Штамм бактерий -574-продуцент белка

О П И C-A Н й--а-","

КЗОЬРЕ7Е Н ИЯ

Союз Советских

Социйлкстич&ских

Р ес!ту дни

К АВХОРСИОМУ СВИДБ7ИЛЬСХВУ (61) Дополнительное к авт. =вид-ву ф, !}

" 2 "-ачв-ef "- " 1 (21) 20

1 РИСОЕ ЧИ }аНИЕ 1! За

О L2 !, 3/СО

С Х2 i 13/06

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР по делам изооретений и открытий (23) Приоритет (13) Опубликовано >,;==- ;, О. : .. Б оллет-:

1 (45 I rj Ята О И СнаH !j ЕНИ; —:

1,- .. „г„. - -)«! (Оэ) г !

< ãò", !:, 1 ! 1),:; В! (?2) Авторы изобретении

Всесоюзный !а",ч!!э:-. . Ос .,3},B; ельск!гй (71) Заявитель (54) 1!!ТАММ БАКг;!э1;!1, ;.Ч:,;. с:;cocci! Остс1 . -i E -.: i- j Г b i : J j .. -}.

Аэрээ.

Изобретечие относится к микрэбиэ,:,}эг;— ческэй прэ.:ышленнэсти и пре,дставляет сэбэй нэгый штамм бактерий для 1-:элучепия белкэво-витаминного продукта на средах, сэпержа!цих в качестве источчика углерэда э ищенные жидкие парафины }!! и очищен::,:; Bi ;.— тяное сырье.

Ьзв естно пР!1х! ОH BHHB ш TQM MCB !A J co co ccLI5

EQ Ст.! 6 ДЛЯ ПО!1 i Ч«ЕНИЯ СЕЛКОВС- :: r = . ..:! 1 — ной массы на средах с углеводород.-. 11,.

Однако Hp}. использовании таких штаммов наблюдается низкая скорость размножения культуры и, следователь}!э,. низкая производительность процесса. 15 !!елью изобретения является 1толучс}„..э штамма бактерий, обладающего ьысэкэй схэростью раста на средах, сэдержаших как эчищенное, TBK и неочишеннэе углевэдэрэдиэе сырье.

Штамм Му СОСОССП9 tcf C t19 ВСБ-574 выделен в процессе длительногэ непрерывкультив1:рован}:я HB средах с углеводородами при высокой скорости .::„.".-. -..; ды. 25, JIQXj;f «H1 П, ., °, ; ° 1, il ПЭ ЭП1 ii Е, irl B 1Ю

А. Крас:,,;--.и =„-ъ= (11Р4"..-) и х1!а}пттся

--"-Ю 1:- -P .«1i!Э-(ГГ 1"-IIDB, ::i э !.нот::, т;:. Ь!1эс1!нтэза б"=лкэвых,:: .у с..-;}и,:1! шта: ..: Атусэсосгн}! Гас}1

, -)-,.r:,: —, Э 1!ЧЕСКПЕ "f,!3HIII<11.,(fr i т 1!rr 1т Г,т, j Orr:. 1 C„ 1 ° 1 1 Р, а ;,H .If di"1P— не экра .}1!!ь«}к тся по Оа . 1у. Pac.; o;EBÐ ЛIы эд11i чэч.}о, в -.(р,}-.; псп! в виде ц почек. 1- азм}}эжак}тся деле}!1!е"..! «1 Ilo÷ã.ÝÂOH11B:.:

°, изиолэгическ 1= пр! }H-.к}. а .;яс . -1:ептэH}13 «!"!.О . " энии ." }слки -"

ЭТ i" ЧЕЧ}IЬIл QO; j31, Кэ xr1 111.1Е С РЭВ1!Ы} 111 !!раях}и глади ья блсстящая поверхность ! б EBCE} Влажишй, . П!Ооr .ij,"„H СЛЕГKB 1}р11ПЭдця I

1- !1Е}!ТРУ, .ЭЛЭ}1!!11 - - .",ОЗ!МЧ1!Ы -. Э -!I jjQTD511742

Желатину не Разжижает, Рост на повеРхности.

Лакмусовое молоко свертывает с подкислением среды íà 11-ые сутки, пептонизирует на 15-ые сутки. 5

На картофеле обильный рост.

Отношение к углеводам.

Образует кислоту из глюкозы, галактозы, лактозы, ксилозы, арабинозы, слабоиз сахарозы и мальтозы.

Отношение к азоту.

Нитритов из нитратов не образует. Штамм не патогенен.

Штамм способен развиваться в среде, содержащей высокие концентрации углеводород- 5 ного сырья (25% выше). В состав среды, на которой проводят выращивание штамма, входят обычные минеральные соли, содержащие азот, фосфор, калий, магний, железо, цинк, марганец, медь. 20

Для своего развития штамм не требует биостимуляторов и других дорогостоящих в ешеств. Благодаря высокой скор ости роста штамм не инфицируется в непрерывном процессе и поэтому процесс выращивания р можно проводить в нестерильных условиях.

Содержание сырого белка до 80% в готовом продукте.

Биомасса штамма ВСБ-574 полноценна Э0 по аминокислотному составу. Так, при культивировании в среде, содержащей 25% углеводородов нефти Мангышлакского месторождения, получена биомасса, которая до экстрактивной очистки растворителями содержит 35 (в % на сухое вещество) лизина 4,3; гистипина 0,4; аргинина 3,0; аспарагиновой кислоты 6,8; треонина 3,0; серина 2,0; глутаминовой кислоты 5,8; пролина 2,1; глицина 2,8; аланина 3,3; цистина 1,0> валина 40

3,1; метионина 1,2; изолейцина 2,2; лейцина 3, 1; фенилалина 2,0; триптофана 0,42.

