Способ количественного определения оксикобаламина в ферментационной среде
ОП САНИ Е
ИЗОБРЕТЕНИЯ пц 70082
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 06.10.77 (21) 2533188/23-04 с присоединением,аявки № (51) М Кл
G 01N 21/24
ГосУдаРстеенный комитет (23) Прио1,и .ст
СССР ло делам изобретений
II IIi, I:.;-:TI I (43) Опубликовано 30.11.79. Бюллетень № 44 (53) УДК 543.242.3 (088.8) (45) Дата опубликования описания 30.11.79 (72) Авторы изобретения
Т, П. Менщикова и В. И. Заворина (71) Заявитель Курганский комбинат медицинских препаратов и изделий «Синтез» (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ОКСИКОБАЛАМИНА В ФЕРМЕНТАЦИОННОЙ СРЕДЕ
Изобретение относится к области контроля производства витамина В» и может быть использовано при определении содержания кобаламинов в ферментационной среде.
Известен способ количественного определения оксикобаламина в ферментационной среде, заключающийся в том, что пробу анализируемого вещества подвергают нитритной обработке, гидролизу в кислой среде, полученный гидролизат обрабатывают цианистым натрием при рН 7,0 — 7,5, выдерживают раствор в темноте, очищают фенол четыреххлористой смесью, проводят экстракцию водой с добавлением ацетона, промывают эфиром полученный водный раствор витамина В е с последующим спектрофотометрированием полученного водного раствора при длине волны 548 нм (1).
Недостатком способа является его сложность.
Цель изобретения — упрощение способа.
Это достигается описываемым способом, который заключается в том, что пробу фсрментационной среды промывают водой, выделенную биомассу подвергают кислотному гидролизу при рН 4 — 4,5 при нагревании, гидролизат подвергают фотолизу на свету, очищают гидролизат активированным углем с последующим вымыванием с угля образовавшегося оксикобаламина этиловым спиртом и повторным фотолизом элюата с последующим спектрофотометрированием полученного р а створ а.
Пример. Проводят количественное определение содержания оксикобаламина в анализируемой пробе. Определенное количество пробы (40 мл) фугуют на лабораторной центрифуге при 5 — 6 тыс. оборотов в
1 мин в течение 25 мин.
Полученную после фуговки биомассу промывают дистиллированной водой (1 объем пробы: 1 объем дистиллированной воды) .
Далее проводят кислый гидролиз биомассы при рН 4 — 4,5 на водяной бане в течение
40 мин. Гидролизат отделяют на центрифуге и выдерживают на свету в течение 25—
30 мин. Затем гидролизат очищают активированным углем марки Б (на 60 мл гидролизата — 2 г угля). Далее проводят элюирование оксикобаламина с угля 65%-ным этиловым спиртом. Элюат выдерживают на свету 30 мин. Определяют содержан Ie оксикобаламинов спектрофотометрически при
Л=362 нм (максимум поглощения) окспкобаламинов. Расчет содержания оксикооаламинов в производственной пробе проводят по следующей формуле
700826 где С вЂ” содержание оксикобаламина в пробе, мкг/мл;
D — оптическая плотность элюата;
104 — коэффициент;
V! — объем элюата, мл;
1,06 — коэффициент потерь, выведенный по стандартному препарату; !. 4
Б!„— удельныи показатель поглощения оксикобаламина при 1=352 нм;
V> — объем производственной пробы, мл (г).
Для получения сравнительных данных параллельно проводят определение содержания оксикобаламина в производственной пробе известным способом.
Сравнительные данные представлены в таблице (С! — — 23,1; С вЂ” 23,5) Продолжение
Содержание оксикобаламинов, определенное существующим методом, мкг/мл
Содержание оксикобаламинов, определенное предлагаемым методом, мкг/мл
Содержание окси коба ламинов, определенное существующим методом, мкг/мл
Содержание оксикобаламинов определенное предлагаемым методом, мкг мл
Проба
Проба
Формула изобретения
10 щают гидролизат активированным углем с последующим вымыванием с угля оксикобаламина этиловым спиртом, повторным фотолизом элюата и спектрофотометрированием полученного раствора.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Раковский Ю. С. и Малярова 3. А.
О включении предшественника 5,6-диметилбензимидазола в молекулу витамина Вд.—
«Химфармжурнал», 7.50.63 (прототип) .
Способ количественного определения оксикобаламина в ферментационной среде, включающий спектрофотометрирование раствора, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, пробу анализируемой среды промывают водой, выделенную биомассу подвергают кислотному гидролизу при рН 4 — 4,5 при нагревании, гидролизат подвергают фотолизу на свету, очи- 20
Изд. № 626 Тираж 1090
Заказ 2519/15
Подписное
Типография, пр. Сапунова, 2
2
4
6
8
11
12
13
14
16
17
18
19
21
22
23
24
25,6
24,6
25,3
25,2
18,6
17,2
18,5
13,6
13,1 !
5,2
14,6 !
6,9 !
0,0
24,4
24,6
26,2
28,8
28,6
28,1
27,5
26,3
27,7
28,2
27,6
27,1
25,6
25,6
26,2
25,6
18,0
16,0
17,6
13,5
13,5
14,7
15,2
16,3 !
0,3
25,1
26,0
26,4
29,0
27,9
28,8
25,4
28,2
29,0
30,0
29,2
26,9
26
27
28
29
31
32
33
34
36
37
38
39
41
42
43
44
46
47
48
49
28,2
25,4
26,2
28,3
25,8
25,0
32,3
25,0
24,2
25,6
21,8
22,2
25,6
18,2
24,3
10,5
27,9
28,1
25,8
25,1
7,4
13,5
27,6
23,4
25,6
27,8
25,4
26,4
29,4
27,7
26,6
32,8
24,3
27,3
26,2
21,2
21,0
26,9
21,3
27,0
13,0
28,4
29,3
25,7
21,3
6,9
15,8
29,2
22,3
24,6
