Способ очистки нуклеиновых кислот от нуклеаз, полисахаридов и фенола

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 1 502021

Союз Советских

Социалистических

Реслублик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 29.04.74 (21) 2021384, 28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 05,02.76. Бюллетень ¹ 5

Дата опубликования описания 06.04.76 (51) М. Кл 2 С 12D 13/06

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 577 155 2 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

В. П. Широбоков и Е. E. Загоруйко

Киевский ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ НУКЛЕИНОВЫХ

КИСЛОТ ОТ НУКЛЕАЗ, ПОЛИСАХАРИДОВ И ФЕНОЛА

Изобретение относится к биохимии.

Известен способ очистки нуKJIcHHQBblx кислот от нуклеаз, полисахаридов и фенола хром атогра фическим методом.

11елью изобпетения является повышение степени очистки, упрощение и ускорение процесса.

Для этого бчистку хроматографическим методом осуществляют суспензией грубодисперсного бентонита с адсорбированными на его частицах антибиотиками — аминогликозидами (мономицин, канамнцин, неомицин) с последующей отмывкой и элюцией нуклеиновых кислот;

Отмывку нуклеиновых кислот от полисахаридов и фенола осу ществляют 0,025 — 0,1 М фосфатным буфером при рН 6,0 — 65;

Элюцию .нуклеиновых кислот lIIpoBQBHT с помощью 0,05 — 0,5 М фосфатного буфера (КНаРО4 — IUaqHPO4) при рН, преимущественно равном 8,0 — 8,5.

Пример. Бентонит переводят в грубодисперсную суспензию с помощью 1 — 5 М раствора соляной кислоты.

Полученную суспензию освобождают от мелкодисперсных частиц бентонита многократным отмыванием 0,1 — 0,2 М раствором хлористого натрия с 0,05 — 0,1 М раствором фосфатного буфера (рН 6,5 — 7,2).

Хроматографичеокую колонку заполняют суспензией грубодисперсного бентонита.

Антибиотики — амнногликозиды (ферментные препараты), разведенные в 0,1 — 0,2 М растворе хлористого натрия, наносят на частицы бентонита до его насыщения.

5 Об адсорбции аминогликозидов на бентоните судят по показател|о экстинции при 280 нм.

После нанесения антибиотиков — аминогликозидов колонку отмывают 0,05 — 0,1 М раствором фосфатного буфера (рН 6,0 — 6,5) и ис10 пользуют для очистки нуклеиновых кислот.

Препарат нуклеиновых кислот разводят в

0,05 — 0,1 М фосфатном буфере (рН 6,0 — 6,5) и наносят на хроматографическую колонку.

500 тысяч единиц активности антибиотиков

15 способны адсорбировать 3,5 — 4 мг нуклеиновых кислот.

После нанесения нуклеиновых кислот колонку отмывают 0,025 — 0,1 М раствором фосфатного буфера (рН 6,0 — 6,5), удаляя из колонки

20 фенол и полисахариды.

Элюцию нуклеиновых кислот с колонки осуществляют с помощью 0,05 — 0,5 М фосфатного буфера (КН2Р04 — NB2HPO4) при рН

25 8,0 — 8,5.

Нусклеазы адсорбируются на бентоните и не попадают в очищенный препарат нуклеиновых кислот.

Регенерацию колонки осуществляют путем

30 отмывания ее 0,1 — 0,5 М раствором КН Р04 до рН вытекающей жидкости 6,0 — 6,5.

802021 "

Формула изобретения

Составитель T. Серебрянникова

Текред Е. Подурушина

Корректор Н. Аук

Редактор С. Меньшова

Заказ 604/9 Изд. ¹ 206 Тираж 55! Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

И3035, Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

1. Способ очистки нуклеиновых кислот от нуклеаз, полисахаридов и фенола хроматографическим методом, отличающийся тем, что, с целью повышения степени очистки, упрощения и ускорения процесса, очистку хроматографичеоким методом осуществляют суспензией грубодисперсного бентонита с адсорбированными íà его частицах антибиотиками — аминогликозидами (мономицин, канамицин, неомицин) с последующей отмывкой и элюцией нуклеиновых кислот.

2. Способ по п. 1, отличаю щи йся тем, что отмывку нуклеиновых кислот от полисахаридов и фенола осуществляют 0,025 — 0,1 М фосфатным буфером прн рН 6,0 — 6,5.

3. Способ по и. 1, отличающийся тем, что элюцию нуклеиновых кислот проводят с помощью 0,05 — 0,5 М фосфатного буфера

IKI-I PO4 — Ха IPO4) при рН, преимущественно равном 8,0 — 8,5.