Использование штамма hhycococcu8 Pact<8

ВСБ-574 позволяет в два раза и более увеличить выход целевого продукта с единицы оборудования в единицу времени (до 25 т абсолютно сухого веса с тонны среды в час).

Возможность выращивания данного штамма на углеводородных субстратах разного 50 состава (от очищенных жидких парафинов) до нефтяных дистиллятов и сырой нефти) дает возможность получать биомассу из более дешевого источника углерода (неочищенное сырье) и облегчает промышленное куль-55 тив ирование.

Процесс культивирования предлагаемого штамма может быть осуществлен в нестерильных условиях с использованием оборудования, применяющегося в настоящее время 60 при получении белково-витаминного концентрата.

Пример 1. Культивирование klgcococcu8 Pack i6 ВСБ-574 осуществляют непрерывным способом в 30-л ферментере с аэрацией и перемешиванием среды. Источником углерода служит дистиллят, полученный из нефти Мангышлакского месторождения, содержащий 37% комплексообразующих углеводородов. Сырье подают в количестве

15% к притоку. Процесс ведут при 38о

-42 С, подаче воздуха 3-4 л/л в 1 мин, РН 7,0 на среде следующего состава:

Ортофосфорная кислота (75 /-ная), мл 1,14

Калий хлористый, г 1,14

Магний сернокислый, г 0,55

Железо сернокислое, мг 45

11инк сернокислый, мг ЗЗ

Марганец сернокислый, мг 31,5

Медь сернокислая, мг 4,1

Вода водопроводная, л до 1

Источником азота служит 3%-ный раствор аммиака, который используют также для регулирования величины РН. Скорость процесса выращивания бактерий составляет

1,25 час (коэффициент разбавления среды в ферментере 0,8 час ).

При этих услввиях ферментации концентрация биомассы в среде составляет 27 г абсолютно сухого веса (АСВ) в 1 кг среды, что соответствует продуктивности ферментера по биомассе 21,6 кг АСВ на 1 т в 1 час.

Биомассу и депарафинизированный нефтяной дистиллят выделяют из среды сепарацией в присутствии поверхностно-активного вещества (например, технического сульфоуреида), биомассу высушивают на распылительной сушилке. Сухая биомасса содержит 75% сырьго протеина; 3,7% лизина и 14% липидов; 30,7 мг/кг витамина В (тиамин); 237 мк/кг витамина В (рибофлавин); 7,1% нуклеиновых кислот. 3,6 углеводов.

После экстрактивной очистки биомассы содержание сырого протеина в готовом продукте составляет 82,5%, углеводородов, 0,02%.

Пример 2. Культивирование Mycococcus Pact

511742

Составитель Л. Минеева

Редактор Т. Фадеева Техред А. Богдан Корректор H. Ковалева

Заказ 732/69 Тираж 575 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Концентрация биомассы составляет 22,8 r

АСВ на 1 кг среды, продуктивность по биомассе 25,3 кг АСВ на 1 т в 1 час. Содержание сырого протеина в готовом продукте составляет 79%. 5

Пример 3. Выращивание Мусососсия

Рс с1< BCF 574 осуществляют на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода очищенный жидкий парафин при содержании его в среде 3% к притоку. Процесс ведут по примеру 1, но при скорости процесса 0,9 час (коэффициент разбавления среды 1, 1 час ) .

При условиях культивирования концентрация биомассы в ферментере составляет 26,8г

АСВ на 1 кг среды, а удельная производительность ферментера по биомассе 24,3 кг 20

АСВ с 1 т среды в 1 час. Состав биомассы аналогичен описанному в предыдущих примерах.

Пример 4. МусососсиИ Ра с 1ь*

ВСБ-574 культивируют в среде, содержащей

25% дизельного дистиллята при скорости процесса 0,77 час (коэффициент разбавления сре-I ды 1,3 час) по технологическим параметрам, описанным в примере 1. При этих условиях выращивания концентрация биомассы составляет 13,5 r АСВ на 1 кг среды. Удельная производительность по биомассе -17,6 кг

АСВ на 1 т в 1 час.

Состав биомассы аналогичен описанному в примерах 1 и 2.

Формула изобретения

Штамм бактерий Mgсосассив Расti5

ВСБ-574 — продуцент белка.

Хранится в коллекции микроорганизмов

Всесоюзного научно-исследовательского института биосинтеза белковых веществ.

Продуцент белково-витаминной массы, содержа;ший 70-80% сырого белка и до 4,3% лизина, 31 мг/кг тиамина и 240 мг/кг рибофлавина.

Активно растет при высокой скорости процесса 1-0,77 час (коэффициент разбавления среды 1-1,3 час ).

Морфологические признаки. Клетки круглые и слегка овальной формы, размером от 0,56х0,63 до 1,96х2,1 мкм. Расположены одиночно и в парах, Встречаются в виде цепочек. Размножение делением и почкованием. На мясо-пептэнном агаре колонии мелкие, непрозра|ньr=-, беловато-серые от точечных до 2,0 мм, .круглые с ровными краями. Поверхность гладкая, блестящая (блеск влажный), прэфиль, слегка приподнят к центру-. Рост на картофеле обильный, края штриха волнистые. Поверхность слегка бугристая с влажным блеском. Профиль плоский. Цвет штриха и картофеля серый.

Физиологические признаки. Желатину не разжижает. Лакмусоьое молоко свертывает с с подкислением среды на 11-ые сутки, пептонизирует на 15-ые сутки.

Отношение к источникам углерода. Ассимилирует глюкозу, галактозу, лактозу, ксилозу, арабинозу, слабее — сахарозу, мальтозу.

Отношение к источникам азота.

Нитриты из нитратов не образует.