Способ определения жизнеспособности зародыша гельминтов

1 (i i) 550156

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик Ё " 1 (61) Дополнительное к авт. свид-ву ,(22) Заявлено 28.03.75 (21) 2121810/15 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 15.03.77. Бюллетень № 10

Дата опубликования описания 06.05.77 (51) М. Кл.в А 61В 10/00//

С 12 К 1/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений (5.3) УДК 616.99.5.1-093/

/-098 (088.8) и открытии (72) Авторы изобретения И. В. Сафронов и В. И. Орловский (71) Заявитель Белорусский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. С. H. Вышелесского (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ

ЗАРОДЫШЕЙ ГЕЛЬМИНТОВ

Изобретение относится к способам определения жизнеспособности зародышей гельминтов, в частности адолескарии парамфистоматид, и может быть использовано в диагностике гель минтозных заболеваний животных, имеющих широкое распространение и наносящих ощутимый экономический ущерб животноводству, а также изобретение может быть использовано в биологии в лабораторной практике при проведении гельминтологических исследований.

Известен способ определения жизнеспособности зародышей гельминтов, в частности адолескариев, заключающийся в скармливании проверяемых адолескарий лабораторным животным — белым мышам с последующим подсчетом в их фекалиях или содержимом кишечника количества жизнеспособных адолескарий (1). Однако такой способ трудоемок, требует наличия лабораторных животных, затраты времени составляют 2,5 — 24 и более час. Кроме того, способ не обеспечивает точности в связи с возможными потерями адолескарий и цист во время их скармливания мышам и последующим сбором.

Известен также способ определения жизнеспособности адолескарий, заключающийся в инкубировании их в смеси растворов трипсина, пищевой соды, хлорида натрия и желчи крупного рогатого скота в термостате 5 — 6 час с последующим выявлением под микроскопом жизнеспособных адолескарий по их движению в цисте (2).

5 Недостатками этого способа являются также длительность процесса определения и необходимость внимательного напряженного наблюдения за адолескариями под микроскопом.

10 Наиболее близким по технической сущности к предложенному способу является способ определения жизнеспособности зародышей гельминтов, например яиц тениид, заключающийся в помещении их в 1%-ный раствор серни15 стого натрия (3). Зрелые и живые зародыши тениид освобождаются от наружных оболочек, и жизнеспособность их определяют по сохранению их естественной формы и устойчивости к 1%-ному раствору сернистого натрия.

Однако известный способ не эффективен для определения жизнеопособности адолескарий парамфистоматид, так как применение

1%-ного раствора сернистого натрия приводит

25 к гибели адолескарий. Кроме того, дополнительно с определением указанной выше естественной формы зародышей в яйце необходимо определять и другие морфологические признаки, например степень развития у заро30 дышей крючьев и их расположение.

550156

Составитель Л. Мурая

Техред И. Караидашова

Корректор Л. Котова

Редактор H. Аристова

Заказ 546/2 Изд. Ме 301 Тираж 654 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 пр. Сапунова, 2

Типография, 3

Целью изобретения является повышение эффективности спосо" à при определении жизнеспособности адолескарий парамфистоматид.

Для этого по предлагаемому способу адолескарии помещают в 0,4 — 0,6""/о-ный раствор сернистого натрия, предварительно приготовленный на 0,5 — 0,85 "/о-ном растворе хлорида натрия, и жизнеспособными считают адолескарии, из которых эксцистировались личинки парамфистоматид. Раствор сернистого натрия оыстро проникает через цисту адолескарий парамфистоматид и оказывает раздражающее деиствие на личинку, что приводит их к эксцистированию.

Способ осуществляется следующим образом. .чдолескарии парамфистоматид по 10 — 20 экземпляров, инцистировавшиеся на полиэтиленовой пленке, листьях растений или собранные отдельно, помещают в чашки Петри и заливают 0,4 — 0,6%-ным раствором сернистого натрия (11азЬ), приготовленным на 0,5—

0,85%-ном водном растворе хлорида натрия (1U аС1) . Адолескарии должны быть погружены в раствор. Чашки Петри с адолескариями помещают на 30 мин в термостат при температуре о7 — 39"C или содержат при комнатной температуре 18 — 24"С в течение часа. ОКизнеспосооные личинки трематод за эти промежутки времени эксцистируются. Начало эксцистации личинок парамфистоматид можно наолюдать через 15 — 20 мин при температуре раствора 37 — 39 С и через 30 — 40 мин при комнатной температуре 18 — 24"С. Личинки трематод эксцистируются активно со стороны плоской поверхности адолескарий. Цисты адолескарий, из которых вышли личинки трематод, становятся прозрачными с приоткрытой крышечкой на плоской поверхности. Исследования проводят под малым увеличением микроскопа (лучше МБС-1). К жизнеспособным относят адолескарии, из которых эксцистировались личинки парамфистоматид. Личинки подвижны, отделяются от цисты или удерживают ее брюшной присоской.

Нежизнеспособные адолескарии не эксцистируются. Личинки парамфистоматид остаются в цисте, неподвижны или деформированы.

Часть нежизнеспособных личинок под действием раствора разбухает, выпячивается из цисты в виде серого мешка и растворяется в течение 2 — 3 час.

Процент жизнеспособных адолескарий определяют по формуле:

Х A 100

7 п

10 где Х вЂ” процент жизнеспособных адолескарий, А — количество жизнеспособных адолескарий, п — общее количество адолескарий, взятых для исследования.

15 Из партии полученных (собранных) адолескарий или адолескарий, предназначенных для искусственного заражения животных, на жизнеспособность определяют не менее 100 экземпляров.

20 Предлагаемый способ определения жизнеспособности адолескарий отличается простотой, экономичностью, быстротой исполнения и может быть применен в полевых условиях.

Формула изобретения

Способ определения жизнеспособности зародышей гельминтов, включающий воздействие на них раствора сернистого натрия, от л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения эф30 фективности способа при определении жизнеспособности адолескарий парамфистоматид, последние помещают в 0,4 — О,б /о раствор сернистого натрия, предварительно приготовленный на 0,5 — 0,85 /о растворе хлорида натрия, 35 и жизнеспособными считают адолескарии, из которых эксцистировались личинки парамфисто м атид.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

40 1. Авторское свидетельство М 390808, M.

Кл. А б1Ь 10/00, 1973.

2. Глузман И. Я. «О сроках сохранения жизнеспособности адолескарий в лабораторных и природных условиях». Труды Всесоюз45 ного института гельминтологии им. К. И. Скрябина, 1968, т. 14, с. 17б — 180.

3. Котельников Г. А. «Диагностика гельминтозов животных», М., «Колос», 1974. с. 190.