Штамм 300 а визр продуцент триходермина 4

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсккт

Соикалистическик

Республик (61) Дополнительное к авт. саид-ву— (22) Заявлено 04.01.73 (21) 1866398!30-15 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05,02.76. Бюллетень ¹ 5 (45) Дата опубликования описания 30.07.76 (51)М.Кл.-" С 12 К 1/00

А 01 K 15/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР, ао делам изобретений и открытии (53) УДК 576.8.06 (088.8) (72) Авторы изо 6 р етения

И. С. Федоринчик, Т. A. Тарунина, М. Г. Тютюнников и Л. Я. Рунковская

Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений Всесоюзной ордена Ленина академии сельскохозяйственных наук им. В. И. Ленина (71) Заявитель (54) ШТАММ TRICHOBERMA LIGNOBUM 300А ВИЗР—

П РОДУЦЕИТ ТРИХОДЕРМИ НА-4

Изобретение относится к области защиты растечий, а именно к штаммам микроорган измов, продуцирующих биологически активные вещества, используемые для борьбы с вредными микроорганизмами растительного и животного происхождения, в частности с фитопатогенными почвенными грибами.

Известен штамм Trichoder У-1 (Узбекский), пригодный для этих целей.

Недостатком известного штамма являются его низкие активность и жизнеопосо бность.

Цель изобретения — получение штамма

Trichoderma ligIIorum, обладающего повышенными активностью и жизнеспособностью по сравнению с известным.

Предложенный штамм является продуцентом биологически активных веществ, оказывающих губительное действие на ряд микроорганизмов, таких как HelmiIIthosporum

sativum, Verticillium dahliae, Fusarium oxysporum и ряд других.

Штамм выделен из,красноземных почв

Ферганской долины. Он хранится .в коллекции ВИЗР под № 300А и имеет следующую характеристику:

Морфолого-культуральные признаки: среда Чапек-агар (pH 5 — 6), колонии пушистые, вначале белые, на 5-й — 6-й день зеленоватосерые, с обратной стороны чашки — бледнопесочного цвета. Сусло-агар (рН 5 — 6) — колонии пушистые, вначале белые, на 5-й—

6-й день зеленовато-серые, с обратной стороны чашки — грязно-буровато-желтые. Производственная среда (агаризованная)

КССБ, меласса, азотно-кислый натрий, фосфорнокислый двузамещенный калий, сернокислыЙ магниЙ, хлористыЙ калий, микроэлементы, рН 5 — 6, колонии пушистые, вначале оелые, на 5-й — б-й день зеленова,о-серые, с обратной стороны чашки — темно-бурые.

Конидиеносцы,в виде боковых ответвлений гиф воздушного мицелия, большей частью вцльчато и тройчато разветвленные, 63 — 108 X 2,7 — 3,9 лткл, к вершине утончающиеся, бесцветные. Конечные веточки-фиалиды бутылевидные или конусовидные, слегка изогнутые, расположенные одиночно или мутовками, по 2 — 3, иногда 4, размером 8

4 — 16,5X2,7 — 4,8 лткл . Конидий верхушечные

20 яйцевидные до шаровидных 2,4 — 5,2x1,5—

3,0 лк.и, зеленые, собраны в шаровидные головки.

Физиолого-биохимические свойства. Из источников углерода усваивает глюкозу, саха25 розу, ксилозу, хуже — арабинозу, сорбит, не усваивает инозит, рамнозу.

Из источников азота использует азотнокислые натрий IH калий, сернокислый аммоний, хуже хлористый аммоний. Утилизмрует

З0 пептон и мочевину.

502026

20 г/л

60

65 Келатину не разжижает. Клетчатку и крахмал не гпдролизует. Молоко пс|птонизпрует с зоной просветления. Нитраты в ннтриты пе восстанавливает.

Антагонистические свойства — подавляет рост Heiminthosporum sativum, Verticillium

dahliae, Escherichia coli, слабо подавляет Ризаrium oxysporum.

Штамм Trichoderma lignorum ЗООА ВИЗР— продуцент триходермица-4, со средним титром сухого препарата 10 млрд. спор и 1 млрд. хламидоспор в 1 г, сохраняющих свою жизнеспособность в течение года.

Пример получения препарата триходермина-4 в лаборатории микробиометода ВИЗР.

Для приготовления препарата маточную культуру гриба Trichoderma lignorum выращ ивали в колбах на круговых, качалках при скорости вращения 240 об/мин в течение двух суток.

Маточную культуру, вносили в ферментер пз расчета 1/10 к объему питательной среды.

Куль-.пвирование гриба в ферментерах осуществляли при постоянной принудительной аэрации стерильным воздухом, расход которого устанавливали в количестве 1 — 1,5 л на

1 л питательной среды при непрерывном пвремешивании.

iB качестве,пеногасителя,использовали смесь равных количеств кашалотового и р ы б ь его жир а.

