Комплект средств для диагностики аллергии

Использование: в области медицины, а именно, в иммунологии при установлении этиологического фактора для последующей профилактики аллергических реакций и, прежде всего, на медикаменты. Сущность полезной модели: Комплект средств для диагностики аллергии, содержит размещенные в коробке, ампулы с лекарством-аллергеном, набор градуированных стаканчиков для промывания полости рта, камеру Фукс-Розенталя, флакон с красителем Задорожного-Дозморова и микроскоп. Комплект средств для диагностики аллергии в соответствии с полезной моделью позволяет простым и доступным способом проводить обследования разных категорий больных (дети, пожилые пациенты, курильщики и др.) для выявления лекарственной аллергии с высокой степенью достоверности получаемых результатов. 2 независ.п.

Изобретение относится к области медицины, а именно, к иммунологии, и может быть использовано при установлении этиологического фактора для последующей профилактики аллергических реакций, прежде всего на медикаменты.

Лекарственная аллергия входит в число пяти наиболее распространенных аллергических заболеваний и составляет 5-8% в структуре всей аллергопатологии.

Аллергические реакции на лекарства, в отличие от других нежелательных побочных реакций, являются непрогнозируемыми, нередко развиваются стремительно и характеризуются значительной тяжестью клинического течения.

Актуальность проблемы лекарственной аллергии с каждым годом возрастает в связи с ростом потребления лекарств, широким распространением самолечения вследствие доступности лекарств и тем, что ежегодно фармацевтическая промышленность выпускает новые высокоэффективные фармакологические средства, обладающие также и сенсибилизирующей активностью.

Исследование этиологии и патогенетических механизмов развития аллергической реакции в организме человека на тот или иной фактор в значительной степени определяет выбор методов последующего лечения больного. При этом снижение возможности или исключение нежелательных последствий применения медикаментов и, прежде всего,

предотвращение развития лекарственной аллергии, является одной из важнейших задач врача-аллерголога.

Все вышеизложенное свидетельствует о том, что в настоящее время в медицинской практике одной из наиболее актуальных задач является создание простых, надежных, удобных для выполнения методов специфической диагностики лекарственной аллергии. Особенно серьезно эта проблема стоит в отношении наиболее часто употребляемых медикаментов: антибиотиков и других антибактериальных препаратов, местных анестетиков, анальгетиков, нестероидных противовоспалительных препаратов.

Известные методы специфической лабораторной диагностики лекарственной аллергии, основанные на выявлении специфических IgE-антител к лекарствам или их метаболитам, а также сенсибилизированных лимфоцитов или медиаторов аллергии (Самойлова Л.Н., Табакова Т.В. «К вопросу о диагностике лекарственной аллергии», Тер. архив, 1992, 64, 10, с.17-24) не являются абсолютно достоверными, результаты их нередко противоречивы. Кроме того, большинство из этих тестов разработаны и применяются для диагностики аллергической реакции только определенного типа и на конкретные лекарственные препараты.

Более часто применяемыми методиками лабораторной диагностики лекарственной аллергии являются методы RAST, ИФА, реакции специфического высвобождения гистамина из базофилов, базофильный тест Шелли - для диагностики IgE-опосредованных реакций; реакции бласттрансформации лимфоцитов и реакции торможения миграции лейкоцитов - для диагностики реакций замедленного типа (там же). Однако эти методы диагностики in vitro более пригодны для изучения механизмов аллергических реакций, чем для повседневной практики. Они являются трудоемкими, дорогостоящими, их выполнение требует специально обученных сотрудников, дорогостоящей аппаратуры и лабораторных животных, а потому эти методы не находят широкого применения для оперативной специфической диагностики лекарственной аллергии в лечебной практике.

Диагностические тесты «in vivo» (кожные тесты, сублингвальный тест, градуированная провокация) имеют неоспоримое преимущество перед лабораторными методами, так как позволяют моделировать иммунные механизмы действия фармакологического вещества на организм пациента. Однако в большинстве своем эти тесты потенциально опасны, т.к. являются провокационными (Kowalski M.L., Makowska J.S. Аспирин-зависимые заболевания органов дыхания. Современные подходы к диагностике и лечению. Allergy Clin Immunol Int - J World Allergy Org Russ Ed, 2/1, 2007 г.), р.13-23).

В то же время эти методы диагностики недостаточно информативны, поскольку лекарство может обладать местно-раздражающим действием и давать ложноположительные реакции

Наиболее близким из известных средств для оперативной диагностики аллергии является подъязычный тест (Энциклопедический словарь медицинских терминов, М., Советская энциклопедия, 1983 г., стр.346), при котором больному вводят аллерген под язык и через 5-25 минут визуально оценивают интенсивность местной аллергической реакции (отек губ, языка, зуд кожи, жжение, гиперсаливация и другие симптомы аллергии). Такой тест применяется преимущественно для диагностики лекарственной аллергии.

