Штамм вifidовастеriuм lоnguм д4а200,nb-2170,используемый для изучения экзогенных бифидобактерий в макроорганизме

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскик

Социалистических

Республик

<>958493

i 3

"Ф

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

У (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 1б,01. 81 (21) 3237027/28-13 с присоединением заявки Мо (23) Приоритет !

Опубликовано 15.09.82. Бюллетень Ng 34

Дата опубликования описания 15.09.82 (313 М. Кл.з

С 12 N l/00

// (С 12 Ы 1/00, С 12 R 1/01) Государственный комитет

СССР но делам изобретений н открытий (%3) УДК 576. 8. 09 3 (088. 8) (72) Авторы изобретения

Б. В. Пинегин, Н, П. Тарабрина, В. М, Коршунов

Г. И. Гончарова и A.М. Лянная

2-й Московский ордена Ленина государственны институт им. Н.И. Пирогова и Московский нау исследовательский институт эпидемиологии и им. Г.Н. Габричевского (71) Заявит ели (54) ШТАММ В1РХПОВАСТЕВ1ПМ LONGUh(D4a200,9 В-2170, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ПРИЖИВЛЕНИЯ

ЗКЗОГЕННЫХ БИФИДОРАКТЕРИЙ В МАКРООРГАНИЗМЕ ч

Изобретение относится к медицинской микробиологии и мсжет быть использовано для приготовления бакт ври альных лечебных препаратов, а т акже в исследованиях по изучению взаимодействия и возможности приживления экзогенных бифидобактерий в мак-. роо рг ан из ме.

Известен штамм. Bif idobacterium

longum (1) .

Однако известный штамм не обладает достаточно высокой устойчивостью к антибиотикам и не предоставляется возможным выделить его среди других бактерий, заселяющих кишечник, после инокуляции в микроорганизм и судить о приживлении экэогенных бактерий в различных отделах кишечника.

Целью изобретения являеч ся штамм бифидобактерий, обладающий антагонистической активностью, а также множественной устойчивостью к антибиотикам, позволяющей применять его в качестве лечебного бактерийного препарата для лечения кишечных инфекций одновременно с антибиотиками.

Для получения предложенного штамма использован исходный штамм Bifid

bacterium lon

5 .человека.

Из этого штамма селекционным путем получен штамм Bifidobacterium

longum D4a200.

Штамм Bifidobacterium 1ongum

D4a200, используемый,для изучения приживления экзогенных бифидобактернй в макроорганизме, хранится в коллекции ВНИИгенетика под номером

В-2170 °

Штамм бифидовактерий Bifidobacterium longum D4a200.èìååò следующие морфопогическую и физиологическую характеристики . Морфологические признаки . Клетки палочковидные, с утолщениями или У-образными раздвоениями, в мазке располагаются беспорядочно, неподвижные, грамположительные (иногда грамвариабельные), внутри клеток выявляется зернистость. Культуральные признаки. В 0,7Ъ-ом агаре Блэурокка образуют колонии в виде пирамидок или дисков размером до 3-5 мм в диаметре в течение 3-5 сут. В жидкой среде Блэурокка растут по всей пробирке., кроме зоны аэробиоза, при малой посевной дозе образуют гвоз958493 дики, на 3-5 сутки оседают на дно пробирки. На плотной и жидкой среде растут также в присутствии 50 мг/мл канамицина, 2 мг/мп гентамицина, 2 мг/мл мономицина и 200 мкг/мл ампициллина. Продолжитеность лагфазы 16-20 ч, время генерации 1,6+

«40,75 ч, урожай клеток (1,27+0,19)х х 10 . После лиофильного высушивания лаг-фаза и.время генерации могут удлиняться. Физиологические признаки..10 облигатный анаэроб,растет в высоком столбике arapa в пробирке или чашках

Петри с плотной средой. Максимум рос-. та при 37,5 С.Áèoõèìè÷åñêèå признаки., Сбраживает арабинозу, ксилозу, лакто-)5 зу, вариабельно маннозу.

Чувствительность к антибиотикам (минимальные ингибирующие концентрации в мкг/мл или ED/ìë) °

Атибиотик известный штамм Р4а200

Стрептомицин 200

Мономицин 2200

Канамицин 50200

Гентамицин 2200

Пенициллин 0,2-1,0

Ампициллин .220

Тетрациклин 2

Рифампицин 10

Хлорамфеникол 0,8

Лип комиции 0,1

Нистатин 100

Антагонистические свойства. При совместном культивированйи в количественном соотношении 1г1 в жидкой среде Блэурокка подавляет рост 99,99%

Escherichia coli 0 6- (штамм 111), 98,88 Escherichia coli 0 (штамм 122)

99,94% Shigеi)а йlexneri(штамм 170)

98,50+ Proteus morgani(m anm 12), обладающих энтеропатогенными свойст- 40 вами.

Штамм 4а200 обладает антагонистической активностью. Лабораторная проверка показывает его непатогенность для экспериментальных животных (мы- 45 шей, крыс, морских свинок), а также для людей (в опытах на добров<ельцах).

