Способ обработки спермы

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ И АВТОееСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

«ii668677 (61) Дополнительное к авт. свиа-ву (22) Заявлено 06. 05. 65 (21) 1006672/30 — 15 с присоединением заявки № (23) Приоритет

2 (51) М. Кл.

А 61 О 7/02

Гасударственный квмхтет

СССР пп делам кзевратеикй я открыткй

Опубликовано 25. 06. 79. Бюллетень №23

Дата опубликования описання25. 06, 79 (53) УДК591. 463. .12 (088.8) (72) Авторы изобретения

Д. И. Савчук, А. С. Лисовенко и М. Ф. Волкобой (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ

Изобретение относится к искусственному осе. менению сельскохозяйственных животных.

В современных условиях воспроизводство стада крупного рогатого скота осуществляется в результате работы широкой сети станций искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, на которых сосредоточено поголовье высокоценных племенных производителей, Маточное поголовье (коровы и телки), осеменяемое спермой быков станции, находится на фермах колхозов и совхозов, расположенных от станции в радиусе до 100 — 150 км. При такой системе организации воспроизводства -крупного рогатого скота сперма, полученная от производителя, продолжительное время должна находиться вне организма, прежде чем будет введена в половые пути

15 самки.

Сперма при ее хранении в натуральном виде в результате одностороннего катаболитического обмена теряет свою способность к оплодотворению

20 в течение очень короткого срока. Для сохранения оплодотворяющей способности спермы более продолжительное время требуется соответствующая обработка с тем, чтобы половые клетки не притерпели значительных изменений и сохранили необходимую активность.

Применение бактериостатических препаратов как и термическая обработка разбавителей предупреждают развитие микрофлоры, которая губительно действует на половые клетки самца. Разбавлением же достигается необходимыи для половых клеток уровень осмотического давления и снижение концентрации секретов добавочных половых желез.

Известный способ обработки спермы производителей на станциях искусственного осеменения сводится к следующему.

Техник на искусственную вагину получает сперму от производителя и в спермоприемнике доставляет ее в лабораторию. Лаборант оценивает первый эякулят по активности и оставляет его стоять при комнатной температуре до времени получения второго эякулята (10 — 15 мин), который также оценивает по этому показателю. Если оба эякулята (или три) соответствуют требованиям по активности, определяют концентрацию, измеряют общий объем и разбавляют синтетической средой (глюкоз .но — желточно — цитратным разбавителем) (1).

668677

4 олжительное время /3 — 4 дня). К концу 3 — 4 сут ранения на пунктах искусственного осеменения тив ость спермиев находится на уровне или неслько ниже допустимых норм, что вызывает небходимость частого получения от быков и завоза пермы в хозяйства.

Подготовка искусственных вагин, получение пермы от быков, ее оценка, разбавление, маркиовка и расфасовка требуют значительных затрат времени, энергии, материалов и химикатов. СущестВенные затраты связаны также с использованием транспорта по доставке спермы в хозяйства.

Цель изобретения — разработать дешевый и до-. тупный способ, повышающий сроки сохранения ° активности половых клеток производителей вне рганизма путем ограничения активизирующего ействия на клетки секретов добавочных половых елез, Зто достигается тем, что удаление секретов из пермы производят не позднее 3 — 5 мин после ее лучения, а центрифугирование проводят при

3 — 6 тыс. об/мин в течение 8 — 15 мин до полного даления секретов добавочных половых желез.

Известно, что у домашних животных при естественном спаривании активизирунн ее действие еекретов добавочных половых желез на половые клетки является важным приспособительным факором, играющим положительную роль. При исусственном же осеменении, где между получеием спермы и ее введением в половые пути саок проходит значительное время, продолжительое актнвирующее действие этих секретов явля тся вредным.

