Способ определения гидрокортизона

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

«i>826233 (6t) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено; 070679 (21) 2776740/23-04 (54 2М Кл с присоединением заявки ¹

G 0l N 33/15

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликоваио300481. Бюллетень №16 (53) УДК 543.426 (088.8) Дата опубликовакияописания 300481 (72) Авторы изобретения

Л;А. Хабаров, В.Н. Иванов, Л.П. Хабарова и В.Д. Долгополов

Читинский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДРОКОР1ИЗОНА

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения гидрокортизона — лекарственного препарата.

Известен спектрофотометрический способ количественного определения гидрокортизона, заключающийся в измерении поглощения при длине волн около 525 нм после взаимодействия гидрокортизона с раствором синего тетразолиния (11.

Недостатки способа — невысокая чувствительность (3 мкг/мл) и неселективность, так как все стероиды которые имеют восстанавливающие функциональные группы Ц.-кетольного типа (кортизон, преднизолон, прегнин, преднизон и т.д.) мешают определению.

Известен способ определения гидрокортизона путем обработки пробы анализируемого вещества смесью концентрированной серной кислоты и спирта с последующим измерением флюоресценции полученного раствора (2 ).

Недостатки способа — невысокаячувствительность (0,6 мкг/мп) и неселективность,так как все производные циклопентапергидрофенантрена (преднизон, преднизолон, кортизон, метилпреднизолон,гексаметазон и mph) в указанных условиях образуют флюоресценцию.

Цель изобретения — повышение чувствительности и специфичности способа.

Поставленная цель достигается тем, что в:способе количественного определения гидрокортизона, заключающемся в обработке анализируемой пробы химическим реагентом с последующим измерением флюоресценции полученного раствора, в качестве химического реагента используют перекись водорода в солянокислой среде.

Спектр флюоресценции полученного при:этом раствора лежит в области QT 440 до 620 нм с;максимумом

541 нм, а спектр возбуждения от 320 до 440 нм с максимумом 391 нм.

Зависимость между концентрацией гидрокортиэона и флюоресценцией, полученная после взаимодействия продукта реакции, представлена в табл.1.

826233

Т а блица

Концентрация гидрокорти- Относительная интенсивэона, мкг/мл ность флюоресценции, Ъ

0,01

0,02

10 10

20 18

30 23

40 34

50 43

60 51

10 10

18 19

26 27

34 35

43 43

51 51

59 .60

26

0,03

0,04

0 05

0,06

70 59

0,07

70 67 68

80 68

0,08

90 80 80

75 76

84 85

0,09

0,10

100 89

Таблица 2

Относительная интенсивность флюоресценции, Ъ

Концентрация соляной кислоты, Ъ

15

20

90

36

Концентрация перекиси водорода, ю ф

Относительная интенсивность флюоресценции, %

20. 0,01

0,03

0,05

0,08

0,10

0,15

Содержание гидрокортизона, мкг/мл

Навеска, г

1,0270

65 1, 0721

48,5

49,6

0,1 1

0,2 2

0,3 3

0,4 4

0 5 5

0,6 6

0,7 7 0,8 8

0,9 9

1,0 10

Зависимость интенсивности флюоресценции гидрокортизона(10 мкг/мл) от концентрации соляной кислоты представлена в табл.2.

Зависимость интенсивности флюоресценции гидрокортизона (10 мкг/мл) в концентрированной соляной кислоте от концентрации перекиси водорода представлена в табл. 3.

Т а б л и ц а 3

Пример 1. Определение соI держания гидрокортизона в растворе. 1 мл анализируемого раствора переносят в мерную колбу на 1.0 мл, доводят,цистиллированной водой до метки.К 1мл данного раствора прибавляют 9 мл концентрированного раствора соляной кислоты, 1 каплю 0,1Ъ-ного раствора. перекиси водорода перемешивают и через 20 мин флюориметрируют.

Содержание гидрокортизона рассчитывают по отношению к стандартному

3S раствору с содержанием 25 мкг/мл.

Для чего к 10 мл стандартного раствора в концентрированной соляной кислоте прибавляют 1 каплю 0,1Ъ-ного раствора перекиси водорода и через

40 20 мин флюориметрируют одновременно с исследуемыми образцами.

Пример 2. Определение гидрокортизона в мази.

К 0,1 г (точная навеска) исследуемого образца (мази) прибавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты и энергично встряхивают 10-15 мин.

К 1 мл данного раствора прибавляют, 9 мл концентрированной соляной кислоты, 1-2 капли 0,1%-ного раствора пе О рекиси водорода, перемешивают и че:рез 20,мин. флюориметрируют по отношению к стандартному раствору с содержанием гидрокортизона 50 мкг/мл.

Результаты определения гидрокор55 тизона в 0,5%-ной гидрокортизоновой мази представлены в табл. 4 °

Таблица 4

826233

Продолжение табл.4, Продолжение табл.5

50 3

48,9

49,2

48,8

0,0972

0,0987

22,1

20,7

0,0974

0,0971

20,4

48,6

49,3

48,7

48,3

20,8

0,0967

19,9

Формула изобретения

Навеска, r

Содержание гидрокортизона, мкг/мл

0,1224

0,1197

0,1054

0,1028

22,3

21,4

21,1

20,9

Составитель С. Хованская

Редактор Е. Дичинская Техред Г.Маточка

Корректор М. Коста

Заказ 2368/33 Тираж 907

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Подписное

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная, 4

1,0428

1,0117

1,0108

0,9724

0,9618

0,9537

0,9358

0,9231

Пример 3, Определение гидрокортизона в преднизолоне.

0,1 r. (точная навеска) исследуемого образца переносят в мерную колбу на 50 мл, прибавляют 30-40 мл концентрированной соляной кислоты и энергично встряхивают 5-10 мин.

Затем концентрированной соляной кислотой доводят до метки. К 10 мл 25 данного раствора прибавляют 1-2 капли О,ГЪ-ного раствора перекиси водорода, перемешивают и через 20 мин. флюориметрируют по отношению к стандартному раствору с содержанием 30

20 мкг/мл гидрокортизона.

Результаты определения гидрокортизона в преднизолоне (искусственная смесь, содержащая 1% гидрокортизона) представлены в табл.5.

Таблица

Использование предлагаемого способа позволяет отличать гидрокортизон от других стероидов, а также определять наличие гидрокортизона в качестве примеси в других стероидах (чувствительность способа

0,01 мкг/мл гидрокортиэона) .

Способ определения гидрокортиэона путем обработки пробы анализируеМого вещества химическим реагентом с последующим измерением флюоре-. сценции полученного раствора, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения селективиости спосо- . ба и его чувствительности, в качестве химического реагента используют перекись водорода в солянокислой среде.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Международная фармакопея. Женева, 1969, с. 275, 767.

2. Папков Ю.A. и Усватова И.Я.

Флюориметрический метод определения

11-окси-кортикостероидов в плазме периферической крови. Методы исследования некоторых гормонов и медиаторов.

Сборник. М., 1965, с. 137-145 (прототип) .