Способ определения активности пищевого говяжьего пепсина

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (ii) 644446

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. сзид-ву— (22) Заявлено 27.1.1.75 (21) 2193034/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 30.01.79. Бюллетень № 4 (45) Дата опубликования описания 06.03,79 (51)М.Кл. А 23 С 7/00

С 12D 13/10

Государственный комитет ло делам изобретений и открытий (53) УДК 637.325 (088.8) (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ПИЩЕВОГО ГОВЯЖЬЕГО ПЕПСИНА

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к производству сыра, и может быть использовано для анализа качества выпускаемого пищерого ro вяжьего пепсина, Известны способы определения активности пищевого пепсина.

К ним относятся: способ определения активности по процентному содержанию фермента, который предусматривает растворение навески эталона пепсина и испытуемого препарата в ацетатном буфере, определение скорости створ аживания суб.страта испытуемым раствором и раствором эталона с последующим расчетом активности. В качестве субстрата используют молочно-ацетатную смесь (1).

Однако известный способ пригоден только для свиного пепсина и не пригоден для говяжьего пепсина из-за того, что говяжий пенсии плохо растворяется в ацетатном буфере.

Наиболее близким к предложенному изобретению по технической сущности и .до, стигаемому результату является спосоо определения активности препарата сычужного фермента по авт. св. № 296553, заключающийся в том, что растворяют навески эталона сычужного фермента и испытуемого препарата в растворителе с последующим определением скорости створаживания натурального молока испытуемым раствором препарата и раствором эталона и расчетом активности по формулам. Прн этом растворение испытуемого препарата —навески препарата сычужного фермента— осуществляют в растворе неорганической кислоты, например 0,001 н. соляной, имеющей рН от 2,0 до 5 0, а в качестве субстрата используют натуральное молоко (2).

Известный способ имеет значительные погрешности из-за нестабильности субстрата, а также из-за того, что сычужный фермент несколько отличается по своим протеолитическим и другим биохимическим свойствам от пепсина, вырабатываемого у взрослых жвачных млекопитающих, известного под названием говяжьепо пищевого пепсина. Способ требует значительных затрат времени.

Целью изобретения является ускорение проведения анализа и повышения его точности.

Поставленная цель достигается тем, что навеску эталона свиного пепсина растворяют в растворе ацетатного буфера, а навеску испытуемого препарата растворяют в растворе соляной кислоты и определяют скорость створаживания субстрата испытуемым раствором и раствором этало644446 на с последующим расчетом активности по математической формуле. При этом в качестве субстрата используют молочно-аце татную смесь.

Активность определяют в абсолютных единицах чистого фермента по формуле

А=К

10 где Ki и К2 — коэффициенты;

К = 10 для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина;

К2 — — 5,для активности пищевого говяжьего пепсина порядка 100000 у. е.;

T> — время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек;

T2 — время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек. 20

Выполнение предложенного способа иллюстрируется следующим примером.

На аналитических весах отвешивают

0,5 г чистого неразбавленного пепсина и

1 г (порядка 100000 у. е.) разбавленного пищевого говяжьего пепсина и растворяют их порознь в 500мл 0,05 н. соляной кисло ты. В течение дня активность приготовленных растворов не меняется.

Раствор эталона пепсина готовят с та- ЗО ким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержалось 0,1 мг чистого 100О/о-ного свиного пепсина, преимущественно Олайненского химзавода.

Эталон свиного пепсина растворяют в З5

0,1 М ацетатном буфере, который состоит из 45 г гидроокиси натрия и 92 г ледяной уксусной кислоты, растворенных в 1 л дистиллированной воды и имеет рН от 5,00 до 5,1. 40

После этого приготавливают молочноацетатную смесь. Для этого смешивают равные объемы свежего молока и 1 М ацетатного буфера. Молоко можно брать пастеризованное или сырое. 45

Приготовленную молочно - ацетатную смесь разливают по 50 мл в химические стаканы емкостью 100 мл и ставят в водяную баню, температура в которой поддерживается в течение всего времени прове- 50 дения анализа строго постоянной и составляет 25 С.

Примерно через 40 мин температура молочно-ацетатной смеси в стаканчиках 55 повышается до 25 С, и можно приступать к створаживанию. Для этого в один стакан с молочно-ацетатной смесью вносят пипеткой 1 мл раствора эталона пепсина, одновременно вклпочая секундомер, и быстро 60 перемешивают. Затем шпателем или пипеткой поднимают смесь по стенке стакана.

По появлении хлопьев казеина молока секундомер останавливают, отмечая время свертывания в секундах.

Проводят 2 — 3 определения и берут среднее значение. Приготовленным раствором эталона можно пользоваться в течение двух-трех суток.

Точно таким же образом определяют время свертывания той же молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина.

Актвиность пепсина определяют в аосолютных единицах чистого фермента по формуле

А=К

Т2 где % — — 10 для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина;

К2 = 5 для активности пищевого говяжьего пепсина порядка 100000 у. е.;

Т, — время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек;

Т, — время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек.

Пример расчета 1. Для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина Ti

70 сек. Т2 140 сек. Активность 10 >С =5 /р.

140 О

Пример расчета 2. Для разбавленного (порядка 100 000 у. е.) пищевого говяжьего пепсина Т1 72 сек; Т2 180 сек.

5Х72 О

Активность ® —— 2 /о.

Изобретение позволяет повысить точность определения и сократить время анализа.

Таким образом, экономическая эффективность изобретения состоит в предотвращении брака при производстве сыров и более экономном расходовании применяемого в промышленности ферментного препарата — пищевого пепсина.

Формула изобретения

Способ определения активности пищевого говяжьего пепсина, предусматривающий растворение навески эталона фермента и испытуемого препарата в растворе соляной кислоты, определение скорости створаживания субстрата испытуемым раствором и раствором эталона с последующим расчетом активности по математической формуле, отличающийся тем, что, с целью ускорения проведения анализа и повышения его точности, в качестве субстрата используют молочно-ацетатную смесь, а активность определяют в абсолютных единицах чистого фермента по формуле

А=К

2 где Ki и К2 — коэффициенты;

К = 10 для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина;

644446

Составитель Ю. Юхнович

Техред С. Антипенко Корректор И. Симкина

Редактор Н. Грязнова

Заказ 1132/32 Изд. № 109 Тираж 586 Подписное

НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»

К2 — — 5 для активности пищевого говяжьего пепсина п оря1дка 100000 у. е.;

T> — время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек;

Тз — время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. ОСТ 49-53-73 «Пепсин пищевой сви5 ной».

2. Авторское свидетельство СССР № 296553, кл. А 23 С 7/00, 1968.