Патент ссср 423304

(») 423304

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимый от патента (51) М. Кл, С 07К 15/00

А 61К 17/00 (22) Заявлено 05.03.71 (21) 1633022/31-16 (32) Приоритет 10.03.70 (31) 19762/70 (33) Япония

Опубликовано 05.04.74. Бюллетень № 13

Государственный коиитет

Совета Министров СССР оо делаи изобретений и открытий (53) УДК 615.45:612.433. .018(088.8) Дата опубликования описания 29.11.74 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Тейзо Хигаси, Дзинносуке Абе, Теруо Таке, Сусуми Ватанабе и Масару Отани (Япония) Иностранная фирма

«Тойо Дзозо Компани Лимитед» (Япония) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ПОЛИПЕПТИДОВ, ОБЛАДАЮЩИХ СВОЙСТВОМ

ПОНИЖАТЬ СОДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ В КРОВИ

Изобретение относится к медицине и касается способа получения полипептидов, обладающих свойством понижать содержание кальция в крови.

Известны способы получения полипептидов, обладающих свойством понижать содержание кальция в крови, из животного сырья, например щитовидной и паращитовиднойжелез млекопитающих, путем обработки смесью гидрофильного органического растворителя и воды, экстракции смесью соляной кислоты, мочевины и цисгина, добавления водного раствора хлористого натрия и ацетона с последующей очисткой и высушиванием.

Целью изобретения является расширение сырьевой базы для получения полипептидов, обладающих свойством понижать содержание кальция в крови.

По предлагаемому способу в качестве исходного сырья используют перикардиальную мембрану и(или) ткань, включающую полую вену, примыкающую к пищеводу угрей.

Пример 1. 120 г перикардиальной мембраны, полученной удалением миокардных тканей из сердца примерно 1000 угрей, обезвоживают трехкратной обработкой (по 5 час при 5 С порциями по 1 л ацетона, содержащего 20 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты.

Обезвоженный продукт обезжиривают двукратной обработкой (по 2 час при 5 С) порциями по 0,8 л хлороформа. Затем

5 еще 3 раза повторяют операцию обезвоживания и после высушивания получают 36 г препарата.

36 г получаемого таким способом препарата экстрагируют обработкой в течение 3 час при

10 комнатной температуре 1 л 0,2 н. соляной кислоты, содержащей 500 г мочевины и 18 T цисгина. Выпавший осадок отделяют центрифугированием (15 мин при 9000 об/мин), промывают 0,5 л экстрагента, присоединяя по15 следний к основному экстракту, Полученный раствор вновь центрифугируют и вливают в

250 мл 45, -ной трихлоруксусной кислоты.

Выделившийся осадок отделяют центрифугированием. Очищенный раствор лиофильно вы20 ушивают и получают 450 мг (1,8 ед/мг) неочищенного гормоноподобного вещества.

400 мг неочищенного препарата обрабатывают при перемешивании в течение 2 час 80 мл смеси бутанола, уксусной кислоты и воды

25 (12: 3: 5). Верхнип слой жидкости отделяют, очищают центрифугированием и добавляют

24 мл бутанола, 28 мл воды и 3 мл пиридина.

423304

Составитель Л. Сторчевая

Редактор Л. Жаворонкова Техред Е. Борисова Корректор T. Добровольская

Заказ 2451/14 Изд. Кз 708 Тираж 506 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-З5, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Смесь перемешивают, отделяют верхний слой бутанольный, а нижний еще 4 раза экстрагируют смесью бутанола, уксусной кислоты, воды и пиридина (6: 1: 9: 0,25), Объединенный экстракт упаривают под вакуумом, остаток обрабатывают эфиром и растворяют в 4 мл

0,2М раствором ацетата аммония (рН 4,7).

Раствор пропускают через колонку (2Q

; 80 см), заполненную сефадексом-75, и элюируют 0,2 М раствором ацетата аммония со скоростью 12 мл/час. Элюат собирают фракциями по 4 мл, причем активный препарат содержится во фракциях с 63 по 82. Эти фракции собирают, концентрируют под вакуумом и лиофильно высушивают. Получают

2,1 мг активного препарата (24 ед/мг).

Пример 2. Ткани, включающие полую вену, прилегающую к пищеводу, и перикардиальную мембрану, собранные примерно у 3000 угрей, подвергают обезвоживанию и обезжириванию, как это описано в примере 1, и получают 255 г, сухого вещества. 225 г этого вещества экстрагируют,при перемешивании в течение 2 час при комнатной температуре

2 л 0,2 н. соляной кислоты, содержащей 960 г мочевины и 35 г цистина. Экстракт вливают в

4 л смеси ацетона .и уксусной кислоты (1: 1), а затем в смесь, содержащую 56 мл 1 M paствора хлористого натрия и 6 л ацетона, и центрифугируют 15 мин, при 9000 об/мин. Освобожденный от примесей раствор вливают в

10 л эфира, не содержащего перекисных сое5 динений, перемешивают, отделяют выпавший препарат центрифугированием. После лиофильного высушивания получают 17,8 г препарата (1 ед/мг), который подвергают очистке, как в примере 1.

10 Угорь, используемый в качестве исходного сырья, предварительно выращивался в течение 10 — 17 суток в морской или аналогичной соленой воде.

Предмет изобретения

Способ получения полипептидов, обладающих свойством понижать содержание кальция в крови, из животного сырья путем обработки смесью гидрофильного органического

20 растворителя и воды, экстракции смесью соляной кислоты, мочевины и цистина, добавления водного раствора хлористого натрия и ацетона с последующей очисткой и высушиванием, отличающийся тем, что, с целью

25 расширения сырьевой базы, обработке подвергают перекардиальную мембрану и(или) ткань, включающую полую вену, примыкающу к пищеводу угрей.