Способы лечения рака
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении рака молочной железы (РМЖ). Способ по изобретению включает введение субъекту, страдающему РМЖ, который устойчив к лекарственным препаратам и имеет мутантный рецептор эстрогенов альфа, терапевтически эффективного количества комбинации палбоциклиба и RAD1901. Использование изобретения позволяет достичь ингибирования роста и регрессии опухоли за счет синергического эффекта комбинации. 14 з.п. ф-лы, 14 табл., 39 ил., 5 пр.
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки США №62/154,699, поданной 29 апреля 2015 года, предварительной заявки США №62/155,451, поданной 30 апреля 2015 года, предварительной заявки США №62/252,085, поданной 6 ноября 2015, предварительной заявки США №62/265,696, поданной 10 декабря 2015 года, предварительной заявки США №62/158,469, поданной 7 мая 2015, предварительной заявки США №62/252,916, поданной 9 ноября 2015 года, предварительной заявки США №62/265,774, поданной 10 декабря 2015 года, предварительной заявки США №62/192,940, поданной 15 июля 2015 года, предварительной заявки США №62/265,658, поданной 10 декабря 2015 года, предварительной заявки США №62/323,572, поданной 15 апреля 2016 года, предварительной заявки США №62/192,944, поданной 15 июля 2015 года, предварительной заявки США №62/265,663, поданной 10 декабря 2015 года, и предварительной заявки США №62/323,576, поданной 15 апреля 2016 года, каждая из которых полностью включена в настоящую заявку посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] Рак молочной железы подразделяют на три подтипа на основании экспрессии трех рецепторов: рецептора эстрогенов (estrogen receptor, ER), рецептора прогестеронов (progesterone receptor, PR) и рецептора эпидермального фактора роста-2 человека (human epidermal growth factor receptor-2, Her2). Сверхэкспрессия ER обнаружена у многих пациентов, страдающих от рака молочной железы. На ER-положительные (ER+) варианты рака молочной железы приходится две трети всех вариантов рака молочной железы. Помимо рака молочной железы эстроген и ER связаны, например, с раком яичников, раком толстой кишки, раком предстательной железы и раком эндометрия.
[0003] ER могут активироваться эстрогеном и транслоцироваться в ядро для связывания с ДНК, посредством чего регулируется активность различных генов. См., например, публикации Marino et al., "Estrogen Signaling Multiple Pathways to Impact Gene Transcription," Curr. Genomics 7(8): 497-508 (2006); и Heldring et al., "Estrogen Receptors: How Do They Signal and What Are Their Targets," Physiol. Rev. 87(3): 905-931 (2007).
[0004] Средства, которые ингибируют выработку эстрогена, такие как ингибиторы ароматазы (ИА, например, летрозол, анастрозол и аромазин), или которые блокируют непосредственно активность ER, такие как селективные модуляторы рецептора эстрогенов (СМРЭ, например, тамоксифен, торемифен, дролоксифен, идоксифен, ралоксифен, лазофоксифен, арзоксифен, мипроксифен, левормелоксифен и ЕМ-652 (SCH 57068)) и селективные супрессоры рецептора эстрогенов (ССРЭ, например, фулвестрант, TAS-108 (SR16234), ZK191703, RU58668, GDC-0810 (ARN-810), GW5638/DPC974, SRN-927, ICI182782 и AZD9496), ранее применялись для лечения ER-положительных вариантов рака молочной железы либо разрабатываются для данных целей.
[0005] СМРЭ (например, тамоксифен) и ИА часто применяют в качестве системной адъювантной терапии первой линии для ER-положительного рака молочной железы. Тамоксифен широко применяется для лечения ER-положительного рака молочной железы. ИА подавляют наработку эстрогена в периферических тканях посредством блокирования активности ароматазы, которая в организме превращает андроген в эстроген. Однако ИА не могут остановить выработку эстрогена яичниками. Таким образом, ИА применяют, главным образом, для лечения женщин в постменопаузальном периоде. Более того, поскольку ИА являются гораздо более эффективными, чем тамоксифен, и характеризуются меньшим количеством серьезных побочных эффектов, ИА можно также применять для лечения женщин в пременопаузальном периоде с подавленной функцией яичников. См., например, публикацию Francis et al., "Adjuvant Ovarian Suppression in Premenopausal Breast Cancer," N. Engl. J. Med., 372:436-446 (2015).
[0006] В то время как начальное лечение данными средствами может быть успешным, у многих пациентов в конечном итоге случается рецидив устойчивых к лекарственным препаратам вариантов рака молочной железы. Мутации, поражающие ER, были признаны одним из потенциальных механизмов развития такой устойчивости. См., например, публикацию Robinson et al., "Activating ESR1 mutations in hormone-resistant metastatic breast cancer," Nat Genet. 45:1446-51 (2013). Мутации в лиганд-связывающем домене (ЛСД) ER обнаружены в 21% образцов метастазирующей ER-положительной опухоли молочной железы от пациентов, проходивших по меньшей мере один курс эндокринного лечения. Jeselsohn, et al., "ESR1 mutations - a mechanism for acquired endocrine resistance in breast cancer," Nat. Rev. Clin. Oncol., 12:573-83 (2015).
[0007] На сегодняшний день фулвестрант является единственным ССРЭ, одобренным для лечения ER-положительных метастазирующих вариантов рака молочной железы с прогрессированием заболевания после антиэстрогеновой терапии. Несмотря на клиническую эффективность данного средства, практическая ценность фулвестранта ограничена количеством лекарственного препарата, которое можно ввести за одну инъекцию, а также сниженной биодоступностью. Визуализирующие методы исследования с применением позитронно-эмиссионной томографии на основе 18F-фторэстрадиола (ФЭС-ПЭТ) свидетельствуют о том, что даже при дозировке 500 мг у некоторых пациентов не достигается полное ингибирование ER, и недостаточное введение доз может стать причиной неудачной терапии.
[0008] Другой проблемой, связанной с направленными на эстроген вариантами терапии, является то, что такие варианты терапии могут оказывать нежелательное воздействие на матку, кости и другие ткани. ER направляет транскрипцию эстроген-чувствительных генов в широком спектре типов тканей и клеток. Данные эффекты могут быть в особенности выраженными в виде эндогенных уровней эстрогена и других гормонов яичников, которые снижаются в течение менопаузы. Например, тамоксифен может вызывать истончение костей у женщин в пременопаузальном периоде и увеличивать риск рака эндометрия, поскольку данное средство выступает в качестве частичного агониста в отношении эндометрия. У женщин в постменопаузальном периоде лечение с помощью ИА может вызывать более серьезную атрофию костной ткани и большее количество переломов костей, чем в случае применения тамоксифена. Пациенты, которые получали лечение фулвестрантом, также подвержены риску развития остеопороза в связи с механизмом действия данного средства.
