Состав для получения изолированных клеток кожи человека

 

СОСТАВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОЛИРОВАННЫХ КЛЕТОК КОЖИ ЧЕЛОВЕКА, содержащий этиловый спирт

ае ои

ИМОЭ СОВЕТСКИХ ОВАЛ ПМ

РЕСПУБЛИН. =-:". (Я) С 12 Л 5 02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ с;1

4-6 е

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И 0 ГНРЫТИЙ ( (21) 3358492/28-13

: (22) 06. 10.8.2.(46) 23.09.83. Бюл. 9 35 (72) Б.Н. Рапопорт ,(71) Горьковский научно-исследовательский кожно-венерологический, институт (53) 576.8.093(088.8) (56) i, Практическая вирусология.

Под ред. В.Н. Сюрина. М., "Колос", 1970, с. 70.

2. Роскин Г.И. и Левинсон Л.Б.

Микроскопическая техника. М., ИЛ, 1ф57, с. 106 (прототип).

Ъ 1 (54 ) (57 ) СОСТАВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОЛИРОВАННЫХ КЛЕТОК КОЖИ ЧЕЛОВЕКА, содержащий этиловый спирт (96 ), ледяную уксусную кислоту и растворителъ, отлич ающийся тем, что, с целью повышения выхода изолированных клеток, в качестве растворителя он содержит моиоэтиловый эфир этиленгликоля при следующем количественном соотношении ингредиен тов, мас.ч.z

Этиловый спирт (96 ) 9-11

Ледяная уксусная кислота 1-2

Моноэтиловый эфир этиленгли коля

1043166

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения суспензии изолированных клеток тканей.

Известен состав для дезагрегации тканей, представляющий собой 0,250,5%-ный раствор трипсина j1) .

Известен также состав для получения изолированных клеток кожи человека, содержащий этиловый спирт (96О), ледяную уксусную кислоту и 10 хлороформ (2)

Однако известные составы не обеспечивают высокого выхода изолированных клеток.

Целью изобретения является повышение выхода изолированных клеток.

Поставленная цель достигается тем, что в составе для получения изолированных клеток кожи человека, содержащем этиловый спирт (96 ), ледяную уксусную кислоту и растворитель, в качестве растворителя он содержит моноэтиловый эфир этиленгликоля при .следующем количественном соотношении компонентов,мас.ч.:

Этиловый спирт (96 ) 9-11

Ледяная уксусная кислота 1-2

Моноэтиловый эфир этиленгликоля 4-6 . 30

Состав готовят следующим образом. . В склянку с притертой пробкой объемом 200 см наливают 100 см этилового спирта (960), 50 см моноэтилового эфира этиленгликоля и 15 с435 ледяной уксусной кислоты. Полученную жидкость тщательно перемешивают путем равномерного встряхивания в течение 2-3 мин. Смесь хранят в холодильнике при ЗОС.

Пример 1. Берут следующее весовое соотношение: этиловый спирт

9 ч., моноэтиловый эфир этиленгликоля 4ч.,ледяная уксусная кислота 1ч °

В склянку с притертой пробкой объемом 200 см наливают 90 см 45 з

96-градусного этилового спирта, 40 см моноэтилового эфира этилен- . гликоля и 10 см> ледяной уксусной кислоты. Полученную жидкость тщательно перемешивают путем равно-,. 50 мерного встряхивания в течение

2-3 мин. Смесь хранят в холодиль= нике при 3 С.

От участка кожи человека, взято- го при биопсии берут. навеску массой

40-50 мг. Навеску помещают в склянку, заливают 1 см полученной смеси и закупоривают резиновой пробкой

В таком состоянии материал хранят в течение 1 ч при комнатной температуре (около 20 С) . После этого ткань переносят с помощью пинцета в ступку, заливают таким же количеством свежей порции смеси и,растирают пестиком до образования однородной суспензии. Стеклянную палочку диа- 65 метром 3 мм обмакивают в полученную суспензию и образовавшуюся каплю переносят на обезжиренное предметное стекло. Всего на одном стекле размещают 8-10 капель суспензии. 3атем предметное стекло подсушивают при комнатной температуре. (18-25О C) в течение суток. Для наблюдения под микроскопом препарат окрашивают по

Романовскому-Гимзе. Наблюдение ведется под световым микроскопом без покровного стекла или с таковым (для. этого препарат заливается смесью-канадский бальзам-ксилол) .

Может использоваться сухая и иммерсионная система микроскопа (под иммерсионной преимущественно с покровным стеклом). Неокрашенный препарат может храниться неопределенно долгое время. Количество разрушенных клеток составляет 4-5% от числа всех клеток навески.

Пример 2. Берут следующее весовое соотношение: этиловый спирт

10 ч., моноэтиловый эфир этиленгликоля 5 ч., ледяная уксусная кислота

1,5-ч. Смесь готовят согласно примеру 1.

От участка кожи человека, взятого при биопсии>берут навеску массой

40-50 мг. Навеску помещают в склянку, заливают 1 см полученной смеси и закупоривают резиновой пробкой.

В таком состоянии. подсушивают прн комнатной температуре в течение суток. Для исследования под микроскопом полученный препарат окрашивают по Романовскому-Гимз е. Количество разрушенных клеток составляет 4-5% от числа всех клеток навески.

Пример 3. Для приготовления состава компоненты берут в соотноше-, нии:этиловый спирт 11 ч., моноэтиловый эфир этиленгликоля б ч., ледяная уксусная кислота 2 ч.

Состав используют аналогично примеру 1. Количество разрушенных клеток составляет 5-7% от числа всех кле" ток навески.. Данные, подтверждающие повышение выхода изолированных клеток (снижение количества разрушенных клеток), приведены р таблице.

Известный состав .

Предложенный состав

Показатели

Размеры и форма изолированных клеток

Отйошение полностью разрушенных клеток к общему числу изолированHblX Ъ

Значительно изменены за счет сморщивания

Мало изменены

4-5

20-25

1043166

Составитель A. ваныкин

Редактор Г. Волкова Техред A.Áàáèíåö

Корректор A. Повх

Заказ 7264/28 Тираж 523

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/6

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Использование предложенного состава позволяет повысить выход,изолированных клеток на 15-16% за счет снижения количества разрушенных клеток, а также удешевить проводимые исследования.