Способ получения никотинамидадениндинуклеотида
Союз. Советских
Социалистических .
Республик.
<и>9
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. свид-ву (51) NL. К.п.
С 07 Н 21/00/!
Л 6.1 К 49/00. (22) 3a s eHo 22. 12. 80 (21) 3222818/23-04 с присоединением заявки,яе
Гооудоретмнный комитет .СССР
Ilo делан иза4ретеиий и открытий (23) П риоритет
Опубликовано 23. 10.82. Бюллетень М 39 (53) УДК 547.454 (088. 8) .Дата опубликования описания 26. 10 82
3ШОВЗИАЯ
ИАТЕНТНЭтккчичкни
ЪИЬЛ е1ЭТИ(А: (72)" Авторы изобретения
Ю.lO. Кулис, А.С. Самалюс, В.-С.А. Лауринавй
Институт биохимии АН Литовской ССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НИКОТИНАМИДАДЕНИНДИНУКЛЕОТИДА. ° 1
Изобретение относится к усовершенI, ствованному . способу получения никотинамидадениндинуклеотида (НАД), который используют в биохимии.
Известен способ получения НАД пу.тем электролиза восстановленного никотинамидадениндинуклеотида (НАДН ) в 0,01-0,1 М фосфатном буфере при рН
6-8 на электродах из углеродистых или платиновых. материалах при потенциале
1,2 В (потенциал полуволны 0,620,72 В) нормального водородного потенциала при концентрациях НАДН
10 икмоль (13.
Недостатком известного способа получения НАД является то, что электролиз протекает при значительном передо напряжении, достигающем 1 В. В резуль тате этого в системах конверсии энергии имеют место значительные потери энергии.
Целью изобретения является упроще-. ние процесса, заключающееся в -уменьшении перенапряжения электролиза НАДН .
Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения НАД, заключающемуся в электролизе НАДН .в
0,01-0,1 M фосфатоном буфере при рН
6-8 на комплексе N-метилфеназиния и анион-радикала 7,7,8,8-тетрациан-п-хи.нодиметана при потенциале 0,2-0,4 В относительно нормального водородного электрода и концентрации НАДН.2.0,51 мкмоль.
Пример 1. Электролиз 1 мл рас твора НАДН, концентрация которого
0,5 мкмоль в 0,01-0,1 М фосфатном буфере (рН 7,0) проводят при температу- . ре 20 С в анаэробной среде при постоянном потенциале 0,4 В (потенциостат
П5827М). Через определенное время. электролиза (табл. 1) спектрофотометрическим способом в растворе определяют количество образовавшегося НАД
3 968038 с использованием алькогольдегидрогеназы.
В табл. 1 представлены результаты электролиза предлагаемого способа.
Таблица 1 s
4
Таблица 2:
Количество образовавшегося
НАД,мкмоль
Время электВыход, о, ролиза,ч
Количест-. во образовавшегося
НАД,мкмоль
Выход, о
Время электролиза, ч
2 0
4,6
0,14
0,21
10,6
0,24
0,14. 28
0 5
1,0
0,23
0,27
1,2
0,38
2,2
3,0
88.
0,44
98,5,1
0,49
Составитель Л. Никулина
Редактор Г. Волкова Техред И. Коштура Корректор С. Шекмар
ББ 3ЕРТ3 l ,ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35 Раушская наб. д. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 о ° . g$
Из табл. видно, что при продолжительном электролизе выход коферментноto активного НАД составляет 983 по отношению к количеству электролизуемого НАДН, 30
Пример 2. Злектролиз 1 мл раствора НАДН, концентрация которого
1 мкмоль в 0, 1 И фосфатном буфере (рН 7,0) при температуре 20оС и потенциале 0,2 В проводят аналогичным 35 путем.
Результаты электролиза известного способа приведены в табл. 2.
По сравнению с известным способом в предлагаемом способе электролиэ протекает при значительно уменьшенном потенциале (0,2-0,41). формула изобретения
Способ получения никотинамидадениндинуклеотида путем электролиза восстановленного никотинамидадениндинуклеотида в 0,,01-0,1 М фосфатном буфе,ре при рН 6-8, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью .упрощения процесса, электролиэ проводят на комплексе N-метилфенаэиния и анион-радикала
7,7,8,8-. тетрациан-и-хинодиметана при потенциале 0,2-0,4 В относительно нормального водородного электрода и концентрации восстановленного никотинамидадениндинуклеотида 0,5-. 1 мкмоль.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Х.I. Blaedel and Roger А. Ienkirls Изучение электрохимического окисления восстановленного никотинамидадениндинуклеотидов, — "Anal. G>em."
47, N 8, 1975, с, 1337 (прототип) .
