Способ получения анти-анти-а антисыворотки для диагностики гемолитической болезни новорожденных
Союз Советских
Социалистических
Республик
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
+Ъй .1 вр it „,)б---=- -"
Зависимое от авт. свидетельства _#_
М. Кл. 6 01п 33/16
Заявлено 14. т/1.1971 (№ 1670775/31-16) с присоединением заявки,"А—
Приоритет—
Оп1.бликовано 18.1Ъ 1973. Бюллетень .",: 19
Нонитет по делан изобретений и открытий ори Совете Министров
СССР
УДК 615.373.34 (088,8) Дата опублпксвания о пнсацпгя 13ХП.1973
Авторы изобретения
С. E. Тукачинский, К. Н. Климова, Е. И. Турченко, В. П. Моисеева и Г. А. Пожидаева -" -- "-" - йоши.) К а .:, я е
Ордена Трудового Красного Знамени Ленинградский науч го. "" " - Ìli с :й исследовательский институт гематологии и переливания крЬви: " : ° .4Ñ, +gal
Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИ-АНТИ-А АНТИСЫВОРОТКИ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ НОВОРОЖДЕННЫХ
ПО СИСТЕМЕ АВО
Изобретение от носится к медицине, точнее, к способам получения а нтн-анти-А антисьвворотки для диагн оспи ки гемолитической болезни новарождвниых по системе АВО.
Известен опасоб получения анти-анти-А
BHTHcbIBopoTl(H путем лммунизац ии кроликов глобулином, оадержащим а нпи-А антитела, и удалением гетероагглютин и нав полученной анти сыво ротки адеарбцией групповыми веществагми эритроцитов А, О и В I"pyilllII.
При таком способе процесс получения а нти-BiHTH-А антисыворотки очень сложен и относителыно низок гиту специфических а нтител при,выеоаком типре гетероагглютининов.
Цель предлагаемого изобретения — упростить спо соб получения а нписываропки и .повысить ее активность и опецифич ность.
Поставленная цель достигается тем, что иммунизацию кроликов провгадят >введением т G — глобулиновой фракции и адсорбцией гетероагглютинино в cTрамой эритроцитов.
Для полу чения àlíтисыворопки на кроли,(ах в качестве антигена используют гагмма-gготобулино вую фракцию, выделенную из сыво рот ки к ро ви женщин пру ппы 0(1), сенсиби;IlH3Hipl0lB2iHIIbIx беременностью .к групповому вещеспву А.
Выделение гамма-g-глобулина проводят методам ионообменной xpo laTol;payHH на
ДЗАЭ вЂ” сефадексе А-50 в натр ийфосфапном буфере 0,02 МрН вЂ” 6,6 с последующим лпофилыны м высуши варием.
При этих условиях значительно у величивается содержа ние иммунных анпи-А а нтител
5 на мг. белка. Перед иммунизацией приготавливают 1% раствор га мма-глобулина на физиолопичеоком распворе.
Титр специфических а нпи-А антител в 1% растваре гамма-глобули на составляет 1: 128
10 до 1: 156.
Для инммунизации берут кроликов весом
2 — 2,5 кг. Перед иммунизацией кроликам .вводят внутримышечно по обе стороны от средней ли нии жнвота по 2 лл полный стимулятор иммунотенеза Фрей нда, состоящий из вазелпнового масла и ланолина (2; 1) и убитой туберкулезной палочки с доба вленивм 1% раствораа и м муннс|го анти-А гаем ма-гл обули н а в количестве 1 вес. ч, 20
1% распвор имму н ного гамма- глобул1ина вводят внутривенно в краевую вену уха кролика;в объеме 2 л л. Иммунизацию п роводят в 1 цикл 3 д ня по дряд с перерывом 4 дня
iB течение трех недель. Через 8 дней после последнего в ведения антигена животных тоталь но обеcKIpoBJllHIB3%T и после отстаивания кроiB и они|мают сывнаропку. Полученную иммунную сыворотку прогневают в течение часа при
30 56 С.
378766
Предмет изобретения
Составитель С. Щенева
Текред Т. Миронова Корректор H. Прокуратова
Редактор А. Морозова
Заказ 341/1083 Изд. Ке 477 Тираж 755 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прп Совете Министров СССР
Москва, )K-35, Раушскаи наб., д. 4/5
Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»
Для удаления гетероагглютинино)в праводят однократную адсорбцию иммунной а нтисыворотки эритроцита р ной спромой человека гр|уппы О, А и В. Сирому получают нз тщателино опмытых эритроцитов путем IHIIIOTQBlHчеакого гемолиза по методу Dodge, Mitchell, Henahon.
Плотно отцентрифу ги рова н ная строма почти не содержит гемоглобина и BHllnlcbIIBopотка после адсорбции стромой не окраши вается а красный цвет. Титр специфических антител пол учен ной антисыворотки в результате адсорбции стромой анижается лишь незначительно.
После добавления мертиолата в,KQIHUeHTipaции 1:8000, а нтисыворотку разливают в ампулы по 1 — 2 мл, и хранят в замороженном состоянии при — 4 С.
С помощью получен ной анти-ашанти-А антисыворотки з начителыно облегчается обнаружение фиксирова н ных а нти-А-а нтител на эрнтроцитах Holaорожденного.
Способ получения анти-а нти-A а нтисыворогки для диагностики гемолитической болезИ ни новорожденных по системе АВО путем иммунизации кроликов глобулином, содержащим
BIH7H-А антитела, и удаления гетероагглютинпно в анти сыворотки адсорбцией групповыми веществами, отличающийся тем, что, с целью
15 упрощения способа и повышения активности и опецифич ности антисыворотки, иммунизацию проводят введением т G — глобулиновой фракции и адсорбцией гетероагглютининов стромой эритроцитов.
