Способ подготовки пробы картофеля для определения пораженности фитопатогенной микрофлорой хемилюминесцентным анализом

 

")т -(, р>782767

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

34 АВТОИ:КОМУ СВИДЕТЫЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заns eHo 10.05.78 (2f) 2380442/30-15 (51)M. КЛ. с присоединением заявки йо—

A 01 Н 1/04

Государственный комитет

СССР но делам изобретений н открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 30.1180. Бюллетень М 44 (53) УДК 575. 42 (088.8) Дата опубликования описания 30.11,80 (72) Авторы изобретения

Н.A.Êî÷óð, Е.Ф.Малыгина, И.В.Эльперин, А.М.Черный,В.И.Луцык и В.Л.Зима

Киевский технологический инотнтут пищевбй промышленности и Киевский государственный университет им. Т.Г.Шевченко (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРОБЫ КАРТОФЕЛЯ

ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОРАЖЕННОСТИ ФИТОПАТОГЕННОЧ

МИКРОФЛОРОЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ АНАЛИЗОМ

Изобретение относится к области фитопатологии, в частности к способам определения пораженности клубней картофеля, и может быть использовано в сельском хозяйстве и пищевой промь - S шленности, а также при изучении вопросов генетики, селекции и биологии картофеля.

Известен способ обнаружения фитопатогенного поражения картофеля,при 1О котором водную вытяжку сока картофеля подвергают электролитическому окислению и по уровню возникающего при этом свечения устанавливают наличие фитопатогенного заболевания клуб- f$ ней картофеля $1$ .

Недостатком известного способа является длительность проведения анализа (4-5 ч), использование для анализа только части клубня, что приво- 26 дит к не очной диагностике пораженных клубней, особенно на ранних стадиях.заболевания. Кроме того, для осуществления известного способа необходимо использовать благородные 25 металлы (платину и золото).

Цель изобретения — устранение указанных недостатков.

Поставленная цель достигается следующим образом. ЗО

Иэ клубней картофеля отжимают сок и разбавляют его дистиллированной водой в соотношении 1г24 соответственно. К полученному раствору последовательно добавляют раствор бенэидина концентрации 2 ° 10 М, раствор люминола концентрации 2 ° 10 M и рН 12,412,8, перекиси водорода, концентрации 7,3 10 М и осуществляют хемилюминесцентную реакцию.

По уровню возникающего свечения устанавливают наличие фитопатогенного заболевания клубней картофеля.

Пример . Из целого клубня картофеля на соковыжималке получают сок, фильтруют через несколько (4-5) слоев марли и разбавляют дистиллированной водой в соотношении

1:24. Для одного анализа берут 5 мм разбавленного таким образом сока и добавляют последовательно следующие реактивы:

-4

1,2 мм (2-2,6 мл) 2 10 M рабочего раствора бензидина NH2 СБН4 Сбн4. и Н, полученного разбавленнем 2 мм исходного 5 ° 10 М раствора бенэндина в 50 мл дистиллированной воды, 2,1 мм (0,8-1,2 мл )

2 10 М рабочего раствора люминола в 3,2 10 -4,2 .10 2M NaOH, полу782767

Состояние клубней по данным анализа и визуального обследования

Количество импульсов за 30 с

Диагностирование по фитофторе клубней,шт

Количество исследован-. ных. клубней минимальных максималь- среднее ных арифметическое под сомнением ие

Б — здоровый 28

12000

1138

166

804

129

5000

Ч

250

134

НС- 7

2657000 . 1644000

166000

89000

867000

Б фитофторный 31

14-22000

2600000

° l

HC 3

3148000 2007500

Б -мороженный с фитофторой 5

1162000

942000

720000

Ч 3.

Б — с механическими повреждениями, фитофторой

947000

2740000,, 1836000

1512000 1120400

Ч

П

Б фитофтора + мокрая гниль 5

2593000 1603000 1412000 1192400

Б — фитофтора+ сухая гниль 5

343000

1150400

2569000

1927000

639000

НС-сухая гниль+ фитофтора

1825000 1825000 1825000 ченного разбавлением исходного 0,05 М его раствора.

3 10 мл (8-14 мл) 7,3-10 4моль/л раствора перекиси водорода.

