Способ приготовления питательной среды для выращивания микроорганизмов

(Й библиотек 4БД

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

HAG(. с >:,з-н;..:, иа1 ент оОП ИСАНЙ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 552О34

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительное к патенту (22) Заявлено21.03.73 (21) 1897577/13 (23) Приоритет — (32) 22.03.72 (31) 1 3403/72 (33) Великобритания (43) Опубликовано25.03.77.Бюллетень № 11 (45) Дата опубликования описания 16.06.77 (51) М. Кл. С 12 В 3/00

Государствеииый комитет

Совета Мииистров СССР по делам изооретеиий и открытий (53) УДК 663. 143.4 (088. 8) Ин остр анцы

Джон Дерек Леви, Алан Артур Иео (Великобритания) и Деннис Оуен.Зайнс (Австралия) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Дзе Бритиш Петролеум Компани Лимитед" (Великобритания) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известен способ приготовления питательной среды для выращивания микроорганизмов, предусматривающий ввецение источника азота, углерода, соли железа, фосфорной кислоты и .цругих необходимых веществ (12.

В настоящее время в процессах ферментации осуществляют стерилизацию фосфор- 1О ной кислоты как отдельно, так и вместе с водной средой до подачи в бродильный чан, При этом стерилизацию проводят путем нагревания кислоты или питательной среды, 1а содержащей кислоту, в течение времени, достаточного для,цезактивирования или уничтожения микроорганизмов, присутствующих в кислоте или в содержащей ее среде. При этом наблюдается недостаточная коррозион- 20 ная стойкость и осаждение нерастворимых соединений, например фосфатов железа, на теплообменных поверхностях используемого теплообменника, очистка которых усложняет процесс. 25

С целью упрощения процесса и повышения стерильности среды, стерилизацию Фосфорной кислоты перец введением ее в питательную среду осуществляют путем вьщерживания в герметической имкости в течение 1-24 час, а фосфорную кислоту используют с концентрацией ее в растворе 55-88%.

Соль железа стерилизуют путем введения в фосфорную кислоту при совместном вьщерживании. При этом фосфорную кислоту выдерживают при температуре окружающей среды.

Способ осуществляют следующим образом. Непрерывное культивирование микроорганизмов проводят в бродильном чане в присутствии стерилизованной водной питательной среды и технической фосфорной кислоты крепостью не менее 55%. Фосфорную кислоту перед введением в питательную сре,цу стерилизуют путем выдерживания в герметичной емкости (трубопроводе), изолированной от наружного микробного загрязнения, при температуре окружающей среды в течение периода времени, достаточного для

))накTивации или уничтэ>ке; я микрээрга;!!l ::мэв, присутствующих в кислоте. 3 таблице приведены данные зависимости гремени стерилизации оТ концентрации кислоты при 20эС, 5

Таким образом) при использовании техни ескэй фосфорной кислэты с концентрацией 55-79% неэбходимэ для стерилизации

1-24 час.

Кислоту можно также выдерживать в гер-10 метичнэм сосуде в течение периода времени, достаточного для инактивирования или уничтожения микроорганизмов, присутствующих в ней. Стерилизованную кислоту смешивают со стерилизованной водной средой до Ь подачи в брэдильный чан или вводят этдельнэ из резервуара. В последнем случае подбирают длину и диаметр трубопровода и скэрэсть пэдачи кислоты в зависимости DT времени, дэстаточногэ для инактивации или 20 уничтожения микроорганизмов, присутствующих в кислоте.

В качестве водной питательной среды выбирают среду, пригодную для выращивания желаемого микроорганизма. 25

В случае проведения процессов ферментации, в кэтэрых для микроорганизма необх димы соли железа, например сульфаты

>кэ, .; ., последние растворяют в фосфэрнэй кн ).эте. Затем раствор выдерживают в ем .ости, изэлирэваннэй эт нару>кнэгэ микробного загрязнения, в течение времени,,дэстатэчнэгэ для инактииирэвания или уничтэ>кения уже присутству»эщих микрээрга»п»змэв, %

Когда в качестве источника усваиваемого углерода. испэльзуют углеводорэды, то наиболее подхэдчщей средой являются керосин, н-парафины с 10-30 атомами углерода, газовые и смазочные масла.

Микроорганизмами, использующими угдевэдэроды, могут быть дрожжи, например ..:„-.. poq=- Cond d,,т. гор Н,Н>.

se >I u о EII -": N e u vo 5 p c v a при этом

»:) д & EicHDJIbG+oT 0 4P QOg»ccrc„ри !Eche!-l.» v o, uk» Й:>, uk Р» чаE»aг ma»о и 1 op»сой9Пример 1. Штамм» 35 -6331

-(3»» d id С» 3» рО 0у». » Ca! культивируют в антисептических услэвиях в 2000-литро- М

ВоМ бродильном чане, имеющем рабэчий эбьем 1800 л.

Водную питательную среду состава, г: (м н,),бо, НСИ 1,15 Я

Mg 50„7Н,G 0,65

Pter SD< I»H P 0,045

F8504 7НгО 0,068 » >04 ) ) гО 0,17

С».»&0, ЬН,О 0,008 60

Дрожжевой экстракт 10,000

Водопроводная вода, л 1 непрерывно стерилизуют, пропуская через теплоэбменник пластинчатого типа в течение 1 мин при 140эС. Затем стерилизованную среду непрерывно подают в бродильный чан. Источником углерода служит стерилизованная смесь керосинов из н-парафинов

С . .. полученная обработкой молекулярным ситом.