[0009] Сообщалось, что регуляторы клеточного цикла, такие как циклины и циклин-зависимые киназы (cyclin-dependent kinases, CDK), оказывают воздейсвтие на экспрессию ER. Lamb et al., "Cell cycle regulators cyclin D1 and CDK4/6 have estrogen receptor-dependent divergent functions in breast cancer migration and stem cell-like activity," Cell Cycle 12(15): 2384-2394 (2013). Селективные ингибиторы CDK4/6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) обеспечили возможность нацеливания на типы опухолей, в которых CDK4/6 принадлежит ключевая роль в переходе от фазы G1 к фазе S клеточного цикла с улучшенной эффективностью и меньшим количеством нежелательных эффектов в отношении нормальных клеток. Публикация et al., "Treating cancer with selective inhibitors CDK4/6," Nat. Rev. Clin. Oncol. (2016), опубликована онлайн 31 марта 2016 года (http://www.nature.com/nrclinonc/journal/vaop/ncurrent/full/nrclinonc.2016.26.html). Селективные ингибиторы CDK4/6 продемонстрировали наилучшие ответы при исследовании в комбинации с эндокринной терапией у пациентов, страдающих от ER-положительного рака молочной железы.
[0010] Палбоциклиб в комбинации с ингибитором ароматазы летрозолом (исследование PALoMA-1/TRIO 18) был одобрен для лечения запущенного рецептор гормона (hormone receptor, HR)-положительного (HR+), HER2-oтpицaтeльнoгo (HER2-) рака молочной железы в качестве начальной эндокринной терапии у женщин в постменопаузальном периоде в феврале 2015 года. В феврале 2016 года палбоциклиб в комбинации с ССРЭ фулвестрантом (исследование PALOMA-3) был одобрен для лечения пациентов, страдающих от запущенного или метастатического ER+, HER2- рака молочной железы, который прогрессировал при предшествующей эндокринной терапии. FDA (Food and Drug Administration, Управление США по контролю над продуктами питания и лекарственными средствами) присвоило передовой терапии ингибитором CDK4/6 абемациклибом (LY2835219) обозначение монотерапии для трудно лечившихся ранее пациентов, страдающих от трудно поддающегося лечению запущенного HR-положительного рака молочной железы, на основании данных исследования I фазы (исследование JPBA). На сегодняшний день разрабатываются дополнительные комбинации селективных ингибиторов CDK4/6 (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба) с вариантами эндокринной терапии (например, ИА, СМРЭ и ССРЭ).
[0011] Однако ингибиторы CDK4/6 являются токсичными, вследствие чего может возникнуть необходимость в перерывах в терапии (). Более того, сохраняется потребность в более долговременных и эффективных вариантах терапии, нацеленных на ER, которые могут преодолеть проблемы, связанные с применяемыми на сегодняшний день вариантами эндокринной терапии, одновременно обеспечивая дополнительную пользу за счет сочетания с ингибиторами CDK4/6 для борьбы с раком на запущенной стадии и/или с устойчивостью к предшествующим вариантам лечения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ И ТАБЛИЦ
[0012] Фигура 1. Комбинация RAD1901 и палбоциклиба продемонстрировала улучшенное ингибирование роста опухоли (ИРО) по сравнению с монотерапией RAD1901 на различных полученных от пациента ксенотрансплантатных (patient-derived xenograft, PDx) моделях вне зависимости от статуса ESR1 и предшествующей эндокринной терапии. Показан процент ИРО на PDx моделях, получавших лечение RAD1901 в монотерапии или в комбинации с палбоциклибом.
[0013] Фигуры 2А-С. Комбинация RAD1901 и палбоциклиба продемонстрировала ингибирование роста и регрессию опухоли на ксенотрансплантатных моделях MCF-7 с ERα дикого типа (ДТ) (PR+, HER2-). (А): Рост опухоли ксенотрансплантатных моделей MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем, палбоциклибом (45 мг/кг, р.о. (п.о., перорально), q.d. (о.р.д., один раз в день), фулвестрантом (3 мг/дозу, s.c. (п.к., подкожно), qwk (о.р.н., один раз в неделю)), комбинацией фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.), RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.). Однофакторный дисперсионный анализ ANOVA, «НЗ» означает «не значимо», *р-значение<0,05, и ***p-значение<0,001; (В): Изменение объема индивидуальной опухоли по сравнению с исходным уровнем до окончания исследования ксенотрансплантатных моделей MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем, палбоциклибом (45 мг/кг, п.о., о.р.д.), фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), комбинацией фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.), RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинациями RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.) (С): Рост опухоли ксенотрансплантатных моделей MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем, палбоциклибом (45 мг/кг, п.о., о.р.д.), фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), комбинацией фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.), RAD1901 (30 или 60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (30 или 60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.).
[0014] Фигуры 3А-В. Комбинация RAD1901 и палбоциклиба продемонстрировала ингибирование роста опухоли и регрессию опухоли на PDx-11 моделях с ERα ДТ (PR+, Неr2+, ранее получавшие лечение ингибитором ароматазы, фулвестрантом и химиотерапией). (А): Рост опухоли PDx-11 моделей, получавших лечение контролем - наполнителем, фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), палбоциклибом (45 мг/кг, п.о., о.р.д.), RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.); (В): Изменение объема индивидуальной опухоли по сравнению с исходным уровнем до окончания исследования на моделях PDx-11, получавших лечение контролем - наполнителем, фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.). n=8-10/группу.
[0015] Фигуры 4А-В. Комбинация RAD1901 и палбоциклиба продемонстрировала ингибирование роста опухоли и регрессию опухоли на PDx-2 моделях с ER+ДТ (PR+, Неr2+, не получавшие лечения). (А) Рост опухоли PDx-2 моделей, получавших лечение контролем - наполнителем, RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.), фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.) и комбинацией RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.). (В): Рост опухоли PDx-2 моделей, получавших лечение контролем - наполнителем, палбоциклибом (75 мг/кг, п.о., о.р.д.), RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.). n=8-10/группу.
[0016] Фигура 5. Эффективность RAD1901 сохранялась в течение по меньшей мере двух месяцев после окончания лечения RAD1901, в то время как лечение эстрадиолом продолжали, на PDx-4 моделях с ERα ДТ (PR+, Неr2+, не получавшие лечения).
[0017] Фигуры 6А-С. Комбинация RAD1901 и палбоциклиба продемонстрировала ингибирование роста опухоли на PDx-5 моделях с мутантным (Y537S) ERα (PR+, Неr2+, ранее получали лечение ингибиторами ароматазы). (А): Рост опухоли PDx-5 моделей, получавших лечение контролем - наполнителем, фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.), палбоциклибом (75 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.); (В): Изменение объема индивидуальной опухоли по сравнению с исходным уровнем до дня 17 для фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинации RAD1901 (60, 120 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.); и (С): Изменение объема индивидуальной опухоли по сравнению с исходным уровнем до дня 56 для палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.), RAD1901 (60, 120 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинации RAD1901 (60, 120 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.). n=8-10/группу.
