Способ стерилизации сосудистых аллотрансплантантов с одновременным консервированием
:з ....СЫА%
О П И C АНИ
ИЗОБРЕТЕНИ
Союз Советских
Социааистнческих респубвик 651815
K АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-sy (22) Заявлено 280127 (21) 2450831/28с присоединением заявки №. -, (23) Приоритет
Опубликовано 150379. Бюллетень №
Дата опубликования описания 150
1) М. Кл.
А 61 ) 9/00
Государственный комитет
СССР ио,челам изобретений и открытий
) УДК616-003.215 (088.8) (72) Авторы изобретения
В.Б.Сучков, P.È.Añôàíäèÿðîâ и Г.М,Гладченко
Астраханский государственный медицинский институт им. А.В.Луначарского (71) Заявитель (5 4 ) С ПОСОБ СТЕРИЛИЗАЦИИ СОСУДИСТЫХ АЛЛОТРАНС ПЛАНТАТОВ
С ОДНОВРЕМЕННЫМ КОНСЕРВИРОВАНИЕМ
Изобретение относится к области медицины, а именно трансплантологии, и может быть использовано для стерилизации сосудистых аллотрансплантатов в растворах (1) .
Однако известный способ достаточ- . но сложен, поскольку требует дополнительных трудозатрат на выделение трансплантатов в стерильных усЛовиях.
Целью изобретения является упрощение способа за счет исключения необходимости стерильных условий, выделеиия трансплантатов.
Это достигается тем, что по предлагаемому способу вначале аллотрансплантаты выдерживают в растворе, содержащем смесь этанолмеркурхлорид: цетилпиридиний хлорид:бидистиллированная вода=(0,8-1,2):(0,8-1,2): (927,6-998,4), при этом аллотрансплантаты встряхивают до прекращения окрашивания свежей порции раствора в зеленоватый цвет, затем аллотрансплантаты выдерживают в растворе, содержащем смесь этанолмеркурхлорид: цетилпиридиннй хлорид:натрий хлорис" тый;вода бидистиллированная
=(О, 4-0, 6): (О, 4-0, 6): (7, 2-7, 8): (991,0-992Ä0) в течение 6,0-6,5 ч
2 г при 20-22 С и в том же растворе 168-336 ч при 2-3 С и далее аллотрансплантаты выдерживают в растворе, со» держащем смесь фурацилин:трехзамещенный цитрат натрия:вода бидистиллированная = (0,15-0,25):(99,0-101,0): (898,75-900,85) в течение 12-24 ч при 36,5-37,5 С.
Кроме того, соотношение веса ткани к весу раствора берут 1:(25-27) .
Способ осуществляют следующим образом.
Заготовленные в нестерильных условиях аллотрансплантаты подвергают стерилизации и консервированию в трех растворах, сначала в растворе
М 1 (соотнсыение веса ткани к объему раствора 1:25-27), содержащем, вес.ч.:
Этанолмеркурхлорид 0,8-1,2
Цетилпиридиний хлорид 0,8-1,2
Вода бидистиллированная 997,6-998,4 затем в растворе )т 2 (соотнсшение веса ткани к объему раствора 1 25-27), с эдержащем, вес.ч.:
Эт ан ол мер курхл орид 0,4-0,6
Цетилпиридиний хлорид 0,4-0,6
Хлористый натрий 7,2-7,8
Вода бидистиллированная 991,0-992,0
6518 м ." -=-—
- -1
И" в растворе 9 3 (соотношение веса ткани к объему раствора 1:25-27), содержащем, вес.ч.
ФУРацилин 0,15-0,25
Цитрат натрия трехэамещенный 99,0-101 0
Вода бидистиллиро ванная 898,75-900,85
Обработку аллотрансплантатов в растворе Р 1 производят путем встряхивания в герметичном сосуде до прекращения окрашивания свежей порции 10 раствора в зеленоватый цвет, При этом стерилизацию и консервирование в растворе 9 2 "производят в течение 6-6,5 ч при температуре от плюс 20 до ruuoc 22 C и в течение 15
168-336 ч при температуре от плюс
2 до плюс 3 С, а затем в течение о е
12-24 ч в растворе 9 3 при температуре от плюс 36,5 до плюс 37,5 С.
Пример 1. 5)
Через 20 ч после гибели донора в нестерильных условиях выделяют сегмент аорты длиной 150 мм и помещают в герметичный сосуд с раствором 1-25. Обработку трансплантата производят путем встряхивания при режиме 20 встр яхиваний й- м»йнуту.