Плазму спермы составляют секреты придатка еменника, пузырьковидных, предстательной, куеровых, уретральных желез. С момента соединея половых клеток с плазмой спермы происхот сильное возбуждение дыхательного,гликолитиеского процессов в половых клетках под влияним рН,большого количества электролитов,фруктоы,аскорбиновой кислоты и широкого спектра ферентов и других активных веществ плазмы.При словии хранения спермы при низких плюсовых емпературах (Π— плюс 4 С) возбуждающее дейстие плазмы,как установлено, продолжается вплоть о гибели половых клеток.В результате односторонего катаболитического обмена, энергетических атрат клеток на движение их запасы истощаются клетки теряют активность.

Сперму для опытов получают от полновозрацтых производителей симментальской породы. Усовия кормления, содержания как и режим полоого использования быков в период опытов должы быль удовлетворительными и сходными для сех подопытных животных. Для исследований тбирают один эякулят из двух дуплетных садок. разу после получения эякулята его оценивают о активности спермиев, концентрации {на фотолектрокалориметре), измеряют oR åì. Затем

Разбавленный эякулят (после проверки актив- д ности) расфасовывают в флаконы, число и объем х которых выбирается в соответствии с заявками ак хозяйств. Расфасованную сперму помещают в хо- ко лодильник до времени ее отправки на пункты искусственного осеменения колхозов и совхозов. с

При отправке сперму иэ холодильника переносят в термосы (температура в холодильнике и термосе от О до 4 С) и развозят на пункты для искус- р ственного осеменения коров и телок. На пунктах 1о завезенная сперма сохраняется при той же температуре, что и в термосе, в котором она была доставлена.

Таким образом, при принятой технологии обра- с ботки эякулятов половые клетки производителей находятся в разбавителе совместно с секретами о добавочных половых желез в течение 12 — 60 ч. д (времени использования спермы на пунктах) . Этим объясняется то, что в разбавленном эякуляте половые клетки самца, сохраняемые при температу- эо ре 0 С, способны переживать более продолжительное время, чем в натуральном, неразбавленном эякуляте. У

В процессе разбавления и хранения половые клетки самца не освобождаются от активируннце- 25 го действия секретов добавочных половых желез.

Разбавлением достигается лишь снижение удельного содержания секретов добавочных желез и, следовательно, роль их как активаторов жизненных

К процессов в клетках снижается незначительно. ЗО

Эякуляты отдельных быков отличаются не толь- м ко количеством секретов добавочных половых н желез, но и качественным их составом. Следовае тельно, при применении одинаковых степеней разбавления эякулятов отдельных быков достигает- 35 с ся различный эффект. п

Эякулят с момента его получения до окончания ни процесса лабораторной обработки находится сов- ди местно с секретами добавочных половых желез быка в течение 25 — 30 мин при комнатной температуре, 40 при которой жизнедеятельность половых клеток остается достаточно высокой. Совместо с секретами добавочных половых желез при комнатной У температуре находятся половые клетки и после разбавления (расфасовка, маркировка) в течение 45

15 — 20 мин. В течение 40 — 50 мин половые клет- д ки самца подвержены сильному активирующему н действию секретов добавочных половых желез. з

При этом наступает израсходование энергетических ресурсов, а в результате жизнедеятельности О половых клеток происходит измснение рН среды до пределов, не совместимых с нормальными функциями половых клеток, и другие метаболитические процессы, что определяет резкое снижение активности половых клеток. 55

Пониженная температура (от О до 4 С) несколь- о ко замедляет процессы обмена в спермиях, разбавленных искусственными средами. Половые клетки сохраняют свою живучесть при этом крайне непро668677 эякулят каждого производителя разделяют на две равные по объему пробы -- опытную и контрольную. При этом считают, что в каждой из них сходное количество половых клеток. Эти операции проводят в течение 2 — 3 мин. Опытную пробу помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют на электрической центрифуте типа ЦУМ вЂ” 1 со скоростью 4 тыс. об/мин в течение 10 мин. Во время центрифугирования опытной, контрольную пробу (вместе с секретами) разбавляют глюкозно- о желточно — цитратным разбавителем в отношении

1:8 — 1:15.

Центрифугированием достигается разделение плазмы и половых клеток, которые под влиянием центробежных сил оседали на дно пробирки, об- 15 разуя рыхлый сгусток. Отсепарированную жидкость тщательно сливают и измеряют ее объем.