Однако, поскольку подъязычный тест проводится с терапевтическими дозами лекарственного препарата и является провокационным исследованием, последствием его может быть системная реакция как аллергического, так неаллергического генеза. Например, известно, что молниеносная фаза анафилактического шока может развиваться в течение 2-5 минут при отсутствии визуальных изменений со стороны слизистых оболочек. Помимо этого, местная реакция, например в виде гиперсаливации, может возникать на органолептические свойства препарата (горький, кислый вкус и т.д.) и не являться аллергической реакцией. Результаты подъязычного теста оцениваются врачом на основании только внешнего вида слизистой оболочки, что является субъективной и неточной оценкой.

При этом положительные подъязычные пробы не всегда подтверждают наличие сенсибилизации к аллергену, и для окончательных выводов необходима корреляция их результатов с анамнезом, клиническими данными и лабораторными исследованиями.

Кроме того, подъязычные пробы могут быть ложноотрицательными (т.е. отсутствие реакции при наличии аллергии), например, в случаях угнетения реакции слизистой на фоне приема антигистаминных препаратов, кортикостероидов, beta-адреномиметиков; в связи с возрастными особенностями реактивности слизистых полости рта (у детей, иногда у пожилых людей, у курильщиков) или, если аллергеном является не исходное вещество, а продукты его метаболизма в организме, что нередко встречается при лекарственной аллергии.

Таким образом, технический результат, получаемый при реализации описываемого изобретения, состоит в повышении эффективности и достоверности диагностики аллергических заболеваний, за счет исключения субъективного фактора визуального, восприятия реакции слизистой оболочки полости рта, а также возможности получения достоверного результата у разных категорий больных (дети, пожилые пациенты, курильщики и др.). Кроме того, технический результат заключается в расширении функциональных возможностей методики за счет возможности не только качественной, но и количественной оценки и повышении безопасности, поскольку используемые в предлагаемой методике концентрации лекарственных препаратов не могут вызвать у пациентов жизнеугрожающие реакции.

Указанный технический результат достигается тем, что комплект для диагностики лекарственной аллергии включающий размещенные в коробке, по крайней мере, одну ампулу с раствором лекарства-аллергена и набор градуированных стаканчиков для промывания полости рта, содержит камеру Фукс-Розенталя, флакон с красителем Задорожного-Дозморова и бинокулярный микроскоп.

Использование камеры Фукс-Розенталя позволяет осуществлять подсчет полиморфноядерных лейкоцитов в жидкостях, полученных после промывания полости рта даже при незначительной эмиграции лейкоцитов, что значительно упрощает процедуру диагностики аллергии и повышает ее достоверность, поскольку позволяет проводить исследования пациентам с малым количеством или отсутствием зубов, курильщикам, детям и пожилым лицам, пациентам с зубными протезами, больным, перенесшим воспалительно-дегенеративные заболевания полости рта (травмы, синдром Лайелла и пр.) из-за имеющейся у них гипотрофии или дегенеративных изменений слизистой оболочки полости рта и малого количества лейкоцитов, эмигрирующих в ротовую полость, в то же время не требуя дополнительных затрат времени на обследование и дорогостоящее оборудование.

Использование красителя Задорожного-Дозморова позволяет определять жизнеспособные полиморфноядерные лейкоциты и легко дифференцировать их от других визуально сходных с ними клеточных элементов и пищевых примесей в промывной жидкости, что значительно снижает вероятность ошибок при подсчете клеток и повышает точность диагностики.

Описываемый комплект средств для диагностики аллергии позволяет выявлять истинные аллергические реакции на лекарственные вещества, обладающие сенсибилизирующими свойствами, он применим как при антителозависимом (гуморальном), так и при антителонезависимом (клеточном) пути развития аллергических реакций.

Описываемая полезная модель содержит флакон с красителем Задорожного-Дозморова и, по крайней мере, одну ампулу с водорастворимым лекарством-аллергеном. В комплект для диагностики аллергии может входить набор ампул с водными растворами таких медикаментов как: антибиотики пенициллиновой, цефалоспориновой, аминогликозидной, макролидной, тетрациклиновой, левомицетиновой и других групп, сульфаниламиды, местные анестетики, нестероидные противовоспалительные препараты.

Для диагностики лекарственной аллергии в качестве антигена используют водорастворимые формы медикаментов в следующих концентрациях:

- пенициллины - 1 мкг/мл,

- цефалоспорины (цепорин, кефзол, цефамизин и др.) - 1 мкг/мл,

- аминогликозиды (канамицин, гентамицин и др.) - 10 мкг/мл,

- макролиды (эритромицин и др.)- 10 мкг/мл,

- хлорамфеникол (левомицетин) - 10 мкг/мл,

- тетрациклины - 10 мкг/мл,

- сульфаниламидные препараты - 100 мкг/мл,

- производные пиразолона и ацетилсалициловой кислоты - 100 мкг/мл,

- местные анестетики (новокаин, лидокаин и др.) - 100 мкг/мл,

- антибиотики других химических групп - 10 мкг/мл.

