Способ определения локализации белковых зон в электрофореграмме

Авторы патента:

G01N27/26 - путем определения электрохимических параметров; путем электролиза или электрофореза (определение коррозионной стойкости G01N 17/00; путем разделения на составные части с использованием адсорбции, абсорбции или подобных процессов или с использованием ионного обмена, например хроматографии G01N 30/00; иммуноэлектрофорез G01N 33/561; электрохимические процессы и аппараты вообще B01J; стандартные элементы H01M 6/28)

Oh HCAHHE

ИЗОВРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕИЛЬСТВУ

Союз Соввтския

Социапистичвских

Республик >911296 (6 t ) Дополнительное к авт. свкд-ву (22)ЗаЯвлено 26,06.80 (21) 2945468/18-25 с присоединением заявки М (51)N. Кл.

G 01 и 27/26

3Ьеударстмннвй каиитвт

CCCP ве делам изабретеиай и атарытвй (23) Приоритет

Опубликовано 07.03.82, Бюллетень М 9 (53) УДК 543.544 (088. 8) Дата опубликования описания 07.03,82

Г (72) Автор . изобретения

А. П. Полокайнен (71) Заявитель

Институт экспериментальной биологии АН Эстонс ой ССР (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛОКАЛИЗАЦИИ БЕЛКОВЬИ 3ОН

В ЗЛЕКТРОФОРЕГРАММЕ

Изобретение относится к химии, медицйне, а именно к электрофоретнческому разделению н вьщелению иццнвидуальных белков.

Известен способ определения локализации белковых зон в пластннчатых электрофореграммах, не содержащих детергенты нли

I амфолнны, заключающийся в TQM %To . OT зпектрофореграммы отрезают не менее одной продольной полосы, производят нх окраску и удаляют из ннх непрореагировавший краситель (1).

Недостатком способа является его длительность.

Наиболее близким техническим решением к изобретению является способ определения локализации белковых зон в электрофоре/ грамме путем окрашнвания ее продольной .полосы в поперечном направлении посредст вом злектрофореза (2}.

В данном способе ввод красителя ускорен, однако не устранен недостаток, состоящий в том, что в процессе выявления белковых зон полосы электрофореграммы разбухают иногда довольно значительно, что затрудняет сопоставление окрашенных полос с неокрашенной частью злектрофореграммы.

Цель изобретения вЂ” повышение скорости и точности определения локализации белковых зон на электрофореграммах.

Цель достигается тем, что в известном способе определения локализация белковых зон в электрофореграмме путем окрашивания продольной йолосы гелевого блока с электро10 ° фореграммой в поперечном направлении посредством эпектрофореза, на гелевую пластину с электрофореграммой устанавливают замкнутую по периметру раму из электроязоfS ляционного материала, образующую с Iloaepxпостыл гелевой пластины сосуд, разделенный продольной перегородкой на две камеры, заливают в одну из камер электролит, в другую вЂ”. электролит с красителем и через образованную "систему" электролит с красителем20 гелевая пластина вЂ” электролит пропускается ток, по окончании окрашивания проводят электроэлюцню не связанного белком красятеля, пропуская ток в обратном направления.

3 91

С помощью предлагаемого способа определяется локализация белковых зон на электрофореграмме в узкой полосе непосредственно в теле гелевой пластины.

На фиг. 1 изображена электрофореграмма с разделенными белковыми зернами, на фиг. 2 вЂ” один иэ возможных вариантов крашения. поверхностного слоя электрофорегр ммы.

Способ заключается в следующем.

После получения электрофореграммы в гелевой пластине 1, содержащей разделенные белковые зоны 2 (фиг. 1), устанавливают на гелевой пластине 1, раму 3 (фиг. 2) из диэлектрического материала, разделенного перегородкой 4 на две узких камеры 5 и

6, днищем которых является поверхность гелевой пластины 1. Продольные оси камер

5 и 6 располагают по направлению миграции белковых зон (показано стрелками). В камеры вставляют электроды 7 и 8. Для окрашивания полосы в одну из камер, на пример 5, заливают фиксирующий раствор (иапример 7 вЂ” 10% водный раствор уксусной кислоты) и на дно этой же камеры вводят .слой раствора красителя 9 (например амидошверца) в то же фиксирующем растворе, содержащей для увеличения плотности, например, сахарозу. Во вторую камеру 6 может быль залит раствор электролита (например буферный раствор, содержащийся в электрофореграмме) .

Напряжение подают так, чтобы краситель

«з камеры 5 внедрился под влиянием электрического поля в поверхностный слой гелевой пластины 1, пропитанной уксусной кислотой, спустя некоторое время переключают, полюса и производят электрозлюцию красителя «з электрофореграммы.

В результате на поверхности гелевой пластины 1 остается узкая полоса с окрашенными участками белковых зон на чистом фоне.

При этом отпадает необходимость предварительной пропитки всей толщи гелевой плас тины фиксирующим раствором, содержащим краситель, достаточно слоя, который успеет пропитаться фиксирующим раствором за время. подготовки к окрашиванию. Так как окрашенные участки белковых зон не от1296 4 делены от остальной части гелевой пластины, а также потому, что окрашивание производят только в поверхностном слое, вследствие чего изменений размеров окрашенной полосы по сравнению с неокрашенной частью электрофореграммы за счет набухания не происходит, достигается точное.. определение локализации, а затем и выделение отдельных белковых зон из неокрашенной части гелевой

t0 пластины с электрофореграммой.