[0018] Фигуры 7А-В. Комбинация RAD1901 и палбоциклиба продемонстрировала ингибирование роста опухоли на PDx-5 моделях с мутантным (Y537S) ERα (PR+, Неr2+, ранее получавшие лечение ингибиторами ароматазы). (А): Рост опухоли PDx-5 моделей, получавших лечение контролем - наполнителем, фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), RAD1901 (60 мг/кг п.о., о.р.д.), палбоциклибом (п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (п.о., о.р.д.); (В): Рост опухоли PDx-5 моделей, получавших лечение контролем - наполнителем, фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), RAD1901 (120 мг/кг п.о., о.р.д.), палбоциклибом (п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (120 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (п.о., о.р.д.).
[0019] Фигура 8: Комбинация RAD1901 и палбоциклиба продемонстрировала ингибирование роста опухоли на PDx-5 моделях с мутантным (Y537S) ERα (PR+, Неr2+, ранее получавшие лечение ингибиторами ароматазы). Рост опухоли PDx-5 моделей, получавших лечение контролем - наполнителем, фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), RAD1901 (60 мг/кг п.о., о.р.д.), палбоциклибом (75 мг/кг, п.о., о.р.д.), комбинацией фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.) и палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.) и комбинацией RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.). n=8-10/группу.
[0020] Фигура 9. Фармакокинетический анализ фулвестранта на бестимусных мышах. Показана концентрация в плазме фулвестранта в концентрации 1 мг/дозу (закрашенный ромб), 3 мг/дозу (закрашенный круг) и 5 мг/дозу (закрашенный треугольник). Бестимусным мышам вводили подкожно фулвестрант в день 1 и вторую дозу в день 8. Концентрацию фулвестранта в плазме контролировали в указанные временные точки в течение до 168 часов после введения второй дозы.
[0021] Фигура 10. Эффект RAD1901 и фулвестранта (Фаслодекса) в отношении выживаемости мыши на внутричерепной модели MCF-7 на мышах.
[0022] Фигуры 11А-С: Иллюстративное изображение скана ФЭС-ПЭТ матки субъекта, получавшего лечение 200 и 500 мг RAD1901 п.о., о.р.д., и изменение занятости ER после вариантов лечения RAD1901. (А): Поперечный вид скана КТ матки до (а) и после (с) лечения 200 мг RAD1901, и поперечный вид скана ФЭС-ПЭТ матки до (b) и после (d) лечения RAD1901; (В): Сагиттальный вид скана КТ матки до (верхний чертеж (а)) и после (нижний чертеж (а)) лечения 500 мг RAD1901, сагиттальный вид скана ФЭС-ПЭТ матки до (верхний чертеж (b)) и после (нижний чертеж (b)) лечения RAD1901, поперечный вид скана КТ матки до (верхний чертеж (с)) и после (нижний чертеж (с)) лечения RAD1901, поперечный вид скана ФЭС-ПЭТ матки до (верхний чертеж (d)) и после (нижний чертеж (d)) лечения RAD1901; (С): % изменения занятости ER после вариантов лечения RAD1901 субъектов 1-3 (200 мг) и субъектов 4-7 (500 мг) по сравнению с исходным уровнем (перед лечением RAD1901).
[0023] Фигуры 12А-В. Иллюстративное изображение скана ФЭС-ПЭТ матки (А) и гипофиза (В) перед (На исходном уровне) и после (После лечения) лечения RAD1901 (500 мг). (а) Боковое поперечное сечение; (b) продольное поперечное сечение; и (с) продольное поперечное сечение.
[0024] Фигура 13. Экспрессия PR и ER на ксенотрансплантатных моделях MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем, RAD1901, палбоциклибом, комбинацией RAD1901 и палбоциклиба, фулвестрантом и комбинацией фулвестранта и палбоциклиба.
[0025] Фигуры 14А-В. Лечение RAD1901 привело к полной деградации ER и ингибировало передачу сигналов посредством ER на линиях клеток MCF-7 (А) и линиях клеток T47D (В) in vitro. Экспрессия ER была показана на обеих линиях клеток, получавших лечение RAD1901 и фулвестрантом, при различных концентрациях 0,001 мкМ, 0,01 мкМ, 0,1 мкМ и 1 мкМ, соответственно. Передача сигналов посредством ER была показана тремя генами-мишенями ER, исследование которых проводили: PGR, GREB1 и TFF1.
[0026] Фигуры 15А-С. Лечение RAD 1901 привело к деградации ER и отмене передачи сигналов посредством ER на ксенотрансплантатных моделях MCF-7. (А): Вестернблоттинг, демонстрирующий экспрессию PR и ER на ксенотрансплантатных моделях MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем, RAD1901 в дозе 30 и 60 мг/кг и фулвестрантом 3 мг/дозу, через 2 часа или через 8 часов после введения последней дозы; (В): экспрессия белка ER на ксенотрансплантатных моделях MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем, RAD1901 в дозе 30 и 60 мг/кг и фулвестрантом 3 мг/дозу, через 2 часа после введения последней дозы; (С): экспрессия белка PR на ксенотрансплантатных моделях MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем, RAD 1901 в дозе 30 и 60 мг/кг и фулвестрантом 3 мг/дозу, через 8 часов после введения последней дозы.
[0027] Фигуры 16А-С. Лечение RAD1901 привело к быстрому снижению уровня PR на ксенотрансплантатных моделях MCF-7. (А): Вестернблоттинг, демонстрирующий экспрессию PR на ксенотрансплантатных моделях MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем и RAD1901 в дозе 30, 60 и 90 мг/кг, через 8 часов или через 12 часов после введения однократной дозы; (В): Вестернблоттинг, демонстрирующий экспрессию PR на ксенотрансплантатных моделях MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем и RAD1901 в дозе 30, 60 и 90 мг/кг, через 4 часа или через 24 часа после введения 7-ой дозы; (С): Дозозависимое уменьшение экспрессии PR на ксенотрансплантатных моделях MCF-7, получавших лечение RAD1901 в дозе 30, 60 и 90 мг/кг.
[0028] Фигуры 17А-В. Лечение RAD1901 привело к быстрому уменьшению пролиферации на ксенотрансплантатных моделях MCF-7. (А): Иллюстративная фотография рассеченной опухоли, отобранной от ксенотрансплантатных моделей MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем и RAD1901 в дозе 90 мг/кг, через 8 часов после введения однократной дозы и через 24 часа после введения 4-ой дозы, и окрашенной в отношении маркера пролиферации Ki-67; (В): Гистограмма, демонстрирующая снижение уровня маркера пролиферации Ki-67 на ксенотрансплантатных моделях MCF-7, получавших лечение контролем - наполнителем и RAD1901 в дозе 90 мг/кг, через 8 часов после введения однократной дозы и через 24 часа после введения 4-ой дозы.
