Колориметрический способ определения лимонной кислоты в сыре
Союз Советсккн
Социалистические
Реслублнк
ЬП ИСАНИЕ
ИЗЬБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕПЬСТВУ " 734562 (6I ) jl,0è0ëíèòåëüí0å к авт. с вид-ву (22) 3aявлено 16.01.78 (21) 2570763/28-13 (5I )M. Кл.
G 01 N 33/04
А 23 С 19/00 с присоединением заявки.%
Гасударстеенный комнтет (23) Приоритет
Опубликовано 15.05.80. Бюллетень J% 18 по делам изобретений н открытий (53) УДК
543.42 (088.8) Дата опубликования описания 18.05.80 (?2) Авторы изобретения
В. А. Липатова, Л. Н. Чеботарев и Н. И. Григоров
Всесоюзный научно-исследовательский институт маслодельной и с ыродельной промьныленности (7. I ) Заявитель (54) КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИМОННОЙ
КИСЛОТЫ В СЫРЕ
Изобретение относится к сыродельной промышленности.
Содержание лимонной кислоты в сыре является одним из показаталей степени развития ароматообразующей микрофлоры и может служить косвенной оценкой качества готового продукта. Это имеет важное значение в свете наметившейся в последнее время тенденции к переходу на инструментальные методы контроля в сыроделии.
1О
В настоящее время известен способ определения лимонной кислоты, заключающийся в подготовке реактивов (трихлоруксусной кислоты, пиридина, уксусйого ангидрида и раствора нитрата) к анализу; k5 подготовке пробы исследуемого продукта (дозировка навески сыра, измельчение и диспергирование в теплой дистиллированной воде, охлаждение до комнатной температуры, внесение трихлоруксусной кислоты, выдержка в течение 30 мин и фильтрование); получонии окрашенного раствора (добавление к фильтрату пиридина и уксусного ангидрида,. перемешивание выдержка в течение 30 мин
2 в водяной бане, охлаждение до комнатной температуры); измерении оптической плотности; сравнении результатов измерения с калибровочной кривой и определение содержания лимонной кислоты по формулейЗЭтот метод известен под названием пиридин — уксусно-ангидридный и основан на окислении лимонной кислоты пиридином в ацетальдегид, за счет чего и происходит окрашивание раствора.
Однако этот метод не нашел широкого применения в производстве из-за высокой стоимости используемых реактивов и их токсичности. Токсичным является также и продукт реакщп лимонной кислоты с пиридином — ацетал ьде гид.
Целью изобретения является повышение точности определения.
Цель достигается тем, что окрашенный раствор получают добавлением спиртового раствора ванилина к водному раствору лимонной кислоты, при этом последний получают экстракцией серным эфиром с последующей его отгонкой.
734562
15
Сх ° Ч
10 G
2,0%
-2,36
2,32.
После пресса
2,0%
1,10
1,12
0,84
0,85
2,0%
0,387
0,183
2,0%
0,381
0,180
2,0%
0,061
2%
0,060
Предлагаемый способ включает следующие операции: подготовку реактивов (серный эфир, серная кислота, этиловый спирт и ванилин); подготовку пробы исследуемого продукта (измельчение, дозировка навески сыра, экстрагирование лимонной кислоты серным эфиром, отгонка эфира при 38 С, разбавление сухого остатка водой и фильтрование); получение окрашенного раствора (добавление к фильтрату спиртового раствора ванилина; выпаривание, добавление к сухому остатку серной кислоты); измерение оптической плотности; сравнение результатов измерения с калибровочной кривой и определение содержания лимонной кислоты по формуле.
Окрашивание происходит за счет реакции между ванилином и лимонной кислотой в присутствии серной кислоты, В качестве расчетной используют формулу где А — содержание лимонной кислоты в продукте,%;
Сх — показатель, определснный по калибровочной таблице, характеризующий содержание лимонной кислоты в окрашенном растворе, мг;
V — — объем окрашенного раствора, мл;
G — навеска сыра, г.
