Способ снижения реактогенности гамма-глобулина

ОП ИОАН И Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПА1ЕНеУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 31.12.75 (21) 2306354/13 (23) Приоритет — (32) 02.01.75

Союз Советских

Социалистиыеских

Республик (11) 576898 (51) М. Кл, А61К 37 06

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий (31) P 2500076.4 (33) ФРГ (43) Опубликовано 15.10,77. Бюллетень № 38 (45) Дата опубликования описания 25.10.77 (53) УДК 612.398.132 (088,8) (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Вальдемар Шнайдер н Дитрих Вольтер (Лихтенштейн) Иностранная фирма

"Ратиофар ма Анштальт" (Лихтенштейн) (71) Заявитель (S4) СПОСОБ СНИЖЕНИЯ РЕАКТОГЕННОСТИ ГАММА—

ГЛОБУЛИНА

Изобретение относится к области медицины, а именно гематологии.

Известен способ снижения реактогенности гамма - глобулина, предназначенного для внутривенного введения путем удаления агрегированных молекул под действием пепсииа, присоединенного к ионообменной смоле, через которую пропускают очищаемый раствор гамма - глобулина (1) .

Однако известный способ не обеспечивает высоКой чистоты и нативности целевого продукта.

Для повышения степени чистоты и нативности целевого продукта по предлагаемому способу осадок гамма - глобулина растворяют в водном растворе с рН 3,5 — 8,0, содержащем высокомолекулярные соединения, например в 1 — 30 o-ном растворе оксиэтилкрахмала с молекуляр п.тм весом

1000 — 900000 с последующим центрифугированием и растворением осадка в физиологическом растворе.

Способ осуществляют следующим образом.

Осажденный из крови или кровеобразных продуктов осадок гамма - глобулина растворяют в присутствии высокомолекулярного вещества, наппимер .оксиэтилкрахмала, желатины, декстрана, альбуьоша, MHoFoRT0MHoI о стптрта, по пшинильного соединения.

Преимущественно осадок растворяют в буфер" ном растворе оксиэтижрахмала,оимеющем значение рН 3,5 — 8,0, предпочтительно 6,5 — 6,9.

Ссдержмие окснэтнлкрахмала в водном растворе составляет 1 — 30%, Особенно хорошие результаты достигают при содержании оксиэтилкрахма10 ла 8 — 10%. Оксиэтижрахмал применжот с молекулярным весом 1000 — 900000.

После растворения гамма- глобулинового осадка в буферном растворе оксизтилкрахмала к смеси прибавляют 10% полизтиленгликоля, в результате

15 чего выделяется осадок, которьпт центрифугируют.

Вместо полиэтилея щпсоля можно применять другие полимерные многоатомные спирты, Смесь центрифутируют. Получениш над осажом раствор смешивают при рН 7,0 — 7,2 с 20% полиэтилеи штколя и

20 затем вновь центрифугируют. Полученный осадок растворяют в физиологическом растворе и доводят до концентрации бежа, составляющеи примерно

5%. После фильтрования в стерильных условиях раствор может быть использован для применения в

25 терапевтических целях. 57б898

Составитель С. Малютина

ТеирЬд а Лу

Редактор Л. Емельянова

Корректор С. Патрушева

Тираж 677 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 2940/701

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

П р и и е р. В качестве исходного материала применяют собранную плазму, которую смешивают с 8 o этилового спирта и осаждают при температуре

-3 С и рН7,2. При этом происходит осаждение фракции 1. Находящуюся над осадком жидкость после этого при температуре -5 С и рН 5,8 смешивают с 10% этилового спирта. При этом происходит осаждение фракций II и III, которые состоят из гамма - глобулина. Осадок снова растворяют и при рН 5 вновь производят осаждение прибавлением 8% этилового спирта.

Из полученного над осадком раствора еще раз при рН 7,2 посредством пруйавления 25% этилового спирта производят осаждение. Полученный осадок (фракция I 1) состоит на 90 o из гамма - глобулина.

Осадок гамма - глобулина вновь растворяют в буферном водном растворе при рН 6,7 в концентрации примерно б%, причем к водному раствору прибавляют примерно 10 o оксиэтилкрахмала. Оксиэтилкрахмал создает возможность произвести огделение уже имеющихся агрегированных частиц и одновременно вызвать защиту еще неагрегированного гамма ° глобулина.

После добавления 10% полиэтяленгликаля смесь центрифугируют. Полученный над осадком раствор при рН7,2 смешивают с 20% полиэтиленгликоля и центрифугируют.

Полученный осадок вводят в физиологический раствор поваренной сот, получают раствор с концентрацией белка 5,2% и филътруип в стерильных условиях.

Приготовленный раствор пригоден для применения в терапевтических целях, б Предлагаемый способ обеспечивает полное удаление всех других присутствующих в плазме веществ, в результате чего получают чистый гамма ° глобулин, который применяют для лечения и профилактики инфекционных заболеваний. !

Формула изобретения

Способ снижения реактогениости гамма - гло15 булина, предназначенного для внутривенного введения, путем удаления агрегированных молекул, о тличающийея тем, mo, c целью повышения чистоты и нативности целевого продукта, осадок гамма - глобулина растворяют и водном растворе с

20 рН 3,5-8,0, ссфержащем высокомолекулярные со. единения, например в 1-30%-ном растворе оксиэтилкрахмала с молекулярным весом 1000 — 900000 с последующим центрифугированием и растворением осадка в физиологическом растворе.

Иеточникй информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Мер-оке Альбертсон. Разделение клеточ1ых часпщ и макромолекул, Москва, 1974.