Устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии
Полезная модель относится к устройствам для получения вирионов хантавирусов, в частности возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), для изготовления противовирусных вакцин. Технический результат от использования предлагаемого устройства заключается в сокращении времени очистки вируссодержащей суспензии от примесных компонентов. Устройство содержит полый цилиндр 1, с входным отверстием 2, и выходным отверстием 3, заполненный агарозой 4.
Полезная модель относится к устройствам для получения вирионов хантавирусов, в частности возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), для изготовления противовирусных вакцин.
В процессе производства вакцин против хантавирусов - возбудителей ГЛПС - необходимо выделить из вируссодержащей суспензии фракцию вирионов и очистить ее от неиммуногенных и слабоиммуногенных примесей: антибиотиков, фрагментов мембран, белков, РНК, ДНК клеток, используемых для культивирования вирусов, а также неструктурных вирусных белков и фрагментов вирионов.
Известно устройство для поучения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающее заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов (CN 1109782),
Известное устройство производит путем очистки вируссодержащей суспензии от примесных компонентов на принципе ионного обмена ввиду использования сорбента, несущего электрический заряд, что приводит к необходимости применения буферных растворов с высоким содержанием соли и, следовательно, к необходимости последующей очистки полученного продукта от солевых добавок.
Технический результат от использования предлагаемого устройства заключается в сокращении времени очистки вируссодержащей суспензии от примесных компонентов.
Указанный технический результат достигается тем, что в устройстве для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающем заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов, вместилище заполнено агарозой марки Sepharose 6 Fast Flow.
Указанный технический результат достигается также тем, что вместилище выполнено в виде полого цилиндра.
На фиг.1 показано устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, на фиг.2 - хроматограмма процесса очистки.
Устройство содержит полый цилиндр 1, с входным отверстием 2, и выходным отверстием 3, заполненный агарозой 4.
Устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии используют следующим образом.
Через входное отверстие 2 в заполненный агарозой полый цилиндр 1 подают определенную порцию вируссодержащей суспензии, включающей, наряду с вирионами хантавирусов, фрагменты мембран, белки, РНК и ДНК клеток, вирусные белки, фрагменты вирионов хантавирусов, а также компоненты питательной среды. Затем подают через то же отверстие буферный раствор. В результате осуществляется гель-фильтраци, в процессе которой из выходного отверстия 3 собирают фракцию вирионов хантавирусов.
Пример.
Вируссодержащую культуральную жидкость получили путем репродуцирования хантавируса Пуумала в монослойной перевиваемой культуре клеток почек зеленой мартышки (Vero). Монослой клеток получили в роллерных бутылях объемом 1 л в среде Игла MEM с двойным набором витаминов и аминокислот и 5% сыворотки крови плодов коров. После заражения монослойных культур для поддержания размножения вируса использовали среду, не содержащую, компонентов сыворотки крови. Сбор вируссодержащей жидкости начинали на шестой день. С одного монослоя клеток получили от 3 до 5 сборов вируссодержащей жидкости. Полученную вируссодержащую жидкость со средним титром 6,0 lg ФОЕ/мл фильтровали через каскад фильтров с рейтингом от 0.6 до 0.22 мкм. Концентрирование осветленной вируссодержащей жидкости проводили на ультрафильтрационных кассетах (Millipore) с молекулярным весом проходимых частиц 100000 Дальтон и площадью 0,2 м2. Вируссодержащую жидкость концентрировали в 70-200 раз. Вирусный концентрат очищали на колонке 2,6/70 с Sepharose 6 Fast Flow со скоростью 7 мл/мин. На выходе из колонки собирали фракцию вирионов вируса Пуумала. На хроматограмме процесса очистки первый пик соответствует моменту времени выхода очищенных вирионов вируса Пуумала, второй и третий пики - моментам времени выхода балластных компонентов (фиг.2).
1. Устройство для поучения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающее заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов, отличающееся тем, что вместилище заполнено агарозой марки Sepharose 6 Fast Flow.
2. Устройство по п.1, отличающееся тем, что вместилище выполнено в виде полого цилиндра.
