Способ получения индикатора из анилинового синего красителя

ОП ИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 11.03.77 (21) 2461898/05 (51) М. Кл,2

С 09В 17/02 (23) Приоритет — (32) 03.05.76

Госудерстееиимй комитет ссСР * по делам изобретеиий

- и открытий (31) 682652 (33) США (43) Опубликовано 30.06.79. Бюллетень № 24 (53) УДК 547.632.6 (088.8) (45) Дата опубликования описания 30.06.79 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Клифтон Олдридж и Майкл Чарльз Мейер (США) Иностранная фирма

«Макдоннелл Дуглас Корпорейшн» (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДИКАТОРА

И3 АНИЛИНОВОГО СИНЕГО КРАСИТЕЛЯ

Изобретение относится к области синтеза органических красителей анилинового ряда; в частности к способу получения восстановленной формы анилинового синего красителя — индикатора микроорганизмов 5 в питательной среде по реакции на выделяемую ими кислоту.

Известен способ получения индикатора из анилинового синего красителя анилинфенилфеназинхлорида, введением в его ще- Io лочной водный раствор 0,5 — 0,6 вес. % сильного восстановителя — атомарного водорода в присутствии катализатора или гидросульфита натрия при кипячении с по4 следующим охлаждением раствора (11. 15

Недостатком известного способа является жесткие условия восстановления, что приводит к получению индикатора, токсичного к микроорганизмам в питательной среде и исключающего корректное определе- 20 ние их наличия. Помимо этого известным,способом .получают индикатор, имеющий широкий интервал рН, в -котором -происходит изменение окраски, в частности рН

6,5 — 5,0. Это обстоятельство не позволяет определить микроорганизмы сразу после их появления в питательной- среде: — Восстановленный известным способом красйтель под действием факторов окружающей среды— температуры, света — окисляется до исходной окрашенной формы, что также увеличивает погрешность анализа.

С целью получения индикатора, нетоксичного к микроорганизмам, устойчивого к окислению и имеющего узкий диапазон рН изменения окраски, предложено в щелочной 1%-ный водный раствор красителя вводить восстановитель тиогликолят натрия сначала в количестве 0,076, затем 0,024 и

0,02% от веса раствора до полного восстановления красителя.

Цвет восстановленной формы анилинового синего красителя — рыжеватокоричневый или бесцветный при рН 7,0. При выделении кислоты микроорганизмами в питательной среде восстановленная форма анилинового синего меняет цвет на синий. Изменение это происходит достаточно быстро — в течение 12 — 18 ч, что позволяет быстро определить микроорганизмы. Питательная среда может быть в свою очередь объектом измерения концентрации синего цвета, например, с помощью фотометрического метода.

- Найденный согласно изобретению восстанавливающий агент тиогликолят натрия

671738

Составитель А. Молин

Редактор Л. Герасимова Техред А. Камышникова Корректор Л, Коро од

Заказ 1312/17 Изд. № 390 -Тираж 779 Подписное

ЦНИИПИ НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5 пр. Сапунова, 2

Типография, не йодавляет роста микроорганизмов в питательной среде. Удачное сочетание его применения с подобраинымй, согласно предложенному способу, концентрацией реагентов и чередованием необходим йх приемов позволило получить индикатор с узким значением рН интервала изменения окраски 6,4 — 6,6. Благодаря этому же сочетанию индикатор нечувствителен к описанию, а также не дает ошибки, связанной с присутствием протеина в питательной среде.

Реакция восстановления анилинового синего красителя сводится к удалению одной или двух аминогрупп в исходной молекуле красителя. Основным условием способа является необходимость 100%-ного восстановления анилинового синего.

Способ включает обработку при кипячении водного раствора красителя в присутствии щелочи тиоглнколятом натрия, причем тиогликолят добавляют в три этапа— сначала 0,076, затем 0,024 и 0,02% от веса раствора. На каждом этапе добавляют уменьшенное по сравиейию с:предыдущим количеством восстановителя. Соответственно сокращают и время кипячения.

Восстановленный анилиновый .синий как индикатор микроорганизмов пригоден .для определения Е. Coli в пйт ательной среде, а также дрожжей штамма Candida и грибковых микроорганизмов.

Прим ер. В химический стакан:объемом 1000 мл с делениями поме1цают 5,0 г анилинового синего, 100 мл однонормальной гидроокиси натрия и 400 мл дистиллированной воды, Смесь перемешивают для растворения анилинового синего. Затем раствор слегка подогревают. Добавляют 7,5 r натрийтиогликолята к раствору. После этого:раствор нагревают до кипения и при этой температуре раствор нагревают в течение 45 мин. Затем добавляют еще 2,5 г натрий тиогликолята в раствор и кипятят в течение 10 мин..Потом добавляют 2,0 г натрий ттиьгликолята и кипятят в течение

3 мин. Раствор охлаждают. ДистиллироЪ ванной водой доводят объем до 500 мл. Последнюю операцию выполняют в мерном цилиндре, П1 рименение избытка натрий тиогликолята не вредит способу. Осиовйым ."гр66ова:10 -нием является .то, чтобы see:ÉÊ % - аналинового синего восстановлены.

Описанная выше обработка:вызывает выделение аммиака из молекулы анилинового синего и эти 1 расителн,.реагцруют на не15 значительное изменение рН. Восстановленный анилиновый синий индикатор начина-ет изменять цвет в присутотвии кислоты.

При рН 7,0 восстановленный анилиновый синий либо бесцветен, либо окрашен в ры20 жевато-коричневый цвет. В кислой среде анилиновый синий становится синим, Анилиновый синий полностью меняет свой цвет при значениях рН от 6,4 до 6,6, Ф.о;р мул а изобретения

Способ получения индикатора из анилинового синего красителя, введениьм в er0 щелочной водный раствор восстановителя при кипячении с последующим охлажденич0 ем pаствора, о т л и ч а ю.шийся тем, что, с целью получения индикатора, нетоксичного к микроорганизмам, устойчивого к

:окислению и имеющего узкий диапазон рН .изменения окраски, в щелочной 1 %-ный

35 водный раствор красителя вводят восстановитель тиогликолят натрия сначала в количестве 0,076, затем 0,024 и 0,02% от веса раствора до полного восстановления красителя.

40 ИСТОЧНИКИ ИнфОРМЙЦИИ, принятые во внймание при экспертизе 1. "Индикаторы.- Под. ред. Э. Вишопа,:М., «Мир», т. 2,:1977, с. 71 — 79.