Способ подготовки пробы картофеля для определения пораженности фитопатогенной микрофлорой хемилюминесцентным анализом

 

")т -(, р>782767

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

34 АВТОИ:КОМУ СВИДЕТЫЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заns eHo 10.05.78 (2f) 2380442/30-15 (51)M. КЛ. с присоединением заявки йо—

A 01 Н 1/04

Государственный комитет

СССР но делам изобретений н открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 30.1180. Бюллетень М 44 (53) УДК 575. 42 (088.8) Дата опубликования описания 30.11,80 (72) Авторы изобретения

Н.A.Êî÷óð, Е.Ф.Малыгина, И.В.Эльперин, А.М.Черный,В.И.Луцык и В.Л.Зима

Киевский технологический инотнтут пищевбй промышленности и Киевский государственный университет им. Т.Г.Шевченко (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРОБЫ КАРТОФЕЛЯ

ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОРАЖЕННОСТИ ФИТОПАТОГЕННОЧ

МИКРОФЛОРОЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ АНАЛИЗОМ

Изобретение относится к области фитопатологии, в частности к способам определения пораженности клубней картофеля, и может быть использовано в сельском хозяйстве и пищевой промь - S шленности, а также при изучении вопросов генетики, селекции и биологии картофеля.

Известен способ обнаружения фитопатогенного поражения картофеля,при 1О котором водную вытяжку сока картофеля подвергают электролитическому окислению и по уровню возникающего при этом свечения устанавливают наличие фитопатогенного заболевания клуб- f$ ней картофеля $1$ .

Недостатком известного способа является длительность проведения анализа (4-5 ч), использование для анализа только части клубня, что приво- 26 дит к не очной диагностике пораженных клубней, особенно на ранних стадиях.заболевания. Кроме того, для осуществления известного способа необходимо использовать благородные 25 металлы (платину и золото).

Цель изобретения — устранение указанных недостатков.

Поставленная цель достигается следующим образом. ЗО

Иэ клубней картофеля отжимают сок и разбавляют его дистиллированной водой в соотношении 1г24 соответственно. К полученному раствору последовательно добавляют раствор бенэидина концентрации 2 ° 10 М, раствор люминола концентрации 2 ° 10 M и рН 12,412,8, перекиси водорода, концентрации 7,3 10 М и осуществляют хемилюминесцентную реакцию.

По уровню возникающего свечения устанавливают наличие фитопатогенного заболевания клубней картофеля.

Пример . Из целого клубня картофеля на соковыжималке получают сок, фильтруют через несколько (4-5) слоев марли и разбавляют дистиллированной водой в соотношении

1:24. Для одного анализа берут 5 мм разбавленного таким образом сока и добавляют последовательно следующие реактивы:

-4

1,2 мм (2-2,6 мл) 2 10 M рабочего раствора бензидина NH2 СБН4 Сбн4. и Н, полученного разбавленнем 2 мм исходного 5 ° 10 М раствора бенэндина в 50 мл дистиллированной воды, 2,1 мм (0,8-1,2 мл )

2 10 М рабочего раствора люминола в 3,2 10 -4,2 .10 2M NaOH, полу782767

Состояние клубней по данным анализа и визуального обследования

Количество импульсов за 30 с

Диагностирование по фитофторе клубней,шт

Количество исследован-. ных. клубней минимальных максималь- среднее ных арифметическое под сомнением ие

Б — здоровый 28

12000

1138

166

804

129

5000

Ч

250

134

НС- 7

2657000 . 1644000

166000

89000

867000

Б фитофторный 31

14-22000

2600000

° l

HC 3

3148000 2007500

Б -мороженный с фитофторой 5

1162000

942000

720000

Ч 3.

Б — с механическими повреждениями, фитофторой

947000

2740000,, 1836000

1512000 1120400

Ч

П

Б фитофтора + мокрая гниль 5

2593000 1603000 1412000 1192400

Б — фитофтора+ сухая гниль 5

343000

1150400

2569000

1927000

639000

НС-сухая гниль+ фитофтора

1825000 1825000 1825000 ченного разбавлением исходного 0,05 М его раствора.

3 10 мл (8-14 мл) 7,3-10 4моль/л раствора перекиси водорода.

Исходный 0,05 М раствор люминола готовят растворением 0,1 r очищенного люминола в 10 мл 5%-ного раствора едкого натра. Срок годности раствора

2 дня. рабочий 2 10 М раствор люминола в 3,2 10 2 в 4,2 10 раствора едкого натра готовят путем разбавления 1 мл исходного 0,05 М раствора люминола в

300 мл 7,3 ° 10 моль/л раствора перекиси водорода с добавлением 9-12 мл

1 н NaOH. pH среды — от 12,4 до 12,6.

Срок годности раствора 2 дня. 15

Исходный раствор бензидина с концентрацией 5 10". М готовят следующим образом. В мерную колбу на 200 мл наливают примерно 100 мл дистиллированной воды,щ прибавляют 2,3 мл ледяной уксусной кислоты и 184 мг очищенного бензидина колбу нагревают на водяной бане при

60 C„ постоянно взбалтывая, после водного растворения бензидина добавляют

5,45 r уксуснокислого натрия, охлаждают и доводят дистиллированной водой до метки. Срок годности раствора 6 суток.

По интенсивности возникающего в результате реакции хемилюминесцентного свечения судят о наличии фитопатогенного заболевания клубней картофеля,.при этом интенсивность свечения у пораженных клубней в 100-2000 раз выше, чем у непораженных., Результаты хемилюминесцетного анализа по определению поражения клубней картофеля фитофторой приведены в таблице. (Сорт Б — Бородинский, Ч- Чарив-, ница, HC — другие сорта и несортовая).

782767

Продолжение табл.

Количество импульсов за 30 с

Диагностирование по фитофторе клубней,шт мальсреднее арифметическое поражение здоровые под сомнением "

НС фитофтора+ мокрая гниль 1

7600ОО

766000 766000

Б фитофтора+ мокрая и сухая гнили 1

872000 872000

872000

Б фитофтора+ сухая гниль+ механические повреждения 4

285000 2848000 1845000

Б фитофтора+ желез.пятнист. 2

1855000

1760000 1950000

2075

5000

165

Б мороженный

Ч мороженный

293

643

Изобретение позволяет выявить ран- ние стадии пораженности клубней картофеля фитофторой, а также другими грибковыми и бактериальными заболева- З киями, при этом сам анализ осуществляется в течение 3-4 мин.

Формула изобретения

Способ подготовки пробы картофеля для определения пораженности Фитопатогенной микрофлорой хемилюминесцентным анализом, отличающийся тем, что, с целью сокращения продолжи-

Составитель Л.Мишустина

Редактор Т.Никольская ТехредМ.Табакович КорректорО.Ковинская

Заказ 8407/3 Тираж 723 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

11 3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4

Состояние клубней по данным анализа и визуального обследования

Количество иссле- дованных клубней тельности анализа и повышения точности, иэ клубней картофеля отжимают сок, разбавляют его дистиллированной водой в соотношении 1:24 соответственно и последовательно добавляют раствор бенэидина концентрации 2-10 М раствор

-4 люминола концентрации 2 10 М и рН

12,4-12,8, раствор перекиси водорода концентрации 7,3 10 моль/л.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1 ° Авторское свидетельство СССР

9 402352, кл.А 01 Н 1/04, 1972 (прототип).