[0029] Фигура 18. Лечение RAD1901 в дозе 30, 60 и 120 мг/кг уменьшало уровень Ki67 более значительно, чем фулвестрант (1 мг/животное), в конце исследования опухолей PDx-4 моделей через четыре часа в последний день исследования эффективности длительностью 56 дней.
[0030] Фигура 19. Лечение RAD1901 в дозе 60 и 120 мг/кг привело к уменьшению передачи сигналов посредством ER in vivo на PDx-5 моделях с уменьшенной экспрессией PR.
[0031] Фигуры 20A-D. Эффект RAD1901 в отношении ткани матки на недавно отлученных от матери самках крыс Спрег-Доули. (А): Чистая масса матки крыс, которым проводили эвтаназию через 24 часа после введения последней дозы; (В): высота эпителия на срезах тканей матки; (С): Иллюстративные срезы ткани матки, окрашенные толуидиновым синим О, при 400х увеличении, стрелками показан эпителий матки; (D): Суммарная РНК, выделенная из ткани матки и проанализированная методом количественной ОТ-ПЦР (полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией) для определения уровня экспрессии комплемента С3 относительно гена домашнего хозяйства 18S рибосомальной РНК.
[0032] Фигура 21. Результаты определения фармакокинетики RAD1901 в плазме в дозе 200, 500, 750 и 1000 мг/кг после введения в день 7.
[0033] Фигура 22. 3ERT (I).
[0034] Фигура 23. 3ERT (II).
[0035] Фигура 24. Наложения комплексов ЛСД ERα - антагонист, обобщенных в таблице 10.
[0036] Фигуры 25А-В. Моделирование (A) RAD1901-1R5K; и (В) GW5-1R5K.
[0037] Фигуры 26А-В. Моделирование (A) RAD1901-1SJ0; и (В) E4D-1SJ0.
[0038] Фигуры 27А-В. Моделирование (A) RAD 1901-2JFA; и (В) RAL-2JFA.
[0039] Фигуры 28А-В. Моделирование (A) RAD 1901-2BJ4; и (В) OHT-2BJ4.
[0040] Фигуры 29А-В. Моделирование (A) RAD 1901-2IOK; и (В) IOK-2IOK.
[0041] Фигура 30. Наложения конформаций RAD1901, полученных в результате анализа ДИС (докинг индуцированного соответствия) 1R5K и 2OUZ.
[0042] Фигура 31. Наложения конформаций RAD1901, полученных в результате анализа ДИС 2BJ4 и 2JFA.
[0043] Фигуры 32А-В. Наложения конформаций RAD1901, полученных в результате анализа ДИС 2BJ4, 2JFA и 1SJ0.
[0044] Фигуры 33А-С. ДИС RAD1901 с 2BJ4.
[0045] Фигуры 34А-С. Взаимодействия поверхности белка RAD1901, состыкованного в 2ВJ4 посредством ДИС.
[0046] Фигуры 35А-С. ДИС фулвестранта с 2BJ4.
[0047] Фигуры 36А-В. ДИС фулвестранта и RAD 1901 с 2ВJ4.
[0048] Фигуры 37А-В. Наложения ДИС фулвестранта и RAD1901 с 2BJ4.
[0049] Фигура 38. Анализ связывания RAD1901 с конструкциями ERα ДТ и мутантным ЛСД in vitro.
[0050] Фигура 39. Расположение иллюстративных мутаций ERα и их частота.
[0051] Таблица 1. Уровни RAD1901 в плазме, опухоли и головном мозге мышей, которым имплантировали клетки MCF7, после лечения в течение 40 дней.
[0052] Таблица 2. СУН (стандартизированные уровни накопления) для матки, мышц и костей для субъекта-человека, получавшего лечение дозой 200 мг п.о., о.р.д. в течение шести дней.
[0053] Таблица 3. СУН для матки, мышц и костей для субъектов-людей (n=4), получавших лечение дозой 500 мг п.о., о.р.д. в течение шести дней.
[0054] Таблица 4. Эффект RAD1901 в отношении МПК (минеральной плотности костей) на крысах после овариоэктомии. Взрослым самкам крыс проводили симуляцию или хирургическое вмешательство - овариоэктомию перед началом лечения наполнителем, Е2 (0,01 мг/кг) или RAD1901 (3 мг/кг) о.р.д. (n=20 на группу лечения). МПК измеряли посредством двухэмиссионной рентгеновской абсорбциометрии на исходном уровне и после 4 недель лечения. Данные выражены в виде среднего значения ±СО (стандартное отклонение). *Р<0,05 по сравнению с соответствующим случаем OVX (овариоэктомия) + Контроль наполн. МПК, минеральная плотность костей; Е2, бета-эстрадиол; OVX, после овариоэктомии; Наполн, наполнитель.
[0055] Таблица 5. Эффект RAD1901 в отношении микроархитектуры бедренной кости на крысах после овариоэктомии. Взрослым самкам крыс проводили симуляцию или хирургическое вмешательство - овариоэктомию перед началом лечения наполнителем, Е2 (0,01 мг/кг) или RAD1901 (3 мг/кг) о.р.д. (n=20 на группу лечения). Через 4 недели микроархитектуру кости оценивали с применением компьютерной микротомографии. Данные выражены в виде среднего значения ± СО. *Р<0,05 по сравнению с соответствующим случаем OVX + Контроль наполн. КПК, кажущаяся плотность костей; ОК/ОО, плотность костной ткани; ПлотнСоед, плотность соединительной ткани; Е2, бета-эстрадиол; OVX, после овариоэктомии; ЧТ, число трабекул; ТТ, толщина трабекул; РМТ, расстояние между трабекулами; Наполн, наполнитель.
[0056] Таблица 6. Ключевые демографические характеристики на исходном уровне исследования 1 фазы с увеличением дозы RAD1901.
[0057] Таблица 7. Наиболее частые (>10%) связанные с лечением НЯ (нежелательные явления) в исследовании 1 фазы с увеличением дозы RAD1901. НЯ классифицировали согласно СТСАЕ v4.0 (Common Terminology Criteria for Adverse Events, общей терминологии критериев нежелательных явлений). Любого пациента с несколькими сценариями одного и того же предпочтительного термина подсчитывали только один раз и относили к наиболее тяжелой степени. *>10% пациентов в суммарной активной группе, у которых были любые связанные с лечением НЯПНЛ (нежелательные явления, возникшие после начала лечения). N = количество субъектов с по меньшей мере одним связанным с лечением НЯ в данной категории.
