Реактив для ранней диагностики беременности и способ приготовления реактива

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕ Н ИЯ

К flALEHTV

Союз Советскнх

Соцналнстнческнх

Реслублнк (11) á07564

k (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 070174 (21) 1994031/28-13 (23) Приоритет - (32) 08. 01. 73 (31) 7300496 (ЗЗ)Франция (43) Онубликоваио 150578. Бюллетень № 18 (45) Дата опубликования описания 200478 (51) И. Кл.

6 01 К 33/16 фасударстввнаий секстет

Ссватв Ивпстреа СССР в дслам азсбрвтвес к сткритхй (53) УДК 615.475 (08k .8) {72) Автор

Изобретения

Иностранец

Робер Луи Прюньо (Франция) Иностранная фирма

Лаборатуар Тераноль (Франция) {71) Заявитель (54) РЕАКТИВ ДЛЯ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ БЕРЕМЕННОСТИ

И СПОСОБ-ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАКТИВА

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в акушерстве для раннего диагноза беременности.

Известен реактив для ранней диагностики беременности по наличию хориого- . надотропина в моче, содержащий лиофили-. эиоованные сенсибилизнрованные к хорионгонадотропину эритроциты, динатрийфосфат, монокалий фосфат или офилизирован-10 ную антисыворотку к хорионгонадотроGHHУ 11)

Однако известный реактив обладает низкой чувствительностью и не обеспечивает точности диагностики. l5

Целью изобретения является повышение точности диагностики.

Эта цель достигается тем,.что реактив содержит дополнительно этилендиаминтатраацетат натрия, причем компоненты со- 90 держатся в следующих соотношениях, вес ч.:

Лиофилизированные сенсибилизированные к хорионгонадо- 25 тропину эритроциты 20

Динатрийфосфат 0,49-0,5

Монокалийфосфат 0,07-0,075

Антисыворотка к хорионгонадотропину 6-8 30

Этилендиаминтетраацетат натрия 0,3 -0,5

С целью предотвращения преждевременной реакции между эритроцитами и сывороткой, лиофилизацию компонентов производят послойно, в следующей последовательности: взвесь эритроцитов, затем раствор динатрийфосфата, монокалийфосфата и зтилендиамин-тетраацетат натрия, затем антисыворотка.

Реактив для ранней диагностики беременности включает основу, состоящую, например, из эритроцитов или синтетических полимеров, на которой абсорбируется хорионический гонадотропин, основа связана с антисывороткой по отношению к этому гормону.

Количества эритроцитов и антисыворотки должны быть взяты в таких соотношениях, чтобы получить положительную реакцию при 1500 ед/л хорнонического гонадотропного (ХГГ) гормона и отрицательную реакцию при 1000 ед/л

ХГГ.

При такой дозе ХГГ определенная пропорция антисыворотки, насыцается гормоном и становится нейтральной к эритроцитам,сенсибилизированным к ХГГ.

Если в пробирке содержится, например, Зх10а эритроцитов, отношение 607564 эритроциты:антисыворотка = Зх10:2х10 Э

2,5х10, причем это отношение соответS ствует, например, количеству антисыворотки, выраженному в сухом экстракте, от 6600 до 7500 мкг, Титрование антисыворотки осуществляют иэ эритроцитов, сенсибилизированных к ХГ1 . Титр является переменным в каждом случае, именно этот титр и служит основанием для осуществления разбавления.

На пробирку используют 0,2-0,4 мл сусцензии и 3-6% эритроцнтов, сенсибилизированных к ХГГ, 0,3-0,6 мл раствора антисыворотки. Вуфер регулирует значение рН, моча имеет рН 5,8 с физиологическими изменениями 5,2-6,4.

