Патент ссср 413188

Авторы патента:

C12P19/44 - получение O-гликозидов, например глюкозидов

C12P19/30 - нуклеотиды

4I3I8 8

Со оз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

M. Кл. С 12 d 13/00

Заявлено 31.XI I.1971 (№ 1731964/28-13) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет

Опубликовано 30.1.1974. Бюллетень ¹ 4

Дата опубликования описания 28Л .1974

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам нзооретеннй и открытий

УДK 663.18(088.8) Авторы изобретения

С. Э. Ансберга, А. М. Ирген, В. П. Каула и Р. Э. Страздыня

Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного

Знамени научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИДФОСФАТОВ И

САХАРОФОСФАТОВ

Изобретение относится к способам получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов и может быть использовано в различных областях биохимии и медицины.

Известен способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов путем биологического фосфорилирования фосфорилирующей смеси, состоящей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого магния, воды при рН 6,5 вЂ” 7,0 в присутствии биологического катализатора, с последующей очисткой продукта.

Целью изобретения является увеличение выхода и чистоты продукта, а также упрощение процесса и сокращение времени ферментации.

Достигается это тем, что в качестве биологического катализатора используют экстракт водорослей, который вводят в фосфорилирующую смесь в соотношении 1: 1 или 1,2: 1.

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве источника ферментов используют экстракт водорослей, приготовленный размельчением водорослей (в соотношении сухие водоросли против воды как 1: 3), и выдерживают при температуре 4 С 3 час. Используются водоросли вегетативного периода (созревания).

Экстракт водорослей, используемый в качестве сырья для получения нуклеозидфосфатов н сахарофосфатов, прибавляют в фосфорилирующую смесь, которая состоит из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлори5 стого калия, хлористого магния, воды при температуре 37 С и рН 6,5 вЂ” 7,0.

Соотношение экстракта водорослей и фосфорилирующей смеси 1: 1 или 1,2: 1. Реакция продолжается 0,5 вЂ” l,5 час. Для прекращения

10 реакции фосфорилирования используют 10%ный раствор трихлоруксусной кислоты при вЂ” 7 С, взятой в объеме 25 мл на 200 мг аденозина.

Для осаждения нуклеозидфосфатов приме15 няют метиловый спирт или этиловый спирт в 7 вЂ” 10-кратном объеме. Очистку нуклеозидов осуществляют путем ионообменной хроматографии.

Применение экстракта водорослей взамен

20 дрожжей как источника ферментов качественно и принципиально улучшает способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов.

П р и м ер 1. 200 мг аденозина растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют

25 ih a>HPO4 12Н20 (натрий фосфорнокислый двухзамещенный) и КНеРО, (калий фосфорнокислый однозамещенный) в весовых соотношениях 3,5%: 1%. Затем вносят 0,014 г КС1, 0,14 r MgC12 6Н20 и 9,5 мл экстракта зеленых

Зо водорослей.

413188

Предмет изобретения

Составитель М. Ларина

Редактор Н. Спиридонова Техред 3. Тараненко Корректор Т. Хворова

Заказ 1157/9 Изд, № 1205 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва 5Ê-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Время ферментации 0,5 вЂ” 1,5 час при температуре 37 С и рН 6,5 вЂ” 7,0. Для прекращения реакции прибавляют 1 г трихлоруксусной кислоты при 0 С. Раствор центрифугируют. К фильтрату прибавляют 10-кратный объем метилового спирта, а осадок разделяют на ионообменной колонке.

Выход: 0,176 г 96о/о АТФ (аденинтрифосфорная кислота).

Пример 2. 200 мг аденозин-5-монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют ХазНР04 ° 12НзО и КНзРО4 в весовых соотношениях 2,5 /о . .0,7 /в. Затем добавляют 0,014 г КСI, 0,014 г MgC1 .6ÍðO и

9,5 мл экстракта зеленых водорослей.

Процесс далее ведется аналогично примеру 1

Выход: 0,18 г 95% АТФ.

