Способ получения антигена для профилактики бруцеллеза

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА путем культивирования бруцелл в питательной среде с последукяцим отделением, высушиванием биомассы и выделением целевого продукта с помощью гидролиза уксусной кислотой, о т л и ч аю щ.и и с я тем, что, с целью повышения иммуногенности и снижения реактогенности, полученный антиген подвергают воздействию ионизирующего излучения в дозе 10-15 кГй.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„„957471

isn 4 А 61 К 39/10

OIlHCAHHE ИЗОБРЕТЕНИЙ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3264152/28-13 (22) 20.03.81 (46) 30.04.86. Бюл. ¹ 16 (71) Научно-исследовательский ордена

Трудового Красного Знамени институт эпидемиологии и микробиологии им.почетного академика Н.Ф. Гамалеи (72) Е.А. Драновская и И.И.Самойленко

-(53) 576.8.097(088.8) (56) Вершилова П.А., Драновская Е.А.

Изучение иммуногенных свойств протективного антигена (белково-полисахаридного комплекса) к экспериментальной бруцеллезной инфекции.

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1974. ¹ 7, с.92-96. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА

ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА путем культивирования бруцелл в питательной среде с последующим отделением, высушиванием биомассы и выделением целевого продукта с помощью гидролиза уксусной кислотой, о т л н ч аю щ.и и с я тем, что, с целью повышения иммуногенности и снижения реактогенности, полученный антиген подвергают воздействию ионизирующего излучения в дозе 10-15 кГй.

1 9574

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения вакцинных препаратов, Известен способ получения антигена для профилактики бруцеллеза путем культивирования бруцелл в питательной среде с последующим отделением . и высушиванием биомасеы и выделением целевого йродукта; с помощью гидролиза уксусной кислотой. 10

Однако вакцинный препарат, полученный известным способом, не обладает достаточно высокими протективными свойствами"и срок длительности создаваемого.иммунйтета не превышает трех месяцев. Увеличение дозы препарата или его двукратное введение,как показали исследования„не пролонгировали иммунитет. Помимо этого в бруцеллезном антигене, представляющем собой белково-полисахаридный комплекс (БПК), имеются примеси липополисахарида (ЛПС) — эндотоксина, дающего побочные реакции, увеличение дозы БПК при иммунизации в связи с этим оказывает вместо защитного действия иммунодепрессивное.

Целью изобретения является повышение иммуногенности и снижение реактогенности.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения антигена для профилактики бруцеллеза путем культивирования бруцелл в питательной среде с последующим отделением и высушиванием биомассы и выделением целевого продукта с помощью гидролиза уксусной кислотой, отличительной особенностью является то, что полученный антиген подвергают воздействию ионизирующего излучения в дозе 10-15 кГй. 40

Способ осуществляют следующим образом. Из убитой ацетоном и высушен ной микробной массы бруцелл (ацетонового порошка) при помощи гидролиза в 0 1 н.уксусной кислоте (соотношение 1:20 вес/объем, температура 100 С, в течение 1,5 ч) получают белковополисахаридный комплекс после отделения надосадочной жидкости центрифугированием при 5000 g в течение

40 мин, ее лиофилизации, последующего осаждения в 8-кратном объеме

96Х-ного этанола, промывания осадка эфиром и окончательного высушивания в вакуум-эксикаторе. Затем готовят

0 2Х-ный раствор БПК в 1Х-ном растворе лактозы, используемой для стабилизации препарата, и разливают по

71 2

1-2 мл в ампулы. Содержимое ампул лиофильно высушивают. После запаивания и маркировки (а на производстве в готовой товарной упаковке) ампулы с препаратом подвергают воздействию ионизирующего излучения при 18-23 С о в дозе 10-15 кГй, 1 °

В результате такой обработки антигена, а именно лиофилизации его в стабилизирующем растворе, запаивания ампул с последующим воздействием ионизирующего излучения, получают вакцинный препарат с более длительным протективным эффектом (в 2 раза), он абсолютно стерилен и лишен примеси ЛПС вЂ” эндотоксина, что делает вак. цину ареактогенной.

Пример 1. При выборе эффективной зоны ионизирующего излучения были изучены иммуногенные свойства препаратов, облученных в дозе 10 и

20 кГй. В результате исследования установлено, что доза 10 кГй не сни— мает иммуногенных свойств БПК при испытании оптимальной дозы препарата (600 мкг). В группе животных,вакцинированных препаратом, облученным дозой 10 кГй, BOX морских свинок были иммунны через 1 месяц после вакцинации и последующего заражения вирулентной культурой бруцелл в дозе

20 микробных клеток. У животных,вакцинированных БПК, облученным дозой

20 кГй, иммунитет против бруцеллезной инфекции зарегистрирован лишь у 50Х морских свинок. Серологические исследования с помощью реакции агглютигации (PA), пассивной гемагглютинации (РПГА) и пробы Кумбса— неполные антитела (РК) не выявили существенных различий в двух группах животных. Полученные данные позволяют рекомендовать дозу излучения порядка 10 кГй.

Пример 2. Была определена длительность защитного действия антигена (БПК), облученного дозой

10 кГй, в сравнении с необлученным препаратом. Введение облученного до- . зой 10 кГй БПК создает напряженный иммунитет у 60Х экспериментальных животных в отдаленный срок (6 месяцев после вакцинации) . B группе, вак-, цинированной необлученным БПК, уже к 4 месяцам иммунных животных было

20Х, а через 6 месяцев отмечался

Редактор О. Кузнецова Техред Н.Бонкало Корректор Л. Патай

Заказ 2331/3 Тираж 660 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035„ Москва, Ж-35, Раушская наб.,д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4.

3 9574 полный прорыв иммунитета. Результаты исследований позволили сделать однозначный вывод о пролонгировании протективного эффекта бруцеллезной вакцины, подвергнутой обработке ионизирующим излучением в дозе 10 кГй.

Все образцы вакцины после -облучения были проверены на стерильность, безвредность (на белых мышах) и апирогенность (на кроликах) .

1О

71 4

Антиген для профилактики бруцеллеза, полученный предложенным способом, применен на 20 добровольцах и на 145 человеках в очагах бруцеллеза.При этом установлено,что полу-ченный антиген имеет повышенную нммуногенность, сниженную реактогенность, увеличенный срок годности вакцины (до 2 лет), безвреден и стерилен.