Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга
ОП ИСАНИЕ
ИЗЬБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советсинк
Социалистические республик (6l ) Дополнительное к авт. саид-ву (5l)N. Кл. (22) Заявлено 09. 07. 80 (21) 2952762/28-13
Ь с присоединением заявки М =
G О1 M 33/48
3ЬеударстееаныИ кшеятет
СССР (23) Приоритет—,Опубликовано 07.06.82 Бтоллетень М 21
Дата опубликования описания07.06.82 ае делен яеебретенк» и еткрытяй (53) УДК616-07 (088.8) (72) Авторы изобретения
Б.А. Ройтруб, P.Ñ. Златин и И.Я. Иосим
Институт физиологии им. А.A.Áîãoìîëüöà, (71) Заявитель (54) спосОБ ОпРеДЕлениЯ конЦентРАЦии АЦетилхолинА в структуРАх иозгА
Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохимии физиологически активных веществ, и может быть: использовано для определения микроколичеств свободного ацетилхолина в структурах мозга. Известен способ
5 определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолировайную мышцу пиявки и электрографической регистрации сокращений препарата(1)..
Однако известный способ не обеспечивает достаточной точности, посколь. ку полученные известным способом препараты обладают недостаточной стабильностью высокой чувствительности.
Цель изобретения - повышение точности способа.
Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения концентрации ацетилхолина
I в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолированную
2 мышцу пиявки и электрографической ре" гистрации сокращений препарата, пиявку предварительно выдерживают в воде при 4-боС в течение 4-6 сут, а затем изолированную мышцу - в растворе Рингера в течение 46-50 ч.
Пример. В день опыта изолированную спинную мышцу пиявки перемещают из охлажденного раствора
Рингера в раствор Кребса+прозерин такой же температуры на 1 ч.
Непосредственно перед опытом изолированную мышцу пиявки помещают на пенопластовый препаровальный столик и поперечным разрезом с помощью спаренных лезвий, находящихся на расстоянии 8-12 мм, вырезают участок мышцы в области оральной присоски на 5 мм каудальнее головных ганглиев.
Вслед за этим обрезают продольнобоковые участки мышцы с таким расчетом, чтобы препарат имел ширину
3-4 мм. Препарат укрепляют двумя сер-. финками в плексигласовой ванночке, 93437
Формула изобретения
Составитель Р.Катосова
Техред A. Дч Корректор В.сутяга
Редактор В.Пилипенко
Заказ 3927/40 Тираж 887 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Moñêâà, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r.yæãoðoä, ул.Проектная, 4 заполненной аэрируемым раствором Креб. са с прозерином, и присоединяют к механической части электронного устройства. Исследование проводят при температуре раствора в ванночке 1015 С. Перед началом опыта готовят с стандартные растворы ацетилхолина (тестирующие) на растворе Кребса с прозерином.
Опыт проводят в следующей после- о овательности, определение минимальной концентрации ацетилхолина,,вызывающей сокращение участка спинной мышцы пиявки, определение степени повторяемости отношения "доза- 15 ,эффект" до четырех определений) оп.ределение концентрации ацетилхолина в исследуемых растворах, затем в интервале между определениями раствором Кребса с прозерином производят отмывание препарата от связанного с рецепторами ацетилхолина, а также мышцу освобождают от натяжения на срок не менее 15 мин. После - отдыха мышцу вновь натягивают и в натянутом состоянии стабилизируют в течение
10 мин.
Регистрацию сокращения участка изолированной спинной мышцы пиявки производят на движущейся диаграммной ленте электронного чернильного регистратора, соединенного с электронной системой преобразователя механического натяжения мышцы. Регистрацию проводят до получения прямой (нулевой) линии, характеризующеи исходное
35 натяжение мышцы.
Показателем концентрации ацетилхолина является изменение тангенса угла, образованного в результате от Щ клонения писчика от нулевой линии (исходный фон) после добавления опытного или тестирующего раствора. По7 4 строив калибровочную кривую зависимости угла отклонения от концентрации ацетилхолина, определяют содержание ацетилхолина в опытных растворах.
Предлагаемый способ дает возможность стабильно определять микроколичества свободного ацетилхолина
-2o (до 10 " г/мл) в малых навесках (1-2 мг} ткани мозга с использованием широко доступного тест-объекта (медицинской пиявки), а также аппаратуры, изготовленной на базе стандартных устройств, что дает возможность внедрить его в практику не только научно-исследовательских, но и лечебных учреждений для определения функционального состояния парасимпатической нервной системы.
Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолированную мышцу пиявки и электрографической регистрации сокращений препарата, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, пиявку предварительно выдерживают в воде при 4-6 С в течение
4-6 сут, а затем изолированную мышцу в растворе Рингера в течение 46-50 ч.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Kadota К., Nagata М. Bioassay
of acetylcholine with thin muscle
strip of the Japanese mediса1 leech . а preliminary note of the геарргаlsal
of the evai!àÜ!1Ну nf this method
Jap.J..Pharmacol 1975, 25 ° 5, р. 602-605.