Температуру в колбах и ферментерах поддерживали в пределах 26 — 28 С.

Гриб выращивали на среде следующего соста ва;

Концентрат сульфитно-спиртовой барды КССБ (по сухому весу) 30

Мела сса (по сухому,весу) 10

Сол и: азотнокислый натрий 3 фосфорнокислый двузамещенный,калий 1 сернокислый магний 0,5 хлористый калий 0,5

Микроэлементы: (Zn, В, Мп, Cu, Fe, Мо)

КССБ, мелассу и соли растворяли в 0,5 л воды.

Мвкроэлементы (ZnSO4 7Н О вЂ” 0,2 г;

Ха В40у I OH Î вЂ” 0,001 г; МпС1 . 4Н20— — 0.002 г; CuSO4 . 5Н О вЂ” 0,01 г; FeSO4х х 7Н20 — 0,02 г; (NH4) 6Мо7 Ог4 4Н2О,— — 0,002 г) растворяли в 100 мл дистилли рованной воды; 1 мл этого раствора добавляли к основному раствору питательной среды и доводили объем раствора до 1 л.

Величину рН устана вливали 5,5.

Биомассу гриба, накопленную в течение

96 час в глубинной культуре (в ферментерах) и состоящую из мицелия, конидий и хламидоспор, отделяли центрифугированием и высушивали при температуре 40 С.

Высушенную биомассу мололи на шаровой мельнице.

Полученный продукт представляет поро25

50 шок коричневого цвета, без резкого запа;a.

Титр сухого препарата (влажность 5%) составляет 10 миллиардов спор и 1 миллиа рд хл а м идоспо р в 1 г.

Заключенные в препарате конидии, хламидоспоры и .кусочки мицелия сохраняют

100%-ную жизнеспособность в течение одного года.

Опытные партии препарата испытывали в теплицах прот ив корневой гнили и белой гнили огурцов. Препарат вносили в лунки перед посадкой растений в количестве 4 кг на 1 га.

Процент погибших и процент пораженных заболеванием растений снижался в два — три раза.

При внесении триходермина-4 урожай увеличивался на 20,9 — 26,3% в сравнении с контролем.

Формул а изобретения

Штамм Trichoderma lignorum ЗООА ВИЗР— продуцент триходермина-4.

Морфолого-культурал ьные признаки: среда

Чапек-агар (рН 5 — 6), колонии пушистыс, вначале белые, на 5-й — 6-й день зеленоватосерые, с обратной стороны чашки — бледнопесочного цвета. Сусло — агар (рН 5 — 6) колонии пушистые, вначале белые, на 5-й—

6-й день зеленовато-серые, с обратной стороны чашки — грязно-буровато-желтые.

Производственная среда (агар изорванная)

КССБ, меласса,- азотнокислый натрий, фосфориокислый двузамещенный калий, сернокислый магний, хлористый,калий, микроэлементы, рН 5 — 6, колонии пушистые, вначале белые, на 5-й — 6-й день зеленовато-серые, с обратной стороны чашки — темно-бурые.

Конидиеносцы в виде боковых ответвлений риф воздушного мицелия, большей частью вильчато и тройчато разветвленные, 63 — 108Х2,7 — 3,9 мкм к вершине утончающиеся, бесцветные. Конечные веточки-феалиды бутылевидные или конусовидные, слегка изогнутые, расположенные одиночно или мутозками,:по 2 — 3, иногда 4, размером 8,4 — 16,5Х

Х2,7 — 4,8 мкл4. Конидии верхушечные яйцевидные до шаровидных 2,4 — 5,2Х1,5 — 3,0 мкм, зеленые, собраны в шаровидные головки.

Физиолого-биохимические свойства. Из источников углерода усваивает глюкозу, сахарозу, ксилозу, хуже — арабинозу, сорбит, не усваивает инозит, рамнозу.

Из,источников азота использует азотнокислый натрий и калий, сернокислый аммоний, хуже — хлор истый аммоний. Утилизирует пептон и мочевину. 5Келатину не разжижает.

Клетчатку и крахмал не гидролизует.

Молочко пентонизирует с зоной просветления.

Нитраты,в нитриты не восстанавливает.

Антагонистические свойства — подавляет о02026

Составитель М. Дранишников

Текред Е. Подурушина Корректор И. Симкина

Редактор Т. Зенбицкая

Заказ 715/898 Изд. № 300 Тираж 551 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент» рост Helminthosporum sativum, Verticillium

dahliae, Escherichia,coli, слаоо,подавляет

Fusarium oxysporum.

Штамм Trichoderma lignorum ЗООЛ

ВИЗР— продуцент триходермина-4, со средним титром сухого препарата 10 млрд. спор и 1 млрд. хлам идоспор в 1 г, сохраняющих свою жизнеспосооность la течение одного года.