Способ определения общей фосфатазной активности почв

Союз Советсммн

Соцмалмстммескмн

Реслублмн

<» 655968 (61) Дополнительное к авт. свиа-ву(22) Заявлено01. 08. 77 (21)2512092/30-15 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 05.04,79.Бюллетень № 13

Дата опубликования описания 08.04.79

Х (51} М. Кл. (л 01 И 33/24

Гесудерстеенный комитет

СССР ее делам нзосретеннй и аткрмтнй (53) УДК631 4 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. Т. Геллер и К . Е. Гинзбург

Почвенный институт им. В. В. докучаева Всесоюзной академии сельскохозяйственных наук им. В. И. Ленина (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБШЕЙ 4ОССАТА31!ОЙ

АКТИВНОСТИ ПОЧВ

Изобретение относится к почвенной, энзимологии и может быть использовано в почвенно-агрохимических и микробиологических исследованиях для характеристики биологической активности почв.

Известен способ определения фосфатаз- ной активности, при котором контрольные анализы проводят с простерилизованной почвой, а ферментативную реакцию останавливают добавлением трихлоруксусной кислоты с последующим нагреванием про- .1О бы Е13.

Недостатком этого способа является значительное химическое изменение в анализируемом образце в результате авто15 клавирования почвы и искажение резущ татов анализа за счет вычитания ошибочно полученного контроля.

Известен также способ определения фосфатазной активности торфяно-болотных почв, в котором вышеуказанный недостаток устраняется тем, что в контро п ном варианте органический субстрат инкубируют с почвой, предварительно инактивированной ингибиторами фосфатаз. В качестве инактиватора фосфатаз исполь .зуется неспецифический ингибитор фосфатаз — фторид натрия, который добавляется в количестве 0,4 мл на 2 г почвы при времени взаимодействия 1 мин. Такое же количество фторида натрия используется в опытном варианте для остановки ферментативной реакции по окончании инкубации почвы с органическим субстра том 2 .

Недостатком метода является получение вытяжек, окрашенных гумусовыми semeствами в буро-коричневый цвет, что мешает последующему колориметрическому определению фосфора в растворе.

Для устранения мешающего действия гумусовых веществ на колориметрическое определение фосфора Рунков и Козловская используют метод экстракции иона ортофосфата спирто-эфирной смесью с последующим восстановлением экстрагированной фосфорно- молибденовой. кислоты двухлористым оловом.

655968

Т а б л и ц а 1

Использование различных концентраций СаС0 в качестве ингибитора фосфатаз на каштановой почве орможение фосфатазной реакции, 7 к контролю

Контроль (без

Саа 5

10

Метод громоздок и мапо пригоден дпя массовых определений. Кроме того, ок может быть использован только для торфяно-болотных почв.

Целью изобретения является упрощение известного способа и его унификация для почв с разной биологической активностью.

Сущность изобретения состоит в том что для инактивации фосфатаз в почве контрольного варианта и для остановки

Последующее извлечение продукта гидролиза органического субстрата,,- иона эРО производится с помощью 0,02 н.

НС(, которая вносится непосредственно в реакционную смесь.

Использование раствора СаСС< в ка40 честве ингибитора почвенных фосфатаз и

0,02 н.раствора НС6 в качестве растворителя иона ортофосфата обеспечивает получениь бесцветных и прозрачных поч- венных филЬтратов, не мешающих после45 дующему колориметрическому определению фосфора (которое проводится непосредственно в аликвоте прозрачного фильтрата).

В предлагаемом способе для измерения фосфатаз в почвах с различной биологической активностью, время настаивания органического субстрата с почвой увеличено с 1 ч до 2 ч. Это дает возможность выявлять фосфатазную активность и в почвах с малой биологической активностью.

Опытный вариант. 1 г воздушно-сухой почвы (сито 0,25 мм) помещают в плоскодонные колбы емкостью в 100 мл, смачивают 1 мл дист. воды и приливают ферментативной реакции в опытном варианте использован метод одновременного высаливання фермента и осаждения органического субстрата из реакционной смеси с помошью 10 М раствора СаСС

2 мл 10 М раствора СаСЕ добавляеъся к 1 r почвы при времени его взаимодействия с почвой 15 мин. Это позволяет инактивировать действие фосфатаз в основных типах минеральных почв. раствор органического субстрата - 1 мл

1 %-ного раствора фенолфталеинфосфата

НаТрНВо

Получению смесь помешают в термостат при 27 С и инкубнруют с органическим субстратом. Затем в колбы приливают

2 мл 10 М СаСГ для остановки фермептативной реакции, смесь перемешивают и добавлякт 10 мл 0,02 н„ НС8 для извлечения продукта ферментативной реакции - иона ортофосфата. Полученную суспензию встряхивают от руки 1 мин, настаивают 15 мин, отфильтровывают в мерные колбы на 50 мл, доливают дист. водой до метки и перемешивают (p вор А).

5-10 мл, раствора А переносят в мерные колбы на 50 мп, разбавляют водой н припивают реактивы для окрашивания фосфора по методу Труога-Мейера.

Контрольный вариант. 1 г воздушносухой почвы (сито 0,25 мм) помешают в плоскодонные колбы на 100 мл и для инактивапии фосфатаз приливают 2 мл

655968

Т абли ца 2

Берново-подзолистая (Московская обл. ) 7,0

Светло-серая (Челябинская обл. ) 7,3

9,2

16,5

Светло-каштановая (Волгоградская обл. ) 39

Чернозем типичный (Курская обп.) l4,0

Серозем типичный

{Голодная степь) 9,6

2,4

Серозем светлый (Голодная стейь) 13,5

10,0

3,5

Краснозем

{Анасеули) 0„7

1,0

1,7

10 М раствора СаС8, смесь настаивают 15 мин. Затем сюда же добавляют раствор органического субстрата в тех же количествах,как н в опытном варианте.-.

Колбы ставят в термостат на 2 ч при

27 С. Затем приливают 10 мл 0,02 н, раствора НС1 и далее извлекают и определяют фосфор точно так же, как описано выше в опытном варианте.

Формула изобретения

Способ определения обшей фосфатазной активности почв, включаюший инактивацию почвы контрольного варианта

Ъ" ингибитором, компостирование почв .SO контрольного и опытного вариантов с органическим субстратом - фенолфталеинфосфатом натрия, остановку ферментативной реакции в опытном варианте ингибитором,экстрагирование продукта гидра»

55 лиза органического субстрата — иона ортофосфата соляной кислотой и последуюшее фотоколориметрирование, о т л и— ч а ю ш и и с я тем, что, с целью униАктивность фосфатазы вычисляют по разности между содержанием фосфора в опытном и контрольном вариантах. Полученные результаты выражают в мг Р О на 100 г почвы.

Результаты определения активности почвенных фосфатаз; предложенным методом приведены в табл. 2. фикации способа для почв с разной биологической активностью и повышением точности определения, почву компостируют в течение 2-х ч, инактивируют фосфатазу

10 М СаСС> и экстрагируют ион фтор-, фосфата 0,02 н. НС .

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Купревич В. Ф., Щербакова Т, А.:

Почвенная энзимология, Минск, 1966.

2. Рунков С. В., Козловская Н. А.

К методике определения фосфатазной активности торфяно-болотных почв. Агрохимия, 1974, М 4.