[0058] Таблица 8. Фармакокинетические параметры в исследовании 1 фазы с увеличением дозы RAD1901 (день 7).
[0059] Таблица 8. Фармакокинетические параметры в исследовании 1 фазы с увеличением дозы RAD1901 (день 7).
[0060] Таблица 9. Частота мутаций ЛСД.
[0061] Таблица 10. Различия комплексов ЛСД ER-α - антагонист в положениях остатков по сравнению с 3ERT.
[0062] Таблица 11. Оценка наложения структур комплексов ЛСД ER-α - антагонист посредством расчетов СКО (среднего квадратичного отклонения).
[0063] Таблица 12. Анализ связывания лиганда в комплексах ЛСД ER-α - антагонист.
[0064] Таблица 13. Оценка модели для докинга RAD1901.
[0065] Таблица 14. Показатель докинга индуцированного соответствия RAD1901 с 1R5K, 1SJ0, 2IFA, 2BJ4 и 2OUZ.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0066] Как изложено в разделе примеров ниже, комбинация RAD1901 и палбоциклиба (комбинация RAD1901-палбo) (структуры ниже) продемонстрировала большее ингибирование роста опухоли, чем RAD1901 в монотерапии, на ксенотрансплантатных моделях рака молочной железы вне зависимости от ESR1 статуса, PR статуса и предшествующей эндокринной терапии (пример I(A)). Ксенотрансплантатные модели, лечение которых проводили, имели опухоли, экспрессирующие ERα дикого типа (ДТ) или мутантный (например, Y537S) ERα с экспрессией PR или без таковой, с высоким или низким уровнем экспрессии Неr2, с предшествующей эндокринной терапией или без таковой (например, тамоксифеном (там), ИА, фулвестрантом), химиотерапией (химио), ингибиторами Неr2 (Неr2и, например, трастузумабом, лапатинибом), бевацизумабом и/или ритуксимабом) (фигура 1). Комбинации RAD1901-палбо продемонстрировали большее ингибирование роста опухоли (ИРО 65% или более) на ксенотрансплантатных моделях, тогда как RAD1901 в монотерапии обеспечивал ИРО 26-64%; и комбинации RAD1901 - палбо продемонстрировали большее ингибирование роста опухоли (ИРО 26-64%) на ксенотрансплантатных моделях, тогда как RAD1901 в монотерапии обеспечивал ИРО менее 25%. Комбинации RAD1901-палбо продемонстрировали большую регрессию опухоли, чем RAD1901 в монотерапии, на ксенотрансплантатных моделях, которые являются в высокой степени восприимчивыми к лечению RAD1901 (ИРО 65% или более), например, PDx-11 (фигуры 3А-В).
[0067] PDx модели с ER ДТ и PDx модели с мутантным ER могут характеризоваться различным уровнем восприимчивости к лечению фулвестрантом в монотерапии, палбоциклибом в монотерапии и/или комбинацией фулвестранта и палбоциклиба (комбинация фул-палбо). Однако комбинации RAD1901-палбо продемонстрировали улучшенное ингибирование роста опухоли и/или регрессию опухоли по сравнению с лечением RAD1901 в монотерапии или палбоциклибом в монотерапии вне зависимости от того, отвечали ли PDx модели на лечение фулвестрантом и/или лечение комбинацией фул-палбо. Другими словами, комбинация RAD1901-палбо может ингибировать рост опухоли и/или обеспечивать регрессию опухоли на вариантах рака, устойчивых к фулвестранту.
[0068] Лечение комбинацией RAD1901-палбо продемонстрировало улучшенное ингибирование роста опухоли и/или регрессию опухоли по сравнению с лечением фулвестрантом в монотерапии или комбинацией фул-палбо. Например, комбинация RAD1901-палбо вызвала более значительную регрессию опухоли на большинстве ER+ ДТ ксенотрансплантатных моделях, чем лечение фулвестрантом в монотерапии, RAD1901 в монотерапии или палбоциклибом в монотерапии, несмотря на то, что данные ксенотрансплантатные модели демонстрировали различную восприимчивость к лечению фулвестрантом (например, ксенотрансплантатная модель на основе линии клеток MCF7, восприимчивая к лечению фулвестрантом (фигуры 2А-С); PDx-11 модель, восприимчивая к лечению фулвестрантом (фигуры 3А-В); и PDx-2 модель, в меньшей степени восприимчивая к лечению фулвестрантом (фигуры 3А-В)). Комбинация RAD1901-палбо также вызвала более значительную регрессию опухоли на большинстве ER+ ДТ ксенотрансплантатных моделях на основе линии клеток MCF7 и PDx-11 моделях, чем лечение комбинацией фул-палбо (фигуры 2А-С и 3А-В). Комбинация RAD1901-палбо обеспечивала аналогичные эффекты, как и RAD1901 в дозе 30 мг/кг или 60 мг/кг, несмотря на то, что RAD1901 в монотерапии в дозе 30 мг/кг являлся не настолько эффективным, как RAD1901 в монотерапии в дозе 60 мг/кг при ингибировании роста опухоли (фигура 2С). Данные результаты свидетельствуют, что комбинации RAD1901-палбо с меньшей дозой RAD1901 (например, 30 мг/кг) было достаточно, чтобы увеличить до максимума эффекты ингибирования роста опухоли/регрессии опухоли на указанных ксенотрансплантатных моделях.
[0069] Комбинация RAD 1901-палбо продемонстрировала регрессию опухоли или улучшенное ингибирование роста опухоли на PDx моделях с мутантным ER+ (например, Y537S), слабо восприимчивых к лечению фулвестрантом. Например, PDx-5 представляет собой PDx модель с мутантным ER Y537S (PR+, Неr2+, предшествующее лечение ИА), слабо восприимчивую к лечению фулвестрантом. Комбинация RAD1901-палбо продемонстрировала регрессию опухоли на PDx-5 модели, в то время как палбоциклиб в монотерапии или RAD1901 в монотерапии исключительно ингибировали рост опухоли, не вызывая регрессии опухоли (фигуры 6А-С и 7А-В). Более того, комбинация RAD1901-палбо обеспечивала аналогичные эффекты, как и RAD1901, в дозе 60 мг/кг или 120 мг/кг (фигуры 7А-В); это свидетельствует, что комбинации RAD1901-палбо с меньшей дозой RAD1901 (например, 60 мг/кг) было достаточно для увеличения до максимума эффектов ингибирования роста опухоли/регрессии опухоли на указанных PDx моделях. Комбинация RAD1901-палбо вызвала более значительное ингибирование роста опухоли, чем RAD1901 в монотерапии, палбоциклиб в монотерапии, фулвестрант в монотерапии или комбинация фул-палбо, на мутантных PDx-5 моделях (фигура 8). Неожиданно было установлено, что комбинация фул-палбо значительно не усиливала ингибирование роста опухоли по сравнению с лечением палбоциклибом в монотерапии на PDx-5 моделях (фигура 8). Таким образом, добавление фулвестранта не обеспечило пользу в отношении PDx-5 моделей при применении в комбинации с палбоциклибом, тогда как добавление RAD1901 неожиданно обеспечило пользу. Более того, чем более длительным являлось лечение, тем более значительное ингибирование роста опухоли обеспечивала комбинация RAD1901-палбо по сравнению с лечением RAD1901 в монотерапии или лечением палбоциклибом в монотерапии (фигура 8). Таким образом, комбинации RAD1901-палбо обеспечивали мощную противоопухолевую терапию ER+ рака молочной железы, экспрессирующего ER ДТ или мутантный ER, с экспрессией PR или без таковой, с высоким или низким уровнем экспрессии Неr2 и с устойчивостью к фулвестранту или без таковой.
