Способ количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях

ОП ИСАНИЕ

ЙЗОБРЕТЕпИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ВТИЗЬСТВУ (61) Дополнительное к ввт. сеид-ву (22) Заявлено 280280 (21) 2882576/28-13 с присоединением заявки Йо(23) ПриоритетОпубликовано 301081. Бюллетень Н9 40

Дата опубликования описания 301р81

Союз Советскик

Социапистичвскив

Республик

<1,877437 (51)М. Кл З

С 01 и 33/92

Государствеииый комитет

СССР по делам изобретеиий и открытий

Ю) у@К 611.39 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. Е. Формазюк, I . Е. Добрецов, В. А. Полесский и Ю. A. Владимиров

Второй московский ордена Ленина государстве медицинский институт им. Н.И.Пирогова (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ЛИПОПРОТЕИДОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ

ЖИДКОСТЯХ

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях с диагностической целью.

Известен способ. количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях путем выделения липопротеидов с последующей обработкой их химическими реактивами f1).

Однако известный способ сложен и трудоемок, требует сложной аппаратуры и не обеспечивает надежных результатов из-за низкой чувствительности.

Пель изобретения — повышение чув- 15 ствительности способа и упрощение его..

Указанная-цель достигается тем, что при осуществлении способа количественного определения липопротеи- 20 дов в биологических жидкостях ду ем выделения липопротеидов с, последующей обработкой их химическими реактивами, липопротеиды последовательно обрабатывают 0,01-0,15 молярным трис.

НС! буфером, 5-15%-ным раствором хлористого натрия и 0,1-0.5.%. раствора

ЭДТА, в полученный раствор вводят

10-100 мкм 1-анилинонафталин-8-сульфоната, проводят флуориметрирование 30 раствора при возбуждении Флоуресценции от 340 до 420 нм при длине волны испускания 460-530 нм и определяют концентрацию липопротеида по формуле

А Д

С

В Р где С вЂ” количество липопротеида, мг/1 мм раствора;

Д вЂ” содержание фосфолипидов в конкретном классе липопротеида;

A — интенсивность флуореаценции

1-анилинонафталин-8-сульфоната в растворе липопротеида;

 — интенсивность флуоресценции

1-анилинонафталин-8-сульфоната в 35%-ном растворе этанола;

Р— коэффициент зависимости интенсивности флуоресценции раствора 1-анилинонафталин8-сульфоната от концентрации фосфолипидов.

П р е р В, 37 лет, через 12 ч после приема пищи берут кровь для анализа. Из полученной после осаждения клеточных элементов плазмы методом последовательного

877437

Формула изобретения

Способ количественного определения липопротеидов в биологических жидкостях путем выделения липопротеидов с последующей обработкой их химическими реактивами, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и упро-. щения его, липопротеиды последовательно обрабатывают 0,01-0,15 молярным трис - НС1 буфером, 5-15%-ным раствором хлористого натрия и 0,1-0,5 % раствора ЭДТА, в полученный раствор вводят 10-100 мкм. 1-анилинонафталин8-сульфоната, проводят Флуориметриро-

30 вание раствора при возбуждении флуо-" ресценции от 340 до 420 нм при длине волны испускания 460-530 нм и определяют концентрацию липопротеида по формуле

А Д

С

В Р. где С

50

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Руководство по клиническим лабораторным методам исследований. Под щ0 ред. Смирновой и кост. N. 1964, с. 223.

ВИИИПИ Заказ 9605/68 Тираж 910 Подписное

Филиал ППП Патент, r.Óæãoðoä,óë.Ïðoåêòíàÿ,4 ультрацентрифугирования выделяют липопротеиды высокой и низкой плотности. По предлагаемому методу определяют концентрацию липоцротеидов. Для этого выделенные липопротеиды растворяют в 0,01 молярном трис. НС1, добавляют 5% хлористого натрия, 0,1% этилендиаминтетраацетата и раствор .1-анилинонафталин-8-сульфоната до конечной концентрации 50 мкМ. Измеряют Флуоресценцию полученного раство- ра при 480 нм и возбуждении при

365 нм. Полученное значение интенсивности Флуоресценции делят на интенсивность флуоресценции 1-анилинонафталин-8-сульфоната в 35%-ном зтаноле, умножают на процентное содержание 1 фосфолипидов в данном классе липопротеида и делят на коэффициент P. Время анализа 5 мин, объем плазмы для определения концентрации липопротеидов 7 мкл. Концентрация липопротеидов высокой плотности и низкой плотности у донора В. равны 225 м 2% и 250 мг% соответственно.

Пример 2. У пациента К., 48 лет, который страдал атеросклерозом коронарных артерий, что клинически проявлялось в приступах стенокардии, специфических изменениях ЭКГ, брали кровь из кубительной вены. Выделенные,,последовательным ультрацентрифугированием липопротеиды высокой

H низкой плотности растворами в 0,15 молярном трис НС1, добавляют 15% хлористого натрия и 0,5% зтилендиамининтетраацетата. В полученный раствор вводят 10 мкй 1-анилинонафталин-8-сульфоната и проводят флуоро- метрирование раствора при 400 км (при возбуждении 340. нм). Концентрацию липопротеидов определяют также как в примере 1. Объем используемой плазмы 5 мкл, время анализа 5 мин. Концентрация липопротеидов высокой плотности и низкой плотности у пациента К. равны 180 мг% и 350 мг % соответственно.

Пример 3. У. кролика-самца породы Шиншилла весом 2,5 кг вызывали экспериментальный атеросклероз скармливанием холестерина из расче— та 0,2 г/1 кг веса животного. Через

4 мес кормления кролика забивают, из крови выделяют липопротеиды высокой и низкой плотности последовательным ультрацентрифугированием. Липопротеиды растворяют в 0,01 молярном трис °

HCl, добавляют 5% хлористого натрия, 0,1% этилендиаминтетраацетата и раствор 1-анилинонафталин-8"сульфоната до конечной концентрации 100 мкй.

Далее проводят Флуорометрирование полученного раствора при 530 нм и возбуждении при 420 нм. Осуществляют расчет концентрации липопротеидов аналогично примеру 1. Время анализа .

5 мин, объем плазмы 6 мкл. Содержание липопротеидов низкой и высокой плотности у кролика с алиментарной гиперхолестеринемией равно 735 мг % и 123 мг % соответственно.

Предлагаемый способ обладает большой чувствительностью, что повышает точность и информативность полученных результатов, при этом способ прост и экономичен и не требует дефицитных и дорогих химических реактивов и сложной аппаратуры. количество липопротеида, мг/1 мм раствора; содержание Фосфолипидов в конкретном классе липопротеида; интенсивность флуоресценции

1-анилинонафталин-8-сульфоната в растворе липбпротеида; интенсивность Флуоресценции

1-анилинонафталин-8-сульфоната в 35%-ном растворе этанола; коэффициент зависимости интенсивíости флуоресценции раствора 1-анилинонафталин8-сульфоната от концентрации фос фолипидов .