Примеры практического использования.

Пример 1. Изучают влияние комплексного применения антибиотикоустойчивых бифидобактерий и ампициллина на выживаемость мышей при лучевой болезни °

Беспородных мышей весом 16-18 r облучают на установке ГУБ 31-200 в

55 дозе 700 р (мощность дозы—

140 р/мин.) ° После облучения животных разделяют на 4 равные группы по

20 малышей в каждой. Первая группа животных получает перорально ампициллин и бифидобактерии В longum D4a200 с 1 по 21 день после облучения с интервалом в 48 ч. Вторая группа животных получает только антибиотики в те же сроки, что и ьыши 1-ой груп- 65 пы, третьей группе животных вводят только бифидобактерии по аналогичной схеме, а четвертая группа животйых получает физиологический раствор хлористого натрия. Суточная доза ампициллина составляет 1 мг, бифидоб ктерии вводят в количестве 1 х. 10 клеток. Антибиотик и бактерии вводят интрагастрально в объеме 0,25 мл.

Опыт повторяют 4 раза. Результаты опытов показывают, что комплексное применение устойчивых к антибиотикам бифидобактерий В. longum D4a200 и ампициллина оказывает враженное влияние на увеличение процента выживаемости у облученных мышей. Это выявляется с 13-16 дня после облучения. и в последующие сроки наблюдения разница в количестве выживших мышей в руппах леченых и нелеченых животных остоянно увеличивается. На 13 день осле облучения процент выживаемости в,l, 2, 3 и 4 группах составляет

50,0+2,2; 48,0 2,1; 54 gQil 7 и 32,0 .

+1,9 соответственно. На 30 день выживаемость составляет 32,0+1,7; 23,0 +1,9;29,0+1,5 и 4,6*1,2 процента соответственно.

Пример 2. Изучают влияние комплексного применения антибиотикоустойчивых бифидобактерий и гентамицина на выживаемость мышей при лучевой болезни. Методика проведения опытов и группы животных аналогичны в примере 1, но вместо ампициллина для лечения. животных применяют генматицин в дозе 20 mr на мышь. Применение устойчивых к антибиотикам бифидобактерий В. longum

D4a200 и гентамицина также способствует увеличению выживаемости облученных мышей. Процент выживших мышей в 1,2,3 и 4 группах на 25 день после облучения составил 41,6+1 6;

20,0+1,9; 40,0+2,5 и 4,3+1,1 соответственно.

Таким образом, устойчивость бифидобактерий к антибиотикам позволяет начинать бактериотерапию одновременно с антибиотиками,,способствуя предотвращению развития дисбактериоза у облученных мышей и увеличение за счет этого продолжительности их жизни.

Пример 3. Штамм В. longum

4а200 используют для лечения новорожденных и грудных детей с энтероколитами и дисбактериозами кишечника совместно с антибиотиками(гентамицин, ампициллин,мономицин,нистатин).Группа больных(10 чел .)получала бифидобактерии одновременно с антибиотиками 7 дней. Контрольная группа больных в этот период получала только антибиотики.В результате проведенного лечения в кишечнике опытной группы больных к 9 дню увеличивалось количество антибиотико-резистентных бифидобактерий(от 0 до 1х10 клеток/г),в связи с,958493.Составитель С. Малютина

Редактор Н. Горват Техред A.À÷ Корректор Н. Король

Эаказ 6982/36 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент ., г. Ужгород, ул. Проектная, 4 чем общий уровень бифидобактерий увеличивался в 3 раза, количество стафилококков и стрептококков уменьшалось более, чем в 100 раз, общее оличестго энтеробактерий снижалось

2 раза. У больных, получавших только антибиотики, на 9 день от начала лечения общее количество бифидобактерий уменьшалось в 10 раэ по сравнению с исходным уровнем, антибиотикорезистентные бифидобактерии не выявлялись, количество стафилакокков и

° стрептококков уменьшалось в 5 раз, уровень энтеробактерий увеличился в

2 раза .

Совместное введение антибиотиков и антибиотико-устойчивых бифидобактерий при энтероколитах и дисбактериоэах кишечника способствует более быстрому и эффективному восстановлению номофлоры кишечника, чем лечение только антибиотиками °

Штамм может применяться также для .,изучения механизмов приживления в кишечнике экзогенных бифидобактерий.

Таким образом, штамм бифидобактерий В ° ?ongum D4a200 обладает новыми Свойствами, эффективен прн использовании для лечения кишечных инфекций и дисбактериозов у людей и экспе5 риментальных животных, безвреден, Э может использоваться в здравоохранении.

10 Формула изобретения

Штамм Bif idobacterium 1 ongum

D4a200 М В-2170 (коллекция ВНИИгенетика ), используемый для изуче15 ния приживления экзогенных бифидобактерий в макроорганизме..

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Гончарова Г.И. с соавт. Культуральная, морфологическая и биохи .ическая характеристика Bacterium

bifidum Труды МНИИЭМ, N., 1969, т. XIII, с. 415-426