[0070] Результаты, представленные в настоящей заявке, также продемонстрировали, что RAD1901 может быть доставлен в головной мозг (пример II), и указанная доставка улучшала выживаемость мыши на внутричерепной модели на мышах, экспрессирующих ERα дикого типа (ксенотрансплантатная модель MCF-7, пример I(B)). Поскольку сообщалось, что палбоциклиб преодолевает гематоэнцефалический барьер (), комбинация RAD1901-палбо, вероятно, также способна преодолевать гематоэнцефалический барьер и лечить ER+ опухоли в головном мозге. Данное свойство представляет собой дополнительное преимущество по сравнению с комбинацией фул-палбо для лечения ER+ опухолей в головном мозге, поскольку фулвестрант не может преодолевать гематоэнцефалический барьер (Vergote 1 et al., "Fulvestrant, a new treatment option for advanced breast cancer: tolerability versus existing agents," Ann. Oncol., 17(2):200-204 (2006)). Комбинация RAD1901 с другим ингибитором или ингибиторами CDK4/6, которые способны преодолевать гематоэнцефалический барьер (например, абемациклибом ()), может также оказывать аналогичные терапевтические эффекты в отношении ER+ опухолей в головном мозге.
[0071] RAD1901 продемонстрировал устойчивую эффективность при ингибировании роста опухоли после окончания лечения, в то время как лечение эстрадиолом продолжали (например, PDx-4 модель). Таким образом, комбинация RAD1901-палбо, вероятно, обеспечивает пользу пациентам посредством ингибирования роста опухоли после окончания лечения, в особенности, когда ингибиторы CDK4/6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) можно вводить исключительно периодически в связи с побочными эффектами данных соединений ().
[0072] Комбинация RAD1901-палбо, вероятно, характеризуется меньшими побочными эффектами, чем лечение палбоциклибом в монотерапии или комбинацией палбоциклиба с другими вариантами гормональной терапии (например, ИА, такими как летрозол, и ССРЭ, такими как фулвестрант). Например, как ИА, так и фулвестрант могут вызывать атрофию костной ткани у пациентов, получавших лечение. Маловероятно, что RAD1901 будет оказывать аналогичные побочные эффекты. Было обнаружено, что RAD1901, предпочтительно, накапливается в опухоли, причем уровень RAD1901 в опухоли по сравнению с уровнем RAD1901 в плазме (соотношение О/П) составляет до приблизительно 35 (пример II). Стандартизированные уровни накопления (СУН) для матки, мышц и костей рассчитывали для субъектов-людей, получавших лечение RAD1901 в дозе от приблизительно 200 мг до приблизительно 500 мг о.р.д. (пример III(A)). После введения доз сигналы для матки были близки к уровню в «тканях, отличных от тканей-мишеней» (тканях, которые не экспрессируют рецептор эстрогенов), что свидетельствует о полном затухании накопления ФЭС-ПЭТ после лечения RAD1901. Практически не наблюдалось изменений на сканах ПЭТ перед лечением по сравнению со сканами после лечения на тканях, которые по существу не экспрессировали рецептор эстрогенов (например, мышцы, кости) (пример IIIА). Наконец, варианты лечения RAD1901 выступали в качестве антагонистов стимуляции эстрадиолом тканей матки у крыс после овариоэктомии (OVX) (пример IV(A)), и в значительной степени сохраняли качество костей субъектов, получавших лечение. Например, у крыс OVX, получавших лечение RAD1901, наблюдалось сохранение МПК и микроархитектуры бедренной кости (пример IV(A)). Таким образом, комбинация RAD1901-палбо может особенно подходить для пациентов, страдающих от остеопороза, или подверженных более высокому риску развития остеопороза.
[0073] Более того, было обнаружено, что RAD1901 вызывает деградацию ERα дикого типа и отменяет передачу сигналов посредством ER in vivo на ксенотрансплантатных моделях на основе линии клеток MCF7, и демонстрирует дозозависимое уменьшение уровня PR на данных ксенотрансплантатных моделях на основе линии клеток MCF7 (пример III(B)). RAD1901 уменьшает пролиферацию на ксенотрансплантатных моделях на основе линии клеток MCF7 и на PDx-4 моделях, что подтверждается уменьшением уровня маркера пролиферации Ki67 в опухолях, отобранных от субъектов, получавших лечение. RAD1901 также уменьшает передачу сигналов посредством ER in vivo на PDx модели с мутантным ER, которая была слабо восприимчива к лечению фулвестрантом (пример III(B)).
[0074] Неожиданная эффективность комбинации RAD1901-палбо в отношении опухолей, слабо восприимчивых к лечению фулвестрантом, и в отношении опухолей, экспрессирующих мутантный ERα, может быть обусловлена уникальными взаимодействиями между RAD1901 и ERα. Структурные модели ERα, присоединенного к RAD1901 и другим соединениям, связывающим ERα, анализировали для получения информации о специфичных взаимодействиях связывания (пример V). Компьютерное моделирование продемонстрировало, что взаимодействия RAD1901 - ERα, вероятно, не нарушаются мутациями в ЛСД ERα, например, мутантом Y537X, где X представлял собой S, N или С; D538G; и S463P, на который приходится приблизительно 81,7% мутаций ЛСД, обнаруженных в недавнем исследовании метастазирующих ER-положительных образцов опухоли молочной железы от пациентов, которые получали по меньшей мере одну линию эндокринного лечения (таблица 9, пример V). Таким образом, комбинация одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей, вероятно, обладает терапевтическими эффектами с относительно низким уровнем побочных эффектов, аналогично комбинациям RAD1901-палбо, раскрытым в настоящей заявке. Компьютерное моделирование привело к обнаружению специфичных оснований в С-концевых лиганд-связывающих доменах ERα, которые являются критически важными для связывания; данную информацию можно использовать для разработки соединений, которые связываются не только с ERα дикого типа, но также с определенными мутантами и вариантами указанного рецептора, которые в сочетании с ингибитором CDK4/6 (например, рибоциклибом, абемациклибом и палбоциклибом) могут обеспечить мощную противоопухолевую терапию с относительно низким уровнем побочных эффектов, аналогично комбинациям RAD1901-палбо, раскрытым в настоящей заявке.