В бродильный чан подают также техническую фосфорную кислоту, полученную термическим способом (концентрация 70%).

Кислоту хранят в резервуаре и подают в чан пэ трубопроводу при 20эС, Длину и диаметр трубопровода выбирают так, что минимальный период времени, в течение которого кислота не контактирует с окружающей атмосферой, составляет не менее 4. час, если количество и скорость подачи достаточны для удовлетворения потребности брожения в фосфоре, т,е. 1 г технической фосфорной кислоты на 1 л ферментационной среды.

При этом бродильный чан работает

2817 час без забивания и без загрязнения теплоэбменника.

Для сравнения проводят непрерывное брожение при таких же условиях, как в примере 1, но фэсфэруню кислоту добавляют к водной питательной среде дэ ввода ее и кислоты в теплообменник для стерилизации.

При этом работа удовлетворительна в течечение 1820 час, но сопровождается постепенным уменьшением коэффициента теплэпередачи в теплообменнике. Затем противэдавление в теплообменнике возрастает и после 1970 час работы давление и низкий коэффициент теплопередачи оказывают влияние на рабэту, а после 2087 час непрерывной рабэты прокладки теплообменника были вырваны и он вышел из строя. Пластины были загрязнены и не могут быть эчищены кислотой или каустической щелочью.

Вначале пластины чистят вручную, а затем с помощью пескоструйного аппарата, при этом пластины повре>Кдаются.

Пример 2. В 2000-литровом бродильном чане, имеющем рабочий эбьем

1800 л, в антисептических условиях культивируют штамм CHS -6331 С а ид»д о»

Р» р p P y ti с о», Водную питательную среду состава, r: (Н 4) г > О4 2,0

КСР 1,15

Я 4 2 G,65

IM EI S 0 4 ) - О 0,045

Е»Ь04 - НгО 0,17

Дрожжевой экстракт 1 О, 000

Си Ва„ Н,О 0.0008

Водопроводная вода, л

Концентрация технической фосфорн ой кисл о ты, %

Минимальный периэд времени для полного уничтожения микроорганизмов в кислоте, час

24

4

ЦНИИПИ

Заказ 147/34 Тираж 581 Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 непрерывно стерилизуют, пропуск .". ч-.рез теплообменник пластинчатогэ типа B -:е тение 1 мин при 140 С и непрерывно подавая в брэцильный чан.

В качестве источника углерэда используют отдельно стеризованную смесь углеводородов из н-парафинов С -С, полученную обработкой молекулярным ситом.

Полученную термическим способом тех- 10 ническую фосфорную кислоту подают в бродильный чан отдельно. Кислоту предварительно смешивают с сульфатом железа (ИВО, 7Й,О) в количестве 2,7% эт веса смеси, Раствор хранят в резервуаре и по- 15 дают в чан по трубопроводу при 20оС. Длину и диаметр трубопровода выбирают из расчета пребывания раствора в системе резервуар-трубопровод не менее 4 час. Раствор подают в чан сэ скоростью примерно 1 г.20 фосфорной кислоты на 1 л ферментациэнной среды.

При этом бродильный чан непрерывно работает 4270 час без забивки и загрязнения теплообменника. 25

Пример 3. В бродильном чане с рабочим объемом 20 л непрерывно культивируют штамм СИВ -6331 Са ид да 01ро 0уЫ са.

Формула изобретения

1. Способ приготовления питательной среды для выращивания микрэорганизмов, 45 предусматривающий смешивание источника азота, углерода, соли железа, фосфорной кислоты с прецварительнэй стерилизацией их, отличающийся тем, чтэ, с целью упрощения процесса и повышения 5Î стерильности среды, стерилизацию фосфорной кислоты перед введением ее в питательную среду осуществляют путем выдерживания в герметической емкости в течение

1-24 час, а фэсфэрную кислоту используют 55 с концентрацией ее в растворе 55-88%..+эц,;"-„ -,,„; -:-..ьную с;оцу состава, г (н 1 =г, 2,0 г

l,15

ЯдБ04 7Н 0 0,65

М О, Н,О 0,045

Ге&04 ТН 0 0,068

Х (Я504 4 0

0,17

Др ожже в эй экстракт 10„000

Водопроводная вода, л до 1 непрерывно стерилизуют, пропуская через пластинчатый теплоэбменник при 140эC в течение 1 мин.

Термическую фосфорную кислоту (концентрация 55%) выдерживают в закрытом резервуаре при 20эС без контакта с наружным микробным загрязнением 24 час, Затем кислэту смешивают со стерилизованной вэдной питательной средой в количестве 1 г/л, полученную смесь непрерывно поцают в бродильный чан. В качестве источника углерода используют отдельно стерилизованную смесь газэйлей из н-парафинов С -С, обработанную молекулярным ситом.

При этом бродильный чан работает всего 300 час без забивания или этказа в работе теплоэбменника и без загрязнений.

Таблица

2.Способпоп, 1, этличаю— шийся тем, что, соль железа стерилизуют путем введения в фэсфэрную кислоту при совместном выцерживании.

3. Способ по пп. 1 и 2, о т л и ч а юшийся тем, чтэ фосфорную кислэту выдерживают при температуре экружающей среды.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Авторское свицетельствэ М 335274, М.Кл. С 12 В 3/08, 02.10.70.