Способ определения витамина а
¹ 76317
СССР
:Класс 42!, Зпэ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
4 Л, T1 ii 1 i p
1ГХ11Н(,1:;;
A. С. Вечер
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА А
Заявлено 26 апреля 1948 года в Комитет по изобретениям и открытиям лри Совете Министров СССР 3a № 379375
Опубликовано 31 октября 1949 года
Согласно изооретению, предлагается способ определения витамина А путем его адсорбции на бентоните из определенных растворителей.
Отличительной особенностью указанного способа .является образование цветной реакции на поверхности бентонита с витамином А.
Реакция характеризуется возникновением синей окраски на поверхНосТН безводного бентонита при добавлении раствора витамина А в бензине, хлороформе, бензоле, дихлорэтане, четыреххлористом углероде или ксилоле. Еще более интенсивно образуется синяя окраска на оентоните, специально обработанном соляной кислотой. Интенсивность синей окраски на абсорбенте прямо пропорциональна в известных пределах концентрации витамина А в данном растворителе.
Интенсивность окраски, возникающей на адсорбенте, может быть измерена визуальным способом или путем сравнения с цветной серией эталонов.
Ниже приводится способ определения витамина А с применением цветной серии этало:..ов.
2о свод. Выпус:;. 10, 194! г.
1. Приготовление реактива
Бентонит белого цвета и хороше"о качества размалывают в порошок. Затем на каждые 400 г воздушно-,сухого бентонита добавляют, перемешивая, 1 л 2 н соляной кислоты и кипятят смесь в течение одного часа с обратным охлаждением или оставляют стоять на сутки. После этого сливают отстоявшийся прозрачный слой жидкости, а бентонит промывают несколько раз водой до тех пор, пока промывные воды не перестанут давать кислую реакцию.
Отмытый материал высушивают, размалывают в порошок, просеивают через шелковое сито, снова сушат при температуре 110 — 115 в течение
2 — 3 час. и хранят в герметической таре. Такой бентонит состоит в ос .;овном из Н-монтмориллонита и обладает кислыми свойствами (реагирует со щелочью), 11. Составление цветной серии эталонов
Интенсивность синей окраски на поверхности адсорбента бентонита зависит от концентрации витамина Л в данном растворителе. Если берутся разные растворители, то
433
Ив 76317
Окраска эталонов соответствует концентрации витамина А
В бензине (петролейном эфире) Количество
В хлороформе ультрамарина на 1 г бентонита
1Ев1мл (И=0,3т) Микрограмм в1мл
Микрограмм, 7Е в 1 ил в 1 ил (1Е=0,3т) 13,0
17,0
22,0
27,0
32,0
38,0
45,0
52,0
60,0
68,0
78,0
85,5
101 5
118 5
135,5
9
12
18
22
26
1
3
5 б
8
11
12
13
14
2,5
3,0
3,7
4,5
5,6
7,0
8,0
9,3
10,6
12,6
13,5
15,0
16,2
17,5
20,2
43,0
56,5
73,0
90,5
107,5
126,0
145,0
173,0
200,0
226,0
256,0
282,0
338,0
395,0
452,0
S,3
10,0
12,7
15,0
18,7
23,3
26,6
31,0
35,3
42,0
45,0
50,0
54 0
58,3
67,3 окраска зависит также и от природы растворителя. Например, при одной и той же концентрации витамина, хлороформенные растворы дают примерно в шесть раз большую интенсивность синей окраски, чем растворы в легком бензине.
В качестве стандартов для сравнения лучше всего подходит смесь синего ультрамарина с порошком бентонита, которую готовят следующим образом: на 1 г обычного порошка бентонита, просушенного при
115 и просеянного через тонкое шелковое сито, берется соответственно:
7,9, 12, 15, 18, 22,26,30,35,40, 45, 50, 55, 60 и 70 мг ультрамарина.
Все эти смеси тщательно перетирают и перемешивают, а затем из них берут навески (100 лг) в небольшие пробирки одинакового диаметра, В каждую пробирку вводят
0,5 мл растворителя (погоны авиабензина с температурой кипения до
90, петролейный эфир или хлороформ). Пробирки герметично за1Н. Подготовка испытуемого раствора для определения витамина А
Для примера приводится методика подготовки испытуемого раствора для определения витамина А в рыбьих жирах и:печени.
В центрифужную пробирку на
25 мл вводят 1 — 2 г жира или пече434 крывают пришлифованными пробками, и серия эталонов готова к употреблению.
Целесообразно иметь две,серии пробирок: одну с бензином, а другую с хлороформом. Первая серич является более удобной для определений витамина A в более концентрированных растворах витамина в бензине и при наличии, наряду с витамином А, значительных количеств витамина Д. Вторая серия используется для сравнения возникающих на бентоните окрасок витамина
А в хлороформенных растворах при меньших концентр ациях витамин à A.
В приводимой ниже цветной серии эталонов их окраски соответствуют окраскам, получающимся при адсорбции витамина А из раствооов определенных концентраций. Поэтому эти концентрации удобнее выражать в микрограммах на миллиметр испытуемого раствора.
Концентрации витамина А определяются по .следующей таблице. ни:и добавляют 2 мл 20%-ного раствора КОН. Смесь кипятят на водяной бане в течение 45 мин, При этом выпаривается большая часть воды.
Затем содержимое пробирки охлаждают до комнатной температуры, добавляют 2 мл 95%-ного этилового спирта и некоторое время хорошо
¹ 76317
28 пермешивают встряхиванием. После этого добавляют 2 мл легкого бензина и опять встряхивают. Бензиновый слой снимают пипеткой, а обработку содержимого пробирки бензином повторяют несколько раз, Объединенные экстракты один или два раза промывают небольшими порциями воды в бюретке с краном на 25 лл. Затем бензиновый слой фильтруют на стеклянном фильтре через слой безводного сернокислого натрия, который после этого промыва от бензином; бензин от промывания добавляют к основному раствору.
1V, Проведение реакции и определение
В пробирки одинакового раз и,) с составленной серией эталоноз берут 100 .иг активированного со::.l:,;" . кислотой бентонита, добавляют .-.;:и смачивания 0,25 мл соответствующего растворителя, затем 0,25 лл испытуемого раствора встряхивают и
Отв. редактор М. М. Акишин возникающую синюю окраску сравнивают с цветной серией эталонов.
Подобрав путем нескольких параллельных проб соответствующую пробирку, находят по ее окраске содержание витамина А в микрограммах на 1 мл испытуемого раствора.
Помножив на общий объем испытуемого раствора, определяют содержание витамина А в навеске, а затем пересчитывают на 100 г продукта.
Для проведения реакции в хлороформе оензиновые вытяжки отгоняются досуха под вакуумом в атмосфере инертного газа. Остаток растворяют в хлороформе и определяют витамин А в хлороформенном растворе остатка, как указано выше, Предмет изобретения
Применение бентонита, как реагента для качественного .и количественного определения витамина А цветной реакцией.
Редактор А. С. Павлов