Затем взамен снятой плазмы добавляют такое же количество глюкозно — желточно — цитратного раз бавителя. После этого опытную пробу разбавля- 20 ют тем же разбавителем в требуемом отношении.

Этим достигается сходное разбавление спермы в сравниваемых пробах. Все работы от момента получения эякулята н до времени окончания работ по разбавлению опытной пробы проводят в тече- 25 чение 15 — 17 мин при комнатной температуре, В дальнейшем обе пробы помещают в холодильник, где онн хранятся в течение всего последующео го периода опытов при температуре от 0 до + 4 C.

4 Активность в сравниваемых пробах исследуют З0 через каждые 24 ч хранения в холодильнике. Ис. следования проводят в термостате при температуре от 38 до 40 С. При каждом исследовании обеих проб к исследуемой капле спермы добавляют одну каплю 3% — ного раствора лимоннокислого 35 натрия, трехзамещенного, пятиводного.

Полученные средние данные исследований 38 эякулятов от 20 племенных быков показывают, что половые клетки, сохраняемые в разбавителе без секретов добавочных половых желез, имеют 40 более высокую активность по сравнению с контролем, в котором семенная плазма не была удалена. Отделение спермиев от секретов добавочных половых желез сказывается не столько на увеличении общей продолжительности жизни спермиев, 45 сколько на длительности поддержания на более высоком уровне их активности.

При обработке эякулятов по разработанному методу сперма, сохраняемая при низких плюсовых температурах, имеет активность 0,6 балла íà so восьмые сутки, тогда как контрольная разбавленная вместе с секретами активность 0,6 балла сохраняла лишь четверо суток, 11рименение разработанного способа создает следующие преимушества: 55

1. Позволяет ограничить активирукнцее влияние секретов добавочных половых желез на спермии в процессе хранения и увеличить сроки сохранения активности половых клеток в 2 раза.

2. При раэбавлении позволяет устранить специфику эякулятов отдельных быков, отличающихся разным количеством и качественным составом секретов добавочных половых желез.

3. Снизить режим использования быков в " раза.

4. Сократить затраты труда, времени, материалов и химикатов, связанных с получением и обработкой эякулятов, 5. В два раза снизить расходы, связанные с транспортировкой спермы в хозяйства.

Предлагаемый способ может быть использован для продления сроков переживаемости половых клеток производителей других видов сельскохозяйственных животных (жеребец, баран, хряк, кролик и др.), Для достижения такого эффекта в условиях производства необходимо сразу после получения эякулят оценивают по активности, концентрации (на фотоэлектрокалориметре). измеряют объем.

Эти операции должны быть выполнены в течение

2 — 3 мин. Сперму помешают в центрифужную пробирку комнатной температуры (22 — 25 С) и центрифутируют на электрической центрифуге со скоростью 4 тыс. об/мин в течение 10 мин.

После центрифугирования надосадочную жидкость удаляют, а к осадку добавляют такое же количество разбавителя и зат:м разбавляют зтнм же раэбавителем в необходимом отношении. Сперму фасуют во флаконы и сохраняют в холодильнике, затем в термосах доставляют в хозяйства и снова помещают в холодильник, где она 1 аходится в течение 6 — 8 сут и используется для осеменения коров и телок. Перед каждым осеменением определяют активность спермиев. По экспериментальным данным оплодотворяемость коров и телок при этом не уменьшается по сравненшо с контролем.

Формула изобретения

Способ обработки спермы, преимущественно быков, включающий удаление из спермы секретов добавочных половых желез путем центрифугирования, последующее разбавление ее синтетическои средой и выдерживания при температуре от 0 до

+ 4 С, отличающийся тем, что, с целью длительного сохранения биологической активности спермиев, удаление секретов из спермы проводят не позднее 3 — 5 мин после ее получения, а цептрифугирование проводят при 3 — б тыс об/мин в течение 8 — 15 мин до полного удаления секретов добавочных половых желез.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Мушенко Д. А. Некоторые усовершенствования в искусственном осеменении свиней. Автореф. дис. на соиск. степени канд., биол. наук.

М., 1962.