Реакция ингибирования агглютинации происходит в наилучших условиях, если рН близок к нейтральному.. Поэтому необходимо использовать буфер, чтобы рН было в пределах 6,5-7. Для этого реактив должен содержать буфер с фосфатами натрия и калия в количествах, мгг

Первичный фосфат калия 0,072

Первичный фосфат натрия 0,495 в моче кальций связан с белками н не имеет никакого влияния на реакцию, но небольшое количество свободных ионов кальция всегда присутствует, это количество быстро возрастает со старением мочи. Ионы кальция вызывают агглютинацию эритроцихов.. Если моча имеет отрицательную реакцию (моча небеременной женщины не содержит ХГГ), результат останется отрицательным, так как агглютинация явлветая как результатом отсутствия ХГГ; .так и наличия ионов кальция. Если моча имеет положительную реакцию, то не должно происходить агглютинацни, так как имеется наличие

ХГГ, но будет иметь место агглютинация вызванная ионами кальция, а реакция вместо отрицательной станет положительной, поэтому необходимо удалить ионы кальция. Различные количественные анализы показали, что содержание ионов кальция может возрастать на необходимое для проверки количество мочи до

30 мкг и выше, в то время как количест во .10 MK1 способно помешать реакции.

Для реактива ионы кальция удаляют путем перевода их в комплексное соединение с натриевой солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) (на 2 молекулы воды). Для обеспечения надежности реакции, даже если моча не используется в течение малого времени, натриевую соль этиленднаминитетраацетата подают в избытке.

Реактив содержит натриевой соли этиленднаминтетраацетата 0,4 мг.

Динатрийфосфат, монокалийфосфат и натриевую соль этилендиаминтетраацетата вводят в виде раствора, количестso которого составляет 0,1-0,2 мп.

Реактив готовят путем помещения сус пензии эритроцитов в изотонический солевой раствор я пробирке, в которой суспензия заморожена, затем в зто количество эритроцитов вводят замороженный буфер, который содержит замороженный этилендиаминтетраацетат, и поверх которого прибавляют раствор антисыворотки, который также заморожен, после чего все лиофилизнруют.

Соединение буфер-этилендиаминтетраацетат разделяет расположенные рдин над другим слои эритроцитов и сыворотки в целях предотвращения преждевре-, 16 менной реакции между эритроцитами н антисывороткой.

Состав буфер+ЭДТА является изолятором обоих расположенных один над другим слоев эритроцитов и антисыворотки

20 и три замороженных, расположенных таким образом один над другим слоя не могут реагировать между собой из-за их замороженного состояния, а лиофнлиэация осуществляет переход твердых ве 5 ществ в газообразное состояние, при этом различные имеющиеся реактйвы не могут взаимодействовать между собой.

Формула изобретения д 1. Реактив для ранней диагностики беременности по наличию хорионгонадотропина в моче, содержащий лиофилизированные сенсибилизированные к хорионгонадотропину эритроциты, динатрий— фосфат, монокалийфосфат и антисыворотку к хорионгонадотропину, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, он содержит дополнительно этилендиаминтет-. раацетат натрия, причем компоненты со60 держатся в следующих соотношениях, вес.ч.:

Лиофилизнрованные сенсибилизированные к хо55 рионгонадотропину эритроциты

Динатрийфосфат

Монокалийфосфат

Антисыворотка к хорионгонадотропину

Этилендиаминтетраацетат натрия

2. Способ приготовления по п.1 путем лиофилизации, 65 ч а ю шийся тем, что, 20

0,49-0,5

0,07-0,075

6-8

0,3-0,5 реактива отлнс целью

Предел чувствительности предлагаемо30 ro реактива должен превышать 1500 межд. ед. УСН на 1 л исследуемой мочи.

Предлагаемый реактив обладает высокой чувствительностью н предотвращает преждевременную реакцию между эритроцитами и сывороткой

607564

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Емельянова Техоед О.Андрейко корректор «СЛЬкмар

Заказ 2645/46 Тираж 1112 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035с Москва %-35s Раушская наб.s дд 4 5

Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 предотвращения преждевременной реакции между эритроцитами и сывороткой, лиофилиэацию компонентов пронэводят послойно, и следующей последовательности: взвесь эритроцитов, эатем раствор динатрнйфосфата, монокалийфосфата и зтилендиаминтетраацетат натрия, затем антисыворотка.

Источники информации, принятые во ,внимание при экспертизе:

5 1. Acta endeerinat . 35, 261, (1960 г),