Способ получения алкалоидов спорыньи
ОЛИСАНИЕ
ИЗОЬГЕт ЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
2%458
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимый от патента ¹
МПК С 12d 13/00
Заявлено 21.11.1969 (М 1313534/31-16)
Приоритет 26.11.1968, № 13195 А/68, Италия
Комитет по репам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
УДК 615.45:615.711.7 (088.8) Опубликовано 06.1.1971. Бюллетень № 3
Дата опубликования описания 10.111.1971
Авторы изобретения
Иностранцы
Альба Мария Амики, Анаклето Мингенетти и Келестино Спалла (Италия) Иностранная фирма
«Сосиета Фармацеутики Италия> (Италия) Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ СПОРЫНЬИ
Изобретение относится к области медицины и, в частности, касается получения алкалоидов спорыньи.
Известен способ получения алкалоидов спорыньи, например аргокорнина и эргозина, путем глубинной ферментации культуры рода
Claviceps в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при температуре до 30 С и кислой среде с последующим выделением целевого продукта.
Предложенный способ характеризуется использованием штамма Claviceps purpurea
F. L. 43/14. Культура образует колонии более или менее извитых гифов толщиной 3 — 4 мк.
Гифы разветвлены слабо; некоторые ответвления поднимаются.
Надземные гифы, контактируя с воздухом, могут образовывать конидии. Однако в большинстве сред они отсутствуют. Мицелий погруженных в воду культур имеет вид пучков гифов, состоящих из очень неравномерных клеток толщиной от 3 до 10 мк. Когда клетки набухают и становятся округленными, гифы выглядят подобно нитке бус и могут образовывать конидии.
Штамм Claviceps purpurea F. L. 43/14 культивируют в жидкой среде глубинным методом в течение 10 — 16 суток в условиях аэрации при 20 — 30 С, преимущественнно 24 С, и рН
3,5 — 6. В качестве источника углерода можно использовать глюкозу, сахарозу, маннит, сорбит, глицерин, лимонную кислоту, янтарную кислоту; в качестве источника азота — аммиак, аспарагин, пептон, казеин, продукты гидролиза (гидролизаты) и соли аммония, такие, как сульфат аммония, хлорид аммония и другие, минеральные соли — хлориды, фосфаты, сульфаты, магний, железо, цинк, мар1О ганец, калий.
Пример 1. Исходную культуру, выращенную на питательной среде С,4М (содержит 40 г глюкозы, растительного жидкого экстракта 1 г (iilH4)g НР04 5 г, КзНРО4 l г, 15 МдЯ04 7Н О 2,5 г КС1 0,5 г, FeSO4 ° 7Н О
10 мг, 7llSO4 7Н О 10»г, агара 18 г, дистиллированную воду до 1000 слтз), переносят на скошенный агар той же питательной среды, пнкубируют 10 дней при 28 С, и полученную
20 культуру используют для инокуляции двух колб емкостью до 300 смз.
Каждая колба содержит 50 смз питательной среды следующего состава: 1-аспарагин
25 10 г, КеНРО4 0,5 г, MgSO4 7НзО 0,3 г, дрожжевой экстракт 0,1 г, FeSO4.7H O 7 мг, ZnSO4 7НзО 6 мг, сахароза 100 г, дистиллированную воду до 1000 смз. Добавляют гидрат окиси натрия до рН 5,2. Колбы инкубиру30 ют в течение 5 дней при 24 С и постоянном
291458
Составитель В. А. Муравьева
Техред Л. В. Куклина Корректор О. М. Кевалева
Редактор Т. Фадеева
Изд. № 114 Заказ 426712 Тираж 473 Подписное
Ц1-1ИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, 7x(-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 встряхивании. 10% полученных культур используют для инокуляции колб емкостью
300 сл1>, содержащих 50 сма среды 668 следующего сотава: сахароза 60 г, глицерин 60 с.ча, глюкоза 80 г, дрожжевой экстракт 0,1 г, лимонная кислота 15 г, КС1 0,125 г и дистиллированная вода до 1000 сма; рН 6,2. Культуру инкубируют 12 — 14дней и получают950 у/сма смеси алкалоидов, включающих 45% эргозина и 55 эргокорнина. Далее смешивают и фильтруют содержимое 120 колб, включающих от 950 до 1100 у/сма смеси алкалоидов.
Фильтрат и мицелий экстрагируют отдельно.
Фильтрат, объем которого доводится до 5 л при рН 9, дважды экстрагируют, каждый раз путем добавления 3 л хлороформа. Л!ицелий разбавляют 50%-ным водным раствором ацетона, содержащим 20% винной кислоты, и фильтруют. К фильтрату добавляют карбонат натрия до рН 9, и затем фильтрат трижды экстрагируют хлороформом.
Экстракты смешивают и выпаривают в вакууме при 20 — 30 С до 1,5 части от первоначального объема, после чего экстрагируют
2%-ным раствором винной кислоты. Полученный раствор подщелачивают до рН 9 и экстрагируют хлороформом, экстракт выпаривают и осаждают сырой продукт добавлением гексана. Сырой продукт высушивают, затем растворяют в небольшом объеме хлороформа и пропускают через колонку, наполненную
400 г силикагеля. При элюировании хлоро5 формом получают фракцию, содержащую эргокорнин, которая высушив ается при обычныхых условиях.
Остаток растворяют в бензоле в соотношении 1 — 20, концентрируют до получения /<
1п части исходного объема, выдерживают одну ночь при 5 С и получают 2,5 г эргокорнина, который перекристаллизовывают из метилового спирта. Проводят элюирование полученного продукта, пропуская через колонку с
15 двуокисью кремния, хлороформом и 4 g метанола, и получают втору1о фракцию, содержащую 2,1 г эргозина.
Предмет изобретения
20 Способ получения алкалоидов спорыньи, например эргокорнипа и эргозина, путем глубинной ферментации культуры рода Claviceps в аэробных условиях па питательной среде, содержащей источники углерода, азота и мине25 ральные соли, при температуре до 30 С и кислой среде с последующим выделением целевого продукта, отличагощийся тем, что используют штамм Claviceps purpurea F. 1. 43/14.