Пример. Навеску костромского сыра (5 r) после измельчения помещали в делительную воронку на 150 мл и экстрагировали 3 порциями серного эфира (40, 30, 20 мл соответственно). Соединенные экстракты перенесли в колбу на 100 мл и содержимое кол. бы выпарили досуха на водяной бане при
38 С. К сухому остатку прилили 15 мл дистиллированной воды, поместили в холодильник на 10 мин и профильтровали через безэольный фильтр. Готовый фильтрат перенесли в вьшаривательную фарфоровую чашку, внесли
10 мл этанола и 20 мг ванилина. Полученную смесь тщательно перемешивали и выпаривали досуха на водяной бане при 100 С. К сухому остатку прибавили 3 капли концентрированной серной кислоты, нагрели на водяной бане в течение 15 мин до появления темно-фиолетового окрашивания.
Содержимое чашки растворили в дистиллированной воде, перелили в мерный цилиндр, довели объем до 10 мл и измерили оптическую плотность раствора окрашенного в желто-зеленый цвет на ФЭК вЂ” 56 м при длине волны 364 км в кюветах с толщиной рабочего слоя 1,0 мл. Далее, пользуясь калибровочной кривой (см. чертеж) и расчетной формулой, определили содержание лимонной кислоты в сыре.
Аналогичные исследования были проведены для сыров разной степени зрелости (после пресса, через 4, 6, 10,12 и 14 дней). .Для определения достоверности метода содержание лимонной кислоты в тех же сырах было определено стандартным методом, который о методу специалистов считается наиболее точным и может быть использован в качестве арбитражного.
Результаты эксперимента представлены в таблице.
734562 ь
Ъ
О 44 gS
Д Ьаиамиг яииаюгий eupeemai, мв
ЦНИИПИ Заказ 2159/49 Тираж 1019, Подписное
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4
Данные таблицы показывают, что рекомендуемый метод дает отклонение от стандартного метода на 2%, т.е. он является вполне достоверным.
Калибровочная кривая для одного и того же прибора строится периодически в зависи.мости от наличйя реактивов одной партии, т.е. с одинаковой степенью очистки.
Пример построения калибровочной кривой.
Готовят серию растворов лимонной кислоты следующих концентраций: 0,2; 0,4; 0,6; 0,8;
1,0 мг, отмеряя соответственно . 2,4,6,8,10 мл. стандартного раствора кислоты. 1 г безводной
"или 1,0416 r одноводной лимонной кислоты растворяют в мерной колбе на 1 л в 1 N растворе Н $0 . 100 мл этого раствора доводят в другой мерной колбе до 1 л Н S04 (1 мл раствора содержит 0,1 мг кислоты), помещают в выпаривательную чашку, туда же вносят
3 мл спиртового раствора ванилина, тщательно перемешивают и содержимое выпаривают досуха. К сухому остатку добавляют 3 капли концентрированной серной кислоты и нагревают до появления темно-фиолетового окрашив алия.
Полученный осадок растворяют в воде, доводят до объема 10 мл и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов относительно дистиллированной воды на ФЭК при длине волны 364 км в кюветах с толщиной рабочего слоя 1,0 мл.
Показание экстинкций соответствует мг/мл содержанию лимонной кислоты по калибровочной кривой (см. чертеж).
Использование способа в практике позволит повысить точность определения содержания лимонной кислоты в сыре, при этом он не требует использования дорогостоящих реактивов и более благоприятен для работы обслуживающего персонала. о
Формула изобретения
Колориметрический способ определения лиf5 монной кислоты В сыре, включающий подготовку исходных компонентов, получение окрашенного раствора для колориметрирования, изме. рение оптической плотности и определение содержания лимонной кислоты расчетным путем, 20 отличающийся тем, по,сцелью повышения точности определения, окрашенный раствор получают добавлением спиртового раствора ванилина к водному раствору лимонной кислоты, при этом последний получают экстракцией серным эфиром с последующей его отгонкой.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Международный стандарт, Рег. N ИСО
2963 — 74. Сыры. Контрольный метод определения содержания лимонной кислоты (прототип).