[0075] На основании данных результатов в настоящей заявке представлены способы ингибирования роста или обеспечения регрессии ERα-положительной опухоли у субъекта, который нуждается в таком ингибировании или регрессии, посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества комбинации RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или его солей и одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба). Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения введение RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения обладает дополнительной терапевтической пользой дополнительно к ингибированию роста опухоли, включая, например, ингибирование пролиферации раковых клеток или ингибирование активности ERα (например, посредством ингибирования связывания эстрадиола или посредством деградации ERα). Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения способ не оказывает отрицательных эффектов в отношении мышц, костей, молочной железы и/или матки.
[0076] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или солимодулируют и/или вызывают деградацию ERα и мутантного ERα.
[0077] Согласно определенным вариантам реализации в настоящей заявке представлены способы ингибирования роста опухоли или регрессии опухоли, способы, которые обеспечивают ингибирование роста или обеспечивают регрессию ERα-положительной опухоли у субъекта, который нуждается в таком ингибировании или регрессии, посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольвата (например, гидрата) или соли. Согласно конкретным вариантам реализации настоящего изобретения соль указанного соединения представляет собой дигидрохлорид RAD1901, имеющий структуру:
Ингибиторы CDK4 и/или CDK6
[0078] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения ингибиторы CDK4 и/или CDK6 включают, без ограничения, палбоциклиб, абемациклиб, рибоциклиб, AMG925, соединения формулы II, соединения формулы III и соединения формулы IV, раскрытые ниже, сольваты указанных соединений, соли указанных соединений и комбинации указанных соединений.
Абемациклиб (LY2835219, 2-пиримидинамин, N-(5-((4-этил-1-пиперазинил)метил)-2-пиридинил)-5-фтор-4-(4-фтор-2-метил-1-(1-метилэтил)-1Н-бензимидазол-6-ил))
Рибоциклиб, (LEE011, 7-циклопентил-N,N-диметил-2-((5-(пиперазин-1-ил)пиридин-2-ил)амино)-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-6-карбоксамид)
[0079] Соединения формулы II имеют структуру формулы II, включая его фармацевтически приемлемые сольваты (например, гидраты), и фармацевтически приемлемые соли:
где:
каждый X независимо представляет собой гетероатом (например, О, S и N); и
каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила, (карбокси)низшего алкила, кислорода и циклоалкила.
[0080] Если не указано обратное, низший алкил в настоящей заявке представляет собой алкил, содержащий 1, 2, 3, 4, 5 или 6 углеродов.
[0081] Соединения формулы III имеют структуру формулы III, включая фармацевтически приемлемые сольваты (например, гидраты) и фармацевтически приемлемые соли:
где:
R2 выбран из группы, состоящей из водорода, атомов галогена, NH2, NHR2, NHCOR2, NO2, CN, CH2NH2 CH2NHR2, фенильной и гетероароматической групп, причем фенильная или гетероароматическая группа необязательно замещена следующей заменой, которая выбрана из группы, состоящей из низшего алкила, (карбокси)низшего алкила, кислорода и циклоалкильных групп;
Аr представляет собой фенильную или гетероароматическую группу, причем фенильная или гетероароматическая группа необязательно замещена следующей заменой, которая выбрана из группы, состоящей из низшего алкила, (карбокси)низшего алкила (-(С=O)-низшего алкила), кислорода (=O) или циклоалкильных групп; и
n представляет собой 0, 1, 2 или 3.
[0082] Соединения формулы IV имеют структуру формулы IV, как раскрыто в публикации ЕР 1295878 В1, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки, также включая его фармацевтически приемлемые сольваты (например, гидраты) и фармацевтически приемлемые соли:
где:
Аr2 представляет собой и Аr представляет собой ; или
Аr2 представляет собой то же, и Аr представляет собой .
Комбинированная терапия
(1) Комбинация RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей и одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6
[0083] Как RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли, так и ингибиторы CDK4 и/или CDK6 при введении субъекту в монотерапии обладают терапевтическим эффектом в отношении одного или нескольких вариантов рака или опухолей (примеры I(A) и I(B)). Неожиданно было обнаружено, что RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или его соли и ингибиторы CDK4 и/или CDK6 при введении в комбинации субъекту обладают в значительной степени улучшенным эффектом в отношении вариантов рака/опухолей (примеры I(A) и I(B)).
[0084] «Ингибирование роста» ERα-положительной опухоли в настоящей заявке может означать замедление скорости роста опухоли или полное прекращение роста опухоли.
[0085] «Регрессия опухоли» или «регрессия» ERα-положительной опухоли в настоящей заявке может означать уменьшение максимального размера опухоли. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения введение комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей может привести к уменьшению размера опухоли по сравнению с исходным уровнем (т.е. размером до начала лечения) или даже к устранению или частичному устранению опухоли. Соответственно, согласно определенным вариантам реализации способы регрессии опухоли, представленные в настоящей заявке, можно в качестве альтернативы охарактеризовать как способы уменьшения размера опухоли по сравнению с исходным уровнем.
[0086] «Опухоль» в настоящей заявке представляет собой злокачественную опухоль и используется взаимозаменяемо с «раком».
[0087] Ингибирование роста или регрессия опухоли могут локализоваться в одной опухоли или в ряде опухолей в пределах специфичной ткани или органа или могут являться системными (т.е. могут поражать опухоли во всех тканях или органах).