Исходный 0,05 М раствор люминола готовят растворением 0,1 r очищенного люминола в 10 мл 5%-ного раствора едкого натра. Срок годности раствора

2 дня. рабочий 2 10 М раствор люминола в 3,2 10 2 в 4,2 10 раствора едкого натра готовят путем разбавления 1 мл исходного 0,05 М раствора люминола в

300 мл 7,3 ° 10 моль/л раствора перекиси водорода с добавлением 9-12 мл

1 н NaOH. pH среды — от 12,4 до 12,6.

Срок годности раствора 2 дня. 15

Исходный раствор бензидина с концентрацией 5 10". М готовят следующим образом. В мерную колбу на 200 мл наливают примерно 100 мл дистиллированной воды,щ прибавляют 2,3 мл ледяной уксусной кислоты и 184 мг очищенного бензидина колбу нагревают на водяной бане при

60 C„ постоянно взбалтывая, после водного растворения бензидина добавляют

5,45 r уксуснокислого натрия, охлаждают и доводят дистиллированной водой до метки. Срок годности раствора 6 суток.

По интенсивности возникающего в результате реакции хемилюминесцентного свечения судят о наличии фитопатогенного заболевания клубней картофеля,.при этом интенсивность свечения у пораженных клубней в 100-2000 раз выше, чем у непораженных., Результаты хемилюминесцетного анализа по определению поражения клубней картофеля фитофторой приведены в таблице. (Сорт Б — Бородинский, Ч- Чарив-, ница, HC — другие сорта и несортовая).

782767

Продолжение табл.

Количество импульсов за 30 с

Диагностирование по фитофторе клубней,шт мальсреднее арифметическое поражение здоровые под сомнением "

НС фитофтора+ мокрая гниль 1

7600ОО

766000 766000

Б фитофтора+ мокрая и сухая гнили 1

872000 872000

872000

Б фитофтора+ сухая гниль+ механические повреждения 4

285000 2848000 1845000

Б фитофтора+ желез.пятнист. 2

1855000

1760000 1950000

2075

5000

165

Б мороженный

Ч мороженный

293

643

Изобретение позволяет выявить ран- ние стадии пораженности клубней картофеля фитофторой, а также другими грибковыми и бактериальными заболева- З киями, при этом сам анализ осуществляется в течение 3-4 мин.

Формула изобретения

Способ подготовки пробы картофеля для определения пораженности Фитопатогенной микрофлорой хемилюминесцентным анализом, отличающийся тем, что, с целью сокращения продолжи-

Составитель Л.Мишустина

Редактор Т.Никольская ТехредМ.Табакович КорректорО.Ковинская

Заказ 8407/3 Тираж 723 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

11 3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4

Состояние клубней по данным анализа и визуального обследования

Количество иссле- дованных клубней тельности анализа и повышения точности, иэ клубней картофеля отжимают сок, разбавляют его дистиллированной водой в соотношении 1:24 соответственно и последовательно добавляют раствор бенэидина концентрации 2-10 М раствор

-4 люминола концентрации 2 10 М и рН

12,4-12,8, раствор перекиси водорода концентрации 7,3 10 моль/л.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1 ° Авторское свидетельство СССР

9 402352, кл.А 01 Н 1/04, 1972 (прототип).

Способ подготовки пробы картофеля для определения пораженности фитопатогенной микрофлорой хемилюминесцентным анализом Способ подготовки пробы картофеля для определения пораженности фитопатогенной микрофлорой хемилюминесцентным анализом Способ подготовки пробы картофеля для определения пораженности фитопатогенной микрофлорой хемилюминесцентным анализом 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к способам генетико-селекционных исследований
Изобретение относится к созданию опылителей мужско-стерильных линий и мужско-стерильных гибридов и может быть использовано в сельском хозяйстве, а именно в селекции и семеноводстве сахарной свеклы

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений
Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а более конкретно к культивированию in vitro, выделенных из семян зародышей и может быть использовано для размножения сортов и видов растений с плохо прорастающими семенами

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции, и может найти применение в селекционной работе при отборе растений с высокой семенной продуктивностью

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений на продуктивность и адаптивность, может быть использовано в селекции яровой твердой пшеницы и других злаковых культур на многоузловость корневой системы, скорость, засухоустойчивость и другие признаки, контролируемые цитогенами
Наверх