Способ определения активности препарата интерферона

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОЙТИ ПРЕПАРАТА ИНТЕРФЕРОНА путем иослвдовательного раэведеняя (|ярата с последующим добавлением В те сткультуру клеток и определением активности , отличающийся тем, что, с целью упрощения способа., в соответствующие разведения интерферона добавляют взвесь белого-стафилококка , чувствительного к.интерферону , и определяют активность препарата по 3 адержке роста бактериальной культуры.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ ONNVNt M

РЕСПУБЛИК

3Щ} А 61 К 39 02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ.(21) 3349111/13 .(22) 17..07. 81 .(46) 23.04 .83. Бюл. 9 15 (72) С.Ъ. Печеркина и Л.H.Малеева (71) Пермский -государственный медицинский институт (53) 615 ° 7(088.8) {56) 1, Регламент проиэводства на-тивного препарата человеческого лейкоцитарного интерферона

9 134-69.

1 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ AKTHBHOC

ТИ ПРЕПАРАТА HHTEPCEPOHA путем последовательного раэведения пр4фарата .с последующим добавлением аЖ.:в-тесткультуру клеток и определвЭией активности, о т л и ч а ю щ.и й"с я тем, что, с целью упрощения способа, в соответствующие .раэведения интер.ферона добавляют вэвесь белого-:.стафилококка, чувствительного к.интерферону, и определяют активность пре.парата по эадержке роста бактериальной культуры.

1012914 разведении нитерферона

Антивируснн» титр »

no saарике

ФФ ° культуре клеток контроли

Серии. интерфврона 1 s 2

1гб ° 1г128

1г256

1г512

1г1024 1г2048

1г4096

1г Ь 1116

1г 32

1г4 интер фврон пв куль тура стафил кокка

+ 1г64

+. 1г64

285

+ +

+ +

+ +

286

292

1 128

291

1г64

1:128

294

Ф условныа оеоайаченинг - - нет роста стафилококкаф

"+" -. есть рост стафилококка

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практике производства препарата интерферона.

Известен способ определения актив- . ности препарата интерферона путем последовательного разведения препарата с последующим добавлением его . в культуру клеток, зараженной вирусом и определением активности по задержке цитопатогеннЬго действия 1О (ЦНД) вируса. Г1 )., Однако известный способ сложный, так как необходимо выращивать и поддерживать культуру клеток фибробластов, производить заражение культур 15 клеток живым вирусом и оценивать результат через; 3 сут.

Цель изобретения - упрощение спссоба.

Указанная цель достигается 28м, 26 что при осуществлении слособаМИутем последовательного разведения препарата с последующим добавлением его в тест-культуру. клеток и определением активности в соответствующие разве.дения интерферона добавляют взвесь белого стафилококка,чувствительногО К интерферону, и определяют активность препарата по задержке роста бактериальной культуры. ЗО

Пример. Выращивают культуру белого стафилококка на косом мясопептонном агаре 18 ч при +37 С. Культуру сьывают стерильным мясопептон-.. ным бульоном и бактериальную суспензию переносят в стерильную пробирку.

Суспензию стафнлококков доводят до титра 1 млрд мясопептонныа бульоном по соответствующему бактериальному стандарту мутности.

Разведение препарата интерферона 4О проводят следующим образом. В 10-12 стериальных пробирок разливают мясопептонный бульон по 1,0 мл. В первую пробирку вносят 1,0 мл испытуемОго препарата ннтерферона, растворенного 45 в дистиллированной воде, согласно указанию, имеющегося на ампуле с препаратом. Иэ первой пробирки

1г0 мл.жидкости переносят во вторую пробирку, из второй - в третью ги т.д.

В приготовленные разведения интерферона вносят по 0,1 мл стафилококко вой суспенэии. ПОсле внесения баитерий жидкость в пробирках остается прозрачной.

Опыт сопровождают контролями.

Первым контролем йррверяют ств» рильность испытуемого препарата ин1 р ферона - в пробирку вносят 1,0 мл исходного, растворенного в дйстилли» рованной воде, препарата. Вторым контролем проверяют стерильность мясопептонного бульона — в пробирку вносят 1,0 мл бульона. Третьим контролем проверяют способность культуры стафилококка размножаться в мясопептонном бульоне - в пробирку с 1,0 мл бульона вносят 0,1 мп суспензии стафилококка.

Все пробирки (опытные и контрольные) выдерживают 18 ч в термостате при +37oC. Затем производят учет результатов. В 1-ой и 2-ой контрольных пробирках жидкость должна быть, прозрачной. В 3-ьей контрольной пробирке — рост стафилококка в виде помутнения бульона. В опытных про- . бирках, где препарат интерферона подавляет развитие бактериальной культуры стафилококка, жидкость остается прозрачной, помутнение бульона указывает на рост стафилококка.

После учета результата опыта дают значение о титре препарата интерферона.. 3a антибактериальный титр препарата интерферона принимают то наибольшее раведедие его, которое задерживает развитие культуры стафилококка.

Результаты -титрования 5-и серий нативного препарата человеческого лейкоцитарного интерферона в сравнении с известным представлены в таблице.

1012914

Составитель Г. Крюкова.

Техред. И.Гайду Корректор Ю. Макаренко

Редактор A. Козориз

Заказ 2835/6 Тираж 711 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Из таблицы видно, что антнбактериальный титр препарата интерферона серии 285 соответствует: 1:512, серии 286 - 1:1024, серии 292 — 1г2048) серии 293 — 1:512-, серии 294 — 1:2048.

Как видно из примера, антибактериальные титры всех испытанных серий препарата выше, антивирусных на 4-5

;разведений.

Предлагаемым методом серийных разведений с культурой белого стафило- 10 кокка протитровано 68 серий препарата нативного человеческогс лейкоцитарного интерферона, выпускаемого Пермским НИИВС Во всех случаях антибактериальный титр превышал или соответствовал антивирусной активности испы- . туемых пренаратов интерферона.

Таким образом, предлагаемый спо» соб позволяет повысить точность определения активности препарата интерферона, а также упрощает процесс определения активности препарата.