Пример. 3 200 мг гуанозин-5-монофосфорной кислоты растворяют в 7,6 мл воды. К раствору прибавляют ИазНР04 ° 12НзО и КНзРО4 в весовых соотношениях 2,5 .0,7%. Затем добавляют 0,014 r КСI, 0,014 г МдС1з 6НзО и 95 мл экстракта зеленых водорослей.

Далее вЂ” аналогично примеру 1.

Выход: 0,12 г 90% ГТФ; 0,13 г 90 ГТФ.

Пример 4. К 54 г сахара прибавляют

16,5 г фосфорнокислых солей, 300 мл воды, 400 мл экстракта водорослей.

Раствор перемешивают 2 вЂ” 3 мин, затем выдерживают в течение 15 мин при температуре

36 вЂ” 37 С.

Время ферментации 0,5 вЂ” 1,5 час. Процесс прекращают прибавлением 25 мл50%-ногораствора трихлоруксусной кислоты. Центрифугируют. К центрифугату добавляют 21 г

Ва (СНзСООН) з и насыщенный раствор

Ва(ОН) з до слабо-розового окрашивания по фенол-фталеину. Реакционную смесь центрифугируют.

Бариевую соль дифосфата фруктозы промы10 вают один раз 50%-ным спиртом и один раз

96о/о-ным спиртом. Сушат в вакуумном эксикаторе.

Выход: 53 г бариевой соли 1,6-дифосфата фруктозы.

1. Способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов путем биологического фосфо20 рилирования фосфорилирующей смеси, состоящей из сахара, аденозина, нуклеозидов или нуклеозидмонофосфатов, неорганических фосфатов, хлористого калия, хлористого магния, воды при рН 6,5 вЂ” 7,0 в присутствии биологи25 ческого катализатора, с последующей очисткой продукта, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, а также увеличения выхода и чистоты продукта, в качестве биологического катализатора ис30 пользуют экстракт водорослей.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что экстракт водорослей вводят в фосфорилируюгцую смесь в соотношении 1: 1 или 1,2: 1.

Способ лечения инфекционных болезней, вызванных грамположительнымн бактериями // 180754

Патент 378410 // 378410

Способ получения высокодейтерированных нуклеозидов и нуклеотидов // 2107098

Олигонуклеотидный праймер, пара праймеров, набор праймеров (варианты), способ их изготовления для амплификации нуклеиновой кислоты вич-1 // 2186112

Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано для обнаружения вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1)

Пара синтетических олигонуклеотидов-праймеров, используемых для выявления днк вируса простого герпеса человека 6 типа // 2193067

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии, и может быть использовано для идентификации ДНК вируса герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6)

Способ выявления fusobacterium necrophorum в гнездовой полимеразной цепной реакции // 2203951

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к генетической инженерии животных, и может быть использовано в ветеринарной микробиологии для выявления возбудителя некробактериоза жвачных животных Fusobacterium necrophorum и дифференциации его от атипичных форм Fusobacterium pseudonecrophorum и другой микрофлоры

Способ диагностики хламидийной инфекции (варианты) // 2205876

Изобретение относится к биотехнологии, биологии, медицине и ветеринарии

Набор олигонуклеотидов-праймеров для идентификации рнк вируса крымской-конго геморрагической лихорадки // 2209830

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицине для выявления генетического материала вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ) в пробах

Способ получения инозина и 5'-инозиновой кислоты, штамм escherichia coli - продуцент инозина // 2244003

Изобретение относится к биотехнологии; инозин, а также 5`-инозиновую кислоту получают с использованием бактерий Escherichia coli, при этом продукция инозина указанными бактериями увеличена за счет увеличения активности белка, кодируемого геном yijE

Способ получения инозина и 5'-инозиновой кислоты, штамм escherichia coli - продуцент инозина // 2244004

Изобретение относится к биотехнологии

Способ получения инозина и 5'-инозиновой кислоты методом ферментации с использованием бактерий, принадлежащих к роду escherichia // 2271391

