Способ определения антигенов или антител

СОКЗЗИНН о-телничеон ааТеНТН0-т»3

О П

И 3 О Б Р Е Т Е и И Я

Со1оз т оаетснии

Социалистимескии

Респубпик

К АВТОРСКОМУ СВИДВТИЛЬСТВУ (61) Дополнительное н авт. свид-ву (22} Заявлено 26, 06, 74(2!) 2037331/13 (бт) М. Кл.о

С 12 К 1/00 с присоединениен заявки №

Гасударственный номитет

Совотв Министров СССР по делам иэооретений н аткрь!тнй (23) Приоритет (43) Опубликовано 25,06. 7Яэк3ллетень № 23 (45! Дата опубликования описания13,07,76 (53) УДК 576,8. ,097 (088, 8) (72) Авторы изобретения

ГО.А. Хавкин и В.Ф. Фомичев

Отдел биохимии и цитохимии Башкирского филиала А11 СССР (71) ЗаяВитЕль (54) С1!ОСОБ ОПРЕДЕЛЕ1!ИЯ АИТИРЕЗHOB!!ЛИ А!ГТИТЕЛ!!:3об!.етоние Отнсчеит.я к медин1п1е и может быть испопь л3131ИО для диагнОсти»

ЧЕСКИХ, (. ННИта! НО-1 ИГИЕНИЧЕСКИХ И ИСС1!О е

ДОВа l З31ЬСК; Я ЦЕЛС й, Известен спосОб Онредс.пения антигонов и11и антит . «д. 1я чеl 0 н!)Оизв011ят копью» нацию бакч .риофага с помошью активиронатшых гантенов или бифункциональных соединений,,а также при использовании метода иммунной гемадсорбции, конечный рс зультат реакц11и определяют по литическим бляшкам, Образующимся при смешении частиц сорбента с индикаторной культурой, С целью повьш ения чувствительности реакции индикаторную культуру смешива ют с реактивированныМ посредством обработки иапаином в присутствии раствора цистеина и щц1атриевой соли этилендиаминтетра уксусной кислоты (ЭДТА) фагом.

II р и л1 е р 1. Отмытые.формалинизированные эритроциты барана суспензи» руют в кроличьей ннтиэритроцитарной сы- воротке до концентрации 1,35%, Все разведения готовят на растворе, содержавшем

1% хлористого натрия, О, 15% ЭДТА и

2 доведенном бурой до р1! 7, 2 (далее Н,« куется разбавителем). !Осле инкубацни в течение 30 мин при 37"С эритроциты отмывают трижды разбавителел1 при

8000 Об/л1ин в течение 20 сек. Затем эритроциты обрабатывают в тех же соотношениях и нри том же режим» отмывки:

ОслинОй сл1вОроткой против глобулннов кролика в разведении 1:10, кроличьей сывор:-ткой против фага Т2 в рас3ведении

1:10, фаголизатом с титром 10 бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл, Адсорбированный фаг реактивируют добавлсъ- нием к отмытому осадку 1 мл расчвсра, содержавшего 1% ттапаина,, О, I„M двузамещетц1ого фосфата калия, О, 03 М солянокислого цистеина и 0,005 N ЭДТА; рН 7,0, После инкубации смеси в течение 30 мин при 37 С 0,1 мл реактиви» чо рованного фага смешивают с 0,9 мл 4часовой культуры. Эшерихия коли Б выдер.живают 10 мин при комнатной ч.емпературе и по 0,02 мл индикаторной смеси наносят на подсушенный слой Мясо-пепрб гойного агара в виде зоны пиаме1ром 15518518

Составитель С. Малютина

Редактор А. Бер Техрец М. Ликовнч Корректор Т, Кравченко

Заказ 2250/235 Тираж 551 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская араб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 420 мм, Ре;зультат учитывают после выдерживания.чашек в течение ночи при 37 С. еакция СИАРФ выявляет антитела цви разведении гемолитической сь:вороч ки 4: l6000 (3, 5 10 ЕОЕ в опытном элюате, менее 102 в контрольном), в то время как реакция геммагглютинации была положнгельной в разведении 1:1000. Гаким образом, СИАРФ может быть ис-. пользована для обнаружения противоклеточных антител.

Пример 2, Фибрин из крови ло щади коньюгирует с диазотированной паминобенэойной кислотой (АСБ), Коньюгат смешивают с сефадексом Г-25 (мелкий) в соотношении 1: 9 и загружают и колонки диаметром 5 и высотой 15 мм.

Антитела сорбируют иэ сыворотки кроли ка, иммунизированного коньюгатом ПАББСА (бычий сывороточный альбумин) с помощью колоночной техники. ПоследоваДанные, приведенные в таблице, свидетельствуют 3 возможности использования

СИАРФ для обнаружения противобелковых антител, Формула изобретения

Способ определения антигенов или антител путем иммобилизации одного из компонентов реакции на иммуносорбенте с последующей смешанной иммунной an4 тельность опеРаций состав разбавителя и реагентов аналогичны примеру 1.

Реакция СИАРФ выявляет антитела при разведении айтисыворотк)и 1:1000 (4,1 ° 10 БОБ в опытном эпюате, 7,5 °

10 в контрольном), в то время как рс4 акция пассивной гемагглютинации была поло кительна в разведении 1:80. Таким образом, СИАРФ может быть использована для обнаружения противогаптенных антител, Пример 3. Бычий сывороточ ный альбумин (БСА) коньюгируют с се» !

6 фадексом Г-75 (сверхмелким) с помощью сернокислого эфира бета-оксиэтилсульфа ниланилина по известному способу. Антитела сорбируют из кроличьей анти-ПАБЕСА сыворотки с определением по предлагаемому способу (пример 2), Данные представлены в таблице,,о сорбцией бактериофага, учетом конечного результатареакции по литическим бляш кам, образующимся при смешении фога с индикаторной культурой, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности реакции, индикаторную культуру смешивают с рсактивированным. посредством обработки папаипом в присутствии раствора цистеина динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты фагом,