Питательная среда для культивирования продуцентов литических ферментов

(11) 507 644

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

| ( (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 20.05.74 (21) 2021244/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (51) М, Кл.

С 12 К 1/06

Государственна|й нвматет

Сввета Мнннетрав СССР не делам нзебретеннй и отаре|тнй (23) Приоритет— (43) Опубликовано25-03 76.Бюллетень № 11 (53) удК 576.8.095. .25..3 (088 8) (45) Дата опубликования описания 19.04.76

Л. Н. Шинкаренко, А, Л. Пориц, Ю. С. Вабенко и Е. Ф. Григорьев (72) Авторы изобретения

Днепропетровский ордена. Трудового Красного Знамени государственный университет им. 300-летия воссоединения

Украины с Россией (71) Заявитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОДУЦЕНТОВ

ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

0,3

0,5

0,1

0,01

Соевая мука

Глюкоза

iVHv yO3 НРОт

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для извлечения ценных биологически активных веществ с преимущественной внутриклеточной локализацией, для обработки белково-витаминных кои- а центратов, для борьбы с некоторыми патогенными микроорганизмами и для i.oëó÷åíèÿ .чистых антигенов микроорганизмов кишечной группы.

Известна питательная среда для культи- |и вирования продуцентоь литических ферментов, например Actinorngc9s гбс(Отта($ содержашая соевую муку, глюкозу, двузамешенный фосфорнокислый калий и воду.

Для получения более активнь:х ферментов ф предлагаемая питательная среда дополнительно содержит азотнокислый аммоний, хлористый кальций, хлористый магний, сернокислый цинк и сернокислое железо, при этом указанные компоненты содержатся в следу- 20 юших количествах, %:

Соевая мука 0,3«0,7

Глюкоза 0,5-0,6

Азотнокислый аммоний 0,1

Двузамешенный фосфорно- 25 кислый калий 0,01

Хлористый кальций 0,11-0,01

Хлористый магний 0,047-0,001

Хлористый марганец 0,0012-0,0001

Сернокислая медь 0,00001 6-0,000001

Сернокислый цинк 0,000017-0,000001

Сернокислое железо 0,00152-0,00001

Вода ос гальное

Продуцент вырашивае-.ся на предлагаемой питательной среде в течение трех суток при постоянной аэрации среды при 25о

28 С. Накопление фермента в культураль ной жидкости происходит без введения ин, дукторов. Культуральная жидкость после ! удаления мицелия путем центрифугирования

|при скорости вращения 6.000 об/мин в те,чение 15 мин служит исходным материалом для получения ферментного препарата.

Пример . Ферментационная среда, состава, %:

507644

Габлипа 1.

Л изируемая культура

Ю арЬ eurus

В таблице 2 приведены данные о влиянии в состав среды, на литическую активность изменения концентрации веществ, входящих получаемого ферментного препарата.

Таблица 2. одержание, %

0,1

0,3

0,5

0,7

120,0

125,0

120,0

0,9

Ск СР 0,11 м сс, 0,0012 м л, 0,047

/e8l4 0,00152 о ОЧ 0,000016 5

УлЯ )e 0,000017 эасевается маточной культурой продуцента

Actinomyces recifensis vct,r Qticu.s

2435, предварительно выращенной в течение>

2-3 суток на жидкой среде Чапека. В среду 1В вводят 8-109о посевного материала, Культивирование ведут трое суток в условиях активности аэрации и постоянном пео ремешивании среды при 25-28 С. После окончания инкубации культуральную жидкость 15 с рИ 7,9-8,9 освобождают or мицелия и неиспользованных компонентов питательной сре-, ды путем центрифугирования при скорости вращения 6000 об/мин втечение 10-15 мин, при этом культуралая жидкость содерйт М сырой литический фермент и используется в дальнейшем для его получения.

Ферментный препарат извлекают путем насыщения культуральной жидкости сернокислым аммонием до 0,4, солевой раствор ос- Ю о тавляют при 4 в течение 16-18 час для формирования осадка белка.

Затем осадок собирают фильтрованием или центрифугированием при пониженной температуре, промывают холодным ацетоном, подсушивают и растворяют в сукцинатном бу фере (pH -4,5, м-0,02), раствор белка диализуют против растворителя, обессолен о ный диализат высушивают при О пой вакуумом.

Литическую активность определяют в прозрачной куйьтуральной жидкости (активность сырого фермента) и в растворах ферментного белка следующим образом.

К 2 мл суспензия! живых клеток тесткультуры ЯОph йureus добавляют

2 мл культуральной жидкости или ферментного раствора.

Исходную плотность полученной суспензии измеряют на желтом светофильтре

ФЭК-М (не должна превышать 2,0), термостатируют прн 37 в течение 60 мин, при этом изменения мутности фиксируют через каждые 15 мин.

Степень лизиса клеток тест-культуры определяют по формуле: Ct — И . 100, где: а, а1 плотность исходной суспензии, а — плотность суспензии через 60 мин.

Об активности фермента судят по степени лизиса и его скорости.

Данные, характеризующие степень литической активности фермента-сырца, содержащегося в культуральной жидкости в результате выращивания продуцента ActinomgceS

recifenCis var (ф си3 2435 на предлагаемой среде, приведены в таблице 1.

507644

Продолжение таблицы 2

П р и м е ч а и и е. Активность фермента на предлагаемой среде принята за 100" .

Формула изобретения

Составитель А. Бражиикова Редактор А. Морозова Техред М. Левицкая Корректор Н, Зинзикова

Заказ 175 Тираж 552 Подписное

ЦНИИПИ Государ твеиного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

11303S, Москва, Ж-35, Раушская иаб., д. 4/S

Филиал ППП "Патент, г, Ужгород, ул. Гагарина, 101

Предлагаемая питательная среда для куль- р тивирования продуцентов литических ферментов по сравнению с известной повышает активность ферментного препарата более, чем в два раза, при уменьшении длительности ферментации также, примерно, в диа раза. 15

1. Питательная среда для культивирова-- QQ ния продуцентов литических ферментов, например, лсЬиОпчус04 Гисб f 9t1$LS, содержашая соевую муку, глюкозу, двузамещеи. ный фосфорнокислый калий и воду, о т л ич аюшаяс я тем, что, с цельюполу- И чеиия более активных ферментов, она дополнительно содержит азотнокислый аммоний, хлористый кальций, хлористый магний, хло» ристый марганец, сернокислук медь, серио

1 кислый цинк и сериокислое железо, при етом указанные компоненты содержатся в следуюших количествах, вес.%:

Соевая мука 0,3-0,7

Глюкоза 0,5-0,6

Азотнокислый аммоний О, 1

Двуэамещеиный фосфорнокислый калий 0,01

Хлористый кальций О, 1 1-0,01

Хлористый магний О, 047-0, 00 1

Хлористый марганец 0,0012-0,0001

Сернокислая медь 0,0000160,000001

Сернокислый цинк,0,000017-0, 000001

Сернокислое железо 0,001 52-0,00001

Вода остальное.