Изобретение относится к биотехнологии

Способ выделения внеклеточных дезоксирибонуклеиновых кислот из крови // 2372405

Изобретение относится к области клинической биохимии и касается способа выделения внеклеточных ДНК (внДНК) из крови

Способ получения производных лактозамина, производное лактозамина, полученное указанным способом, способ получения соединений levis-x и их производных при использовании указанных производных лактозамина // 2135585

Способ получения производных стероидных гликозидов ruscus aculeatus методом ферментативного гидролиза // 2249042

Изобретение относится к способу получения производных стероидных гликозидов Ruscus aculeatus (рускосапонинов)

Способ получения производных стероидных гликозидов ruscus aculeatus // 2249043

Изобретение относится к способу получения производных стероидных гликозидов Ruscus aculeatus (рускосапонинов)

Способ получения нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов // 436084

Способ получения мальтобионата // 2495130

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности. Способ получения мальтобионата предусматривает получение субстрата, применяемого в процессе получения сусла или затора и содержащего мальтозу; и превращение мальтозы в мальтобионат посредством реакции, катализируемой карбогидратоксидазой, например карбогидратоксидазой из Microdochium nivale CBS 100236. При этом мальтобионат образуют на стадии затирания в процессе производства пива. Изобретение обеспечивает 80-100% конверсию мальтозы в субстрате в мальтобионат. 5 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.

Структуры сахаридов и способы получения и применения таких структур // 2538973

Настоящее изобретение относится к олигосахаридам для синтеза сахаров, а также способу их получения, где олигосахариды содержат фрагмент: причем тетрасахарид включает X1, гексасахарид включает X1, X2, октасахарид включает X1, X2, X3, декасахарид включает X1, X2, X3, X4, додекасахарид включает X1, X2, X3, X4; X1-X4 представляют собой: или где R8 представляет собой водород или алкил; R1 - R2, R5 - R7 представляют собой защитные группы. В предложенном способе присоединяют структуры: илик структуреили где R1 - R10 представляют собой защитные группы. Предложены новые олигосахариды и способы их получения для промышленного использования. 4 н. и 78 з.п. ф-лы, 18 ил., 2 табл., 7 пр.

Способ получения гликозидов акрилатных производных с применением сахаридов и гликозидаз // 2575609

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения этиленово-ненасыщенного гликозида формулы I где n, A, X, R3 и R4 имеют значения, приведенные в формуле. Гликозид формулы I получают реакцией этиленово-ненасыщенного спирта формулы II с сахаридом формулы III в присутствии β-глюкозидазы. При этом молярное соотношение этиленово-ненасыщенного спирта формулы II к сахариду формулы III составляет от 2:1 до 30:1. Реакцию проводят в присутствии смеси растворителей, состоящей из воды и 1,4-диоксана. Весовое соотношение воды и 1,4-диоксана составляет от 0,1:1 до 9:1. Весовое соотношение смеси растворителей к сахариду составляет от 3:1 до 30:1. Изобретение позволяет увеличить выход этиленово-ненасыщенного гликозида после определенного времени протекания реакции и/или при установлении равновесия. 2 з.п. ф-лы, 3 пр.

Клетки и способ для получения рамнолипидов // 2619877

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Представлена бактериальная клетка, которая способна образовывать по меньшей мере один рамнолипид и генетически модифицированная таким образом, что по сравнению с ее диким типом она имеет повышенную активность двух ферментов Е1 и Е2 или трех ферментов Е1, Е2 и Е3 и по меньшей мере одного фермента Е8, который катализирует экспорт рамнолипидов из клетки в окружающую среду, при этом фермент Е1 способен катализировать превращение 3-гидроксиалканоил-АСР через 3-гидроксиалканоил-3-гидроксиалкановую кислоту АСР в гидроксиалканоил-3-гидроксиалкановую кислоту, фермент Е2 представляет собой рамнозилтрансферазу I, а фермент Е3 – рамнозилтрансферазу II. Представлен способ получения рамнолипидов с использованием указанной клетки. Группа изобретений позволяет повысить образование рамнолипидов. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 5 табл., 3 ил., 28 пр.