Способ определения мочевой кислоты

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (ii) 436667 союз Советскив

Социалистических

Реслублик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 28.09.72 (21) 1831974/30-15 с присоединением заявки ¹ (32) Приоритет

Опубликовано 25.07.74. Бюллстсш, М 27

Дата опубликования описания 30.12.74 (51) М. Ь;л. А 61Ъ 10/00

Государственный комите1

Совета Министров СССР

Ilo делам иэооретениФ и открытий (д3) > Д1; 619.612.461.251 (088.8) (72) Авторы зобретения

В. В. Дюкарев, Л. И. Нечипуренко и В. М. Газдаров (71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к технике анализа азотистых веществ в экскретах животных.

Известен способ определения мочевой кислоты в крови и моче млекопитающих, включающий осаждение мочевой кислоты и ее слой в горячем растворе уксусно-кислой ртути, центрифугирование смеси, промывку осадка уратов ртути путем ресуспендирования в растворе уксусно-кислой ртути, повторное цснтрифугирование, растворение осадка уратов ртути в растворе хлористого натрия в хлорной кислоте и собственно определение мочевой кислоты путем измерения оптической плотности полученного раствора.

Предложенный способ отличается тем, что, с целью определения мочевой кислоты в помете птиц, ее извлекают из помета литиевым щелочно-солевым реагентом, отделяют нерастворимые вещества помета путем центрифугирования перед осаждением мочевой кислоты и ее солей в горячем растворе уксусно-кислой ртути. Собственно определение мочевой кислоты производят путем определения азота мочевой кислоты»о методу Кьельдаля.

Высокая плотность щелочно-солевого реа..ента (1,11 г/ему) не мешает отделению нератворимых веществ помета путем центрифугирования перед осаждением мочевой кислоты и ее солей в горячем растворе уксусно-кислой ртути, однако она одновременно уменьшает возможность осаждения конгломератов мочевой кислоты, суспендированных в недос Гаточнон жидкости, т. е. Отделение нсрастворимых веществ центрифугированием производится в градиенте плотности литиевого щелочно-солевого рсагента. Это позволяет полностью извлечь мочевую кислоту из помета, сократить время и снизить температуру теп,IoB0A обработки при растворении мочевой

10 кислоты в литиевом щелочно-солевом реагснте и, тем самым, уменьшить вероятность ее разрушения или образования из различны; пуринов помета.

Метод обеспечивает высокий выход мочсвой

15 кислоты, добавленной к помету цыплят, даже при трехкратном превьппении обычного ес содержания в помете птиц.

Для проведения анализа необходимы следующие реактивы: литиевый щелочно-солевой

20 рсагспт — раствор 1,5 и. сернокислого лития ь 1,5 н. натрисвой щелочи (60 г натриевой щелочи и 82,5 ссрнокислого лития растворяют в

1000 мл дистиллированной воды); 0,1 М раствор уксусно-кислой ртути (двухвалснтной)

25 в 5% ной уксусной кислоте; 0,01 М раствор уксусно-кислой ртути в 1%-ной уксусной кислоте; концентрированная серная кислота.

В 10-мл стеклянные центрифужные пробирки помещают по 3 г тщательно псремешанноЗ0 го помета и добавляют 6 мл литиевого щелоч436667

К промы1ому осадку уратов ртугH добавля1от 1 м.i ко.п,: нгрированной серной кислоты и ()CHäol; ко.)И1сственно иерсносят в ко Io)

1(ьсл1iда:1я,;!Ля Iei o проои1>ки дважды IIpo5 м1!ва!От. ка>кдый раз вливая в них Iio 1 мл концснтрироваш!ой серной кислоты.

Использовать большее количество серной кислоты нежелательно вследствие возникающих неудобств при последующей нейтрализа10 ции ес в аппарате Кьельдаля, Дальнейшие операции по определению =зота мочевой кислоты производят Но методу полмикрокьельдаля, используя для отгонки

I:oëoHHHó H;IH весь минерализат. Расчеты азо15 ia мочевой кислоты в помете производят общепринятым способом с учетом взятой навсски, внесенного консерванта при сборе помета и других показателей.

Для вычисления содержания мочевой кис20 лоты в помете количественные показатели азота умно>кают на коэффициент 3.

Способ определения мочевой кислоты, включающий се осаждение в горячем растворе уксусно-кислой ртути, центрифугирование раствора, ресуспендирование осадка в раство30 ре уксусно-кислой ртути, повторное центрифугировапис и собственно определение мочевой кислоты, например ilo методу:1олумикрокъельдаля, отличающийся тем, что, с целью определения мочевой кислоты в помете

35 ITHU, сс извлекают из помета литиевым щелочно-солевым реагентом, имеющим плотность

1,10 — 1,12 г/смз, и отделяют нерастворимые вещества цептрифугированисм при ускорении

»е менее 2000 g, после чего проводят собствен40 но определение мочевой кислоты.

Сост !!ill rcëâ Л. Леонов

Texpe;I 3. Тараненко

Корректор В. Кочкарева

Редактор Л. Народнаи

Згисаз 8455)14 Изд. № 87

1Ц1ИИПИ Го..:у.1срс llcllllого комитета

))o аслаки изооретенпй и

)11ос! ва, /К-:85, Ра п1с)саи

Тl)I ICãðà Фll)I, I 1 ð С;Ill у)и),); . ) 1io-соленого реаге1!.га. Пробирки выдержии;1ют

E течение 40 мин в водяной бане:!рн 61) С, содср>кимос периодически яомсl Iив!110 г o.:склянной палочкой. Затем .1робиркн охлаждают иод струей холодной воды и цснтрифугирук>г 20 мнн при 3000 oo/ìèí (2000 1 ). ПолученНЫ1! Н<1ДОСаДОК IIP03PB)II!ЫП, C OI I<8 >KO Ч, ОВатОго цвета.

Использование литиевого щелочно-солсвого реагента большей концентрации приводит к недостаточному осаждению белков и других азотсодержащих сопутствующих веществ изза высокой плотности смеси, а применение литиевого щелочно-солевого реагснта меньшей концентрации ухудшает растворимость мочевой кислоты и ее солей.

В 10-:!л стскляHíûс цеИ!ыс пробирки с 8 мл 0,1 ) 1 уксусно-кислой ртути в

5%-ной уксусной кислоте, находящиеся в слабо кипящей водяной бапс, добавляют медленно по каплям 1 мл полученного надосадка и продол>кают нагревать на кипящей водяной бане сщс 10 мин, растирая стеклянной палочкой выпавшие в осадок хлопья уратов ртути.

Это позволяет перевести в раствор сопутствуlощие вещества. Затсгм пробирки Охла>кда10т под струей холодной воды и центрифугируют !

О мин при 1500 об/мин (1000 g) Надосадок осторожно декаптируют, пробирки ставят вверх дном на фильтровальную бумагу. Полученный осадок дважды промывают раствором 0,01 М уксусно-кислой ртути в 1%-ной уксусной кислоте, каждый раз ресуспендируя его и растирая стеклянной палочкой перед центрифугированием при 1500 об/мип в течение 10 мин и удаляя надосадочную жидкость описанным способом.

При большом количестве оборотов и времени центр ифугирования частично могут осаждаться и сопутствующие вещества.

Предмет изобретения

Тира>к 482 Подписное

Совета Министров СССР отк рв1 тип наб., д. 4 5