Комплект средств для диагностики аллергии в соответствии с полезной моделью содержит также камеру Фукс-Розенталя, микроскоп и четыре градуированных стаканчика для промывания полости рта.

Обследование с применением описываемого комплекта средств для диагностики аллергии проводят следующим образом.

Предварительно подготовленный пациент проводит последовательные промывания передней части полости рта (преддверие рта и подъязычная область) в течение 2-х минут 10 мл физиологического раствора (рН 7,3-7,4). При этом после каждого промывания жидкость из полости рта (промывную жидкость) собирают в стаканчики, которые пронумерованы в соответствии с порядком полосканий.

В стаканчик 1 собирают жидкость из полости рта (промывную жидкость) после первого промывания, как исходную порцию (контроль).

Через 15 минут после первого промывания в стаканчик 2 собирают жидкость после второго промывания физиологическим раствором с разведенным в нем испытуемым медикаментом (предполагаемым лекарством-аллергеном).

В стаканчик 3 собирают промывную жидкость после третьего промывания, проведенного через 15 минут после второго промывания.

В стаканчик 4 собирают промывную жидкость после четвертого промывания, проведенного через 15 минут после третьего промывания.

Далее производят окраску и подсчет лейкоцитов в собранном для исследования материале. Для этого промывную жидкость из стаканчиков 1,3,4 после тщательного перемешивания последовательно помещают с помощью микропипетки на часовое (или предметное) стекло по 0,02 мл из каждого стаканчика.

В эти порции промывной жидкости добавляют по 0,04 мл красителя Задорожного-Дозморова, затем после 5-ти минутного окрашивания исследуемую смесь помещают под притертое стекло камеры Фукс-Розенталя. Далее под микроскопом (ув. ×200) производят подсчет лейкоцитов во всем объеме камеры Фукс-Розенталя.

Таким образом, подсчитывают количество лейкоцитов в контрольной и опытных порциях промывной жидкости на разных стадиях обследования.

Индекс эмиграции лейкоцитов в полости рта подсчитывают по формуле:

Нк - количество лейкоцитов (нейтрофилов) в исходной (контрольной) порции (стаканчик 1); Но - количество лейкоцитов (нейтрофилов) в опытных порциях 3 и 4.

В расчет берут наименьшее число лейкоцитов из опытных порций, т.е. наибольший процент торможения.

Тест оценивается как положительный при снижении числа клеток по Индексу эмиграции более чем на 30%. Положительным тест in vivo считается и в том случае, когда

индекс эмиграции (ИЭ) лейкоцитов будет снижен более чем на 30% даже в одной (любой) опытной порции.

Торможение эмиграции лейкоцитов более чем на 30% после воздействия слабым раствором специфического аллергена на слизистую оболочку полости рта выявлено у больных с аллергическими заболеваниями и доказанной сенсибилизацией к пыльцевым аллергенам, аллергенам домашней пыли, пенициллину и др. Феномен торможения эмиграции лейкоцитов был выявлен как при аллергических реакциях немедленного типа, так и при аллергии замедленного типа (клеточно-опосредованных реакциях).

Описываемый комплект средств для диагностики аллергии с применением красителя Задорожного-Дозморова и использованием камеры Фукс-Розенталя показал полную корреляцию полученных результатов у больных с нормальным количеством лейкоцитов в полости рта при тестировании другими известными способами. Применение камеры Фукс-Розенталя при тестировании 29 больных даже с малым количеством клеток в полости рта позволило исследовать большой объем образца промывной жидкости и зафиксировать достаточное количество клеток в смывах для достоверного подсчета индекса эмиграции.

Таким образом, комплект средств для диагностики аллергии в соответствии с полезной моделью позволяет простым и доступным способом проводить обследования разных категорий больных (дети, пожилые пациенты, курильщики и др.) для выявления лекарственной аллергии с высокой степенью достоверности получаемых результатов.

Проведение теста не требует специально оснащенной лаборатории, дорогостоящего оборудования и реактивов, использования лабораторных животных; тест может проводить врач-аллерголог непосредственно во время приема пациента, и результат теста известен в день тестирования.

Комплект средств для диагностики аллергии, включающий размещенные в коробке по крайней мере одну ампулу с лекарством-аллергеном и набор градуированных стаканчиков для промывания полости рта, отличающийся тем, что он содержит камеру Фукс-Розенталя, флакон с красителем Задорожного-Дозморова и микроскоп.