SBY 2576 также мало чувствителен, его зона ливиса достигает примерно 3-4 мм.

Цель изобретения - получение тестерного .штамма, выявляющего у дрожжей генетическую информацию, детеркщирующую "киллерные" свойства.

Полученный штамм Saccharomyces

cerevisiae ВКМ V-2449 Д имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики.

Штамм является гетероталличным, типа спаривания, споруляция от1О сутствует. Вегетативные клетки овальные (2, 16+0,45) х (2, 16+0,45) мк., Размножается почкованием, На твердых средах образует белые, матовые, выпуклые колонии, которые лежат на поверхности среды. Края колоний ровные. Температура выращивания штамма 26 С. Штамм сбраживает глюкозу, сахарозу, мальтозу„ рафинозу, фруктозу и мелибиозу. Не сбраживает арабинозу, ксилозу, лактозу, галактозу и маннит.

Штамм оказался стабильным при хранении его в холодильнике на среде, содержащей, г/л: пептона 10, глюкозы 20, автолизата дрожжей 5 мп, агара 20; рН 5,8 с пересевом через

I каждые 3 мес. в течение года.

Штамм Saccharomyces cerevisiae

BKM У-2449 Д получают следующим образом. При воздействии ультрафиолетовыми лучами (2 бактерицидные лам. пы БУФ-15 в расстоянии 55 см, в течении 1 мин,, доза облучения составляет примерно 3000 эрг/мин/мм / на

5 мл суспенэии клеток штамма Sacchaгошусез cerevisiae 11 2 густотой

1i10 расположенной на чашке Петри

6 диаметром 90 мм, получают мутант, обладающий одновременно нейтральЗО костью к штаммам-убийцам типа К1 и штаммам-убийцам типа К и KV.

В результате спонтанного митотического расщепления мутанта получают. штамм ВКИУ-2449Д, проявляющий новые свойства чувствительности к штаммам-убийцам типов К и KV, т.е. уже через сутки на газоне чувствительного тестера BKM У-2449Д от штрихов

40 штаммов-убийц типа К и KV образу- . ются зоны лизиса размером до 5-7 мм., По отношению к штаммам-убийцам типа К мутантный штамм обладает исходным фенотипом, присущим. штамму

Saccharomyces cerivisiae Р 2, т.е. он является устойчивым к штаммам-убийцам типа К . Мутантный штамм обладающий чувствительностью, позволяет идентифицировать у штаммов-убийц типа KV ядерный ген MV действие которого приводит к появ-. лению фенотипа, обладающего слабой убивающей активностью, тестируемой только на газоне штамма BKN Y-2449Д

M и не проявляющегося при использовании повсюду принятых чувствительных; тестерных штаммов. Используя штамм

BKM Y-2449Д в качестве тестера, t

Корректор И. Самборская

Редактор Л.Письман Техред М. Гергель

Заказ 7039/4 . Тираж 524, Подписное.

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г,Ужгород, ул.Проектная, 4

3 10614 штаммы Saceharomyces globosus

SBY 2576 и Saccharomyces. cerevisiae,. . 7А-П192, ранее охарактеризованные как чувствительные штаммы, обладают слабой убивающей активностью, зона лизиса достигает примерно 1мм.

Изучение антагонизма у дрожжей имеет как теоретическое,: так и прикладное значение. Многие дрожжевые производства нестерильны, но к ним 10 предъявляется требование минимального заражения посторонней .микрофлорой.

Штамм ВКМ У-2449Д может быть использован при отборе производствен- 15 ных штаммов, обладающих феноменом .. убийства клеток, определяющим конкурентноспособность промышленных .штаммов по отношению к диким, загрязняющим производство. С другой сторо 20 нш, известно, что производственные штаммы дрожжей Сапйз.йа, используемые при .производстве кормового белка, недостаточно конкурентноспособны и

: в производственнык популяциях вы- 25 тесияется дикой микрофлорой.

Штамм ВКИ У-2449Д может быть ис пользован в качестве тестера при идентификации гибридных векторных

61 4 плазмид, обладающих феноменом убийства, которые методами генной инженерии могут быть переданы производственным штаммам несовершенных.дрожжей СапйЫа, используемым в производстве кормового белка, для повышения их конкурентноспособности в производственных популяциях.

Установлено, что количество двухцепочечной РНК штамма прямо пропорциональна величине эоны лизиса на газоне штамма ВКМ У-2449Д при этом двухцепочечная РНК,является од- ним из индукторов образования интерферона в организме.

Поэтому штамм ВКН У-2449Д может бцть использован для поиска дрожжевых штаммов-продуцентов, обладающих интерферогенными свойствами.

Особенности штамма ВКМ У-.2449Д— как чувствительного. тестера выявляются при 26 С на забуференной (рН-4,8) среде, содержащей в 1 г: пепетона 5 г, глюкозы 40 г, .Яа НРО 2 Н О 17,8 г, лимонной. кислоты 10,5 г, метиленовой сини

0,03 r, дрожжевого автолизата 5 мп. .Для переноса-дрожжей использовали метод отпечатков Ледербергов.