Через 1,5 мин . производят смену раствора. После Прекращейия окрЪши»вания
6-ой порции раствора в зеленоватый 0 цвет трансплантат переносят в раствор Р 2 (соотношение веса ткани к объему раствора 1:253 на 6 ч притемпературе плюс 22 С, а затем трансйлантат хранят в растворе Р 2
168 ч прй температуре плюс 3 С. По истечении указанного срока трансплантат помещают на 20 ч в раствор
Р 3 (соотношение веса ткани к объему растВора 1:25) при температуре плюс 37 С.,,, 40
По йле этого аортальйый аллотрансплантат извлекают из- герметичного сосуда с раствором 9 3 и помещ .вот на стерильную салфетку, смоченную свежей порцией раствора Р 3. Сосу- 4Я ды, отходящие от аорты, перевязывают перлоновой лигатурой, отступя
2-3 мй от--оснбвания. Подготовленный к оперативному использованию аортальный аллбтрансплантат вшивают в предварительно созданный дефект аорты реципиента. В результате операции йолучен положительный эффект .
Срок наблюдения 4 года .после оперативного вмешательства;
Пример 2.
Через 16 ч после =гибели донора в нестерильных условиях выделяют сегмент аорты длиной 140 мм и- по -"-мещают в герметичный сосуд с раствором 9 1. Соотнсеаение веса ткани 60 к объев раствора составляет 1:27.
Обработку трансплантата производят путем встряхивания при режиме 16 встряхиваний в минуту. После прекращения окрашивания б-ой порции раст-./..-вора (смену раствора производят через 2 мин.) трансплантат переносят в раствор Р,2 (соотношение веса ткани к объему раствора 1:27) на б ч при температуре плюс 22 С, а затем трансплантат хранят прн температуре плюс 3 С.B сроки от 168 до
1440 ч с момента помещения аортального аллотрансплантата в раствор 9 2 при температуре плюс 3 С исследуют изменение прочности и растяжимости этого сегмента, а также изучают количества клеточных ядер на единицу площади и содержание общего белка в экстракте из его гомогената. Контро.лем служит исходное состояние сегмента (до консервирования) .
Через 336 ч консервирования в растворе Р 2 прочность составляет
104%, а растяжнмость 107%. При больших сроках консервирования происходит падение прочности аортального сегмента (так через 1440 ч она составила 81%) при сохранении растяжимости на уровне 126%.:
Количество клеточных ядер на единицу площади через 336 ч консервирования составляет в наружной оболочке аорты 80,77%, в средней обо.лочке аорты 88,82% и во внутренней
90,48% по сравнению с исходным состоянием (сегмент до консервирования) . Через 720 ч консервирования количество клеточнйх ядер составляет s наружной оболочке 57,14В, в средней оболочке 65,22% и во внутренней 73,813.
Концентрация общего белка в экстракте из гомогената консервированного сегмента через 336 ч падала до 18%, через 720 ч - до 7%, а через 960 ч - до 4% по сравнению с содержанием общего белка в,экстракте нз гомогената нативной аорты.
Предлагаежяй способ стерилизации и консервирования сосудистых аллотрансплантатов позволяет, получить стерильные сосудистые алло« трансплантаты с оптимальными биомеханическими свойствами и обладающие сниженной антигенностью.
Способ является более экономичным и простым по сравнению с известным. Возможность производить заготовку ткани в нестерильных условиях исключает необходимость использования специальной операционной. Применение этого способа не требует дорогостоящей аппаратуры и реактивов.
Формула и зобретени я
1. Способ стерилизации сосудистых аллотрансплантатов с одновременным консервированием путем последовательной обработки транспланта65 тов s растворах,о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения способа, вначале аллотрансплантаты выдерживают в растворе, содержащем смесь этанолмеркурхлорид:цетиллиридиний хлоридгбидистиллированная вода = (0,8-1,2): (0,8-1,2) ° (927,6-998,4) при этом аллотрансплантаты встряхи вают до прекращения окрашивания свежей порции раствора в зеленоватый цвет, затем аллотрансплантаты выдерживают в растворе, содержащем смесь эт ан олмеркурхлорид це тилпиридиний хорид натрий хлористый:вода бидистиллированная = (0,4-0,6):(0,4-0,6)s (7,2-7,8):(991,0-992,0), в течение
1815 6
I ° б, 0-6,5 ч при 20-22 С и в том же растворе 168-336 ч при 2-3 С и далее аллотрансплантаты выдерживают в растворе, содержащем смесь фурацилин:трехзамЕщенный цитрат натрия вода бидистиллированная = (О, 15-0,25) (99,0-101,0 ): (898,75-900,85 ) в течение 12-24 ч при 36,5-37,5ФС.
2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся ì, что соотнсыение веса тканей к весу раствора берут
1: (25-27) .
Источники информации, прин ятые во внимание при экспертизе
1. Фукс B.Á. и Фукс Б.И. Очерки морфологии ткани . И., 1968.
Составитель С.Малютина
Редактор Н . Батанова Техред Л. Щ ерова Корректор С Лек аР
"аказ 907, 5 Тираж 671 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035 Москва, Ж-35д Разыская наб. д.4 5
Филиал ППП Патент, r,ужгород, ул,Проектная,4