Например, локализация гистонов на полиэкриламидной гелевой пластине предлагаемым способом на тестируемой полоске длиной 10 см и шириной 2 мм при напряжении 100 В занимает не более 60 с.

Предлагаемым способом может быть определена локализация белковых зон в электрофореграммах практически любой формы.

Формула изобретения

Способ определения локализации белковых зон в электрофореграмме путем окрашивания продольной полосы гелевого блока с электрофореграммой в поперечном направлении посредством электрофореза, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения скорости и точности определения, на

30 гелевую пластину с электрофореграммой устанавливают. замкнутую по периметру раму с электроизоляционного материала, образующую с поверхностью гелевой пластины сосуд, разделенный . продольной перегоуодкой на две камеры, заливают в одну из камер электролит, в другую вЂ” электролит с красителем, и через образованную систему

"электролит с красителем вЂ” гелевая пластина вЂ” электролит" пропускают ток, по окон- чании .окрашивания проводят электроэлюцию не связанного белком красителя, пропуская ток в обратном направлении.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1; Маурер Г. Диск-электрофорез. М., "Мир", 45 1971, 115 вЂ” 116, 142.

2. Schwabe Ch. Disc- Eiectroforisis AnatyticaI Biochemistry. 1966, ч. 17, У 2, р. 201209 (прототип).

911296

ИГ. 2

Составитель И. Клешнина

Техред М.Рейвес Корректор Ю. Макаренко

Редактор Н. Пушненкова

Филиал ППП "Патент", r, Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 1110/29 Тираж 883 Подписное

BHHHgH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Способ определения локализации белковых зон в электрофореграмме

Способ определения массы гигроскопической соли во влагочувствительном слое преобразователя // 911294

Блок геля для электрофореза // 894533

Устройство для концентрирования биологических заряженных частиц // 894531

Устройство для изоэлектрофокусирования // 881600

Устройство для определения рассеивающей способности электролита // 881599

Способ обнаружения дефектов изоляционного покрытия подземных и подводных трубопроводов // 873097

Способ определения электрофоретических параметров жидкого электрографического проявителя // 868526

Способ потенциометрического определения сроков схватывания и ложного схватывания вяжущих // 857842

Способ качественного анализа вещества // 855475

Способ определения нитрит-иона в растворе // 2105296

Изобретение относится к электрохимическим методам анализа с использованием ионоселективных электродов и может быть использовано для повышения чувствительности и селективности способа

Способ определения мышьяка (iii) // 2105297

Изобретение относится к электроаналитической химии, а именно к способу определения мышьяка (III), включающему концентрирование мышьяка на поверхности стеклоуглеродного электрода в растворе кислоты с последующей регистрацией аналитического сигнала, при этом концентрирование мышьяка (III) проводят на поверхности стеклоуглеродного электрода, покрытого золотом, в растворе до 3,0 M в интервале потенциалов -0,40-(-0,45)B в течение 1-10 мин с последующей регистрацией производной анодного тока по времени при линейной развертке потенциала

Способ измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током // 2106620

Изобретение относится к области электрохимии, электрохимических процессов и технологий в части измерения потенциала электродов под током, а именно к способу измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током, основанному на прерывании электрического тока, пропускаемого между рабочим и вспомогательным электродами, и измерении текущего потенциала рабочего электрода, при этом процесс измерения текущего потенциала Eизм рабочего электрода производят относительно электрода сравнения непрерывно по времени t, затем по измеренным значениям потенциала рассчитывают первую производную от зависимости изменения текущего потенциала рабочего электрода от времени: (t)=Eизм

Способ получения активированных кислого и щелочного растворов // 2108300

Изобретение относится к способу получения активированных кислого и щелочного растворов, включающему электрохимическое разделение водного раствора электролита, при этом электрохимическому разделению подвергают мочу животных и/или человека

Способ адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений // 2114424

Изобретение относится к адсорбции компонентов, а именно к способу адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений путем наложения электрического поля в электрохимической ячейке, при этом перед концентрированием проводят адсорбцию на жидкометаллическом электроде из раствора, содержащего адсорбируемые соединения, при интенсивном перемешивании и потенциале электрода, обеспечивающем необратимую адсорбцию, а концентрирование после отстаивания осуществляют путем сокращения поверхности электрода с необратимо адсорбируемыми соединениями при переводе электрода из ячейки в капилляр. Изобретение относится к анализу материалов с помощью оптических методов путем адсорбции компонентов

Способ определения потенциала поверхности // 2119157

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к области аналитической электрохимии, и может быть использовано при определении свойств грунтов, горных пород, строительных материалов, а также свойств поверхностей раздела фаз

Полупроводниковый материал для адсорбционных сенсоров низкомолекулярных органических соединений и способ его изготовления // 2119695

Изобретение относится к составу полупроводниковых материалов, используемых в адсорбционных сенсорах для обнаружения и количественной оценки концентрации низкомолекулярных органических соединений, преимущественно кетонов в выдыхаемом людьми воздухе, и к технологии изготовления таких полупроводниковых материалов

Электрохимический датчик концентрации водорода в газовых и жидких средах // 2120624

Способ определения содержания нефтепродуктов в воде // 2126965

Устройство для анализа воды // 2132049