[0088] Поскольку RAD1901, как известно, предпочтительно, связывается с ERα по сравнению с рецептором эстрогенов бета (ERβ), если не указано обратное, рецептор эстрогенов, рецептор эстрогенов альфа, ERα, ER, ERα дикого типа и ESR1 используются в настоящей заявке взаимозаменяемо. «Рецептор эстрогенов альфа» или «ERα» в настоящей заявке означает полипептид, содержащий аминокислотную последовательность ERα дикого типа, которая кодируется геном ESR1, или состоящий или состоящий по существу из указанной аминокислотной последовательности. Опухоль, которая является «положительной в отношении рецептора эстрогенов альфа», «ERα-положительной», «ER+» или «ERα+» в настоящей заявке означает опухоль, в которой одна или несколько клеток экспрессируют по меньшей мере одну изоформу ERα. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения данные клетки сверхэкспрессируют ERα. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения пациент имеет одну или несколько клеток в опухоли, экспрессирующих одну или несколько форм ERβ. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения ERα-положительная опухоль и/или рак связаны с раком молочной железы, матки, яичников или гипофиза. Согласно определенным из данных вариантов реализации настоящего изобретения пациент имеет опухоль, расположенную в ткани молочной железы, матки, яичников или гипофиза. Согласно вариантам реализации настоящего изобретения, в которых пациент имеет опухоль, расположенную в молочной железе, опухоль может быть связанной с люминальным раком молочной железы, который может быть положительным в отношении HER2, и в случае HER2+ опухолей, опухоли могут экспрессировать высокий или низкий уровень HER2 (например, фигура 1). Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения пациент имеет опухоль, расположенную в другой ткани или органе (например, костях, мышцах, головном мозге), но, тем не менее, связанную с раком молочной железы, матки, яичников или гипофиза (например, опухоли, образованные в результате миграции или метастаза рака молочной железы, матки, яичников или гипофиза). Соответственно, согласно определенным вариантам реализации способов ингибирования роста опухоли или регрессии опухоли, представленных в настоящей заявке, опухоль, которая является мишенью, представляет собой метастазирующую опухоль и/или опухоль, характеризующаяся сверхэкспрессией ER в других органах (например, костях и/или мышцах). Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения опухоль, которая является мишенью, представляет собой опухоль и/или рак головного мозга. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения опухоль, которая является мишенью, является более чувствительной к лечению RAD1901 и ингибитором CDK4 и/или CDK6, как описано в настоящей заявке, чем к лечению другим ССРЭ (например, фулвестрантом, TAS-108 (SR16234), ZK191703, RU58668, GDC-0810 (ARN-810), GW5638/DPC974, SRN-927, ICI182782 и AZD9496), ингибиторами Неr2 (например, трастузумабом, лапатинибом, аботрастузумабом эмтанзином и/или пертузумабом), химиотерапией (например, абраксаном, адриамицином, карбоплатином, цитоксаном, даунорубицином, доксилом, элленсом, фторурацилом, гемзаром, хелавеном, икземпрой, метотрексатом, митомицином, микоксантроном, навельбином, таксолом, таксотером, тиотепой, винкристином и кселодой), ингибитором ароматазы (например, анастрозолом, эксеместаном и летрозолом), селективными модуляторами рецептора эстрогенов (например, тамоксифеном, ралоксифеном, лазофоксифеном и/или торемифеном), ингибитором ангиогенеза (например, бевацизумабом) и/или ритуксимабом.
[0089] Согласно определенным вариантам реализации способов ингибирования роста опухоли или регрессии опухоли, представленных в настоящей заявке, указанные способы также включают этап определения наличия у пациента опухоли, экспрессирующей ERα, перед введением комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей. Согласно определенным вариантам реализации способов ингибирования роста опухоли или регрессии опухоли, представленных в настоящей заявке, способы также включают этап определения наличия у пациента опухоли, экспрессирующей мутантный ERα, перед введением комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей. Согласно определенным вариантам реализации способов ингибирования роста опухоли или регрессии опухоли, представленных в настоящей заявке, указанные способы также включают этап определения наличия у пациента опухоли, экспрессирующей ERα, которая является восприимчивой или невосприимчивой к лечению фулвестрантом, перед введением комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей. Данные определения можно провести с применением любого способа обнаружения экспрессии, известного в данной области техники, и можно осуществить in vitro с применением образца опухоли или ткани, отобранного от субъекта.
[0090] Помимо демонстрации способности RAD1901 ингибировать рост опухоли в опухолях, экспрессирующих ERα дикого типа, результаты, представленные в настоящей заявке, продемонстрировали, что RAD1901 демонстрирует неожиданную способность ингибировать рост опухолей, экспрессирующих мутантную форму ERα, а именно Y537S ERα (пример I(A)). Оценки примеров мутаций ERα методом компьютерного моделирования продемонстрировали, что ни одна из данных мутаций, как предполагают, не влияет на ЛСД или специфично не препятствует связыванию RAD1901 (пример V(A)), например, ERα, содержащий один или несколько мутантов, которые выбраны из группы, состоящей из ERα с мутантным Y537X, где X представляет собой S, N или С, ERα с мутантным D538G, и ERα с мутантным S463P. На основании данных результатов в настоящей заявке представлены способы ингибирования роста или способы, обеспечивающие регрессию опухоли, которая является положительной в отношении ERα, содержащего один или несколько мутантов в лиганд-связывающем домене (ЛСД), которые выбраны из группы, состоящей из Y537X1, где X1 представляет собой S, N или С, D538G, L536X2, где Х2 представляет собой R или Q, Р535Н, V534E, S463P, V392I, E380Q, в особенности, Y537S ERα, у субъекта, страдающего от рака, посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли. «Мутант ERα» в настоящей заявке означает ERα, содержащий одну или несколько замен или делеций, и варианты указанного рецептора, содержащие аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или по меньшей мере 99,5% идентичностью аминокислотной последовательности ERα, или состоящие или состоящие по существу из указанной аминокислотной последовательности.
[0091] Помимо ингибирования роста опухоли рака молочной железы на ксенотрансплантатной модели на животных результаты, раскрытые в настоящей заявке, продемонстрировали, что RAD1901 демонстрирует значительное накопление в клетках опухоли и способен проникать через гематоэнцефалический барьер (пример II). Способность проникать через гематоэнцефалический барьер подтверждали посредством демонстрации того, что введение RAD1901 в значительной степени увеличивало выживаемость на ксенотрансплантатной модели метастазов головного мозга (пример I(B)). Соответственно, согласно определенным вариантам реализации способов ингибирования роста опухоли или регрессии опухоли, представленных в настоящей заявке, ERα-положительная опухоль, которая является мишенью, расположена в головном мозге или в другом месте в центральной нервной системе. Согласно определенным из данных вариантов реализации настоящего изобретения ERα-положительная опухоль представляет собой рак, первично связанный с головным мозгом. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения ERα-положительная опухоль представляет собой метастазирующую опухоль, которая первично связана с другим типом рака, таким как рак молочной железы, матки, яичников или гипофиза, или опухоль, которая мигрировала из другой ткани или органа. Согласно определенным из данных вариантов реализации настоящего изобретения опухоль представляет собой метастазы в головном мозге, такие как метастазы рака молочной железы в головном мозге (breast cancer brain metastases, BCBM). Согласно определенным вариантам реализации способов, раскрытых в настоящей заявке, RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли накапливаются в одной или нескольких клетках в опухоли-мишени.
[0092] Согласно определенным вариантам реализации способов, раскрытых, RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли, предпочтительно, накапливаются в опухоли при соотношении О/П (концентрация RAD1901 в опухоли/концентрация RAD1901 в плазме), составляющем приблизительно 15 или выше, приблизительно 18 или выше, приблизительно 19 или выше, приблизительно 20 или выше, приблизительно 25 или выше, приблизительно 28 или выше, приблизительно 30 или выше, приблизительно 33 или выше, приблизительно 35 или выше или приблизительно 40 или выше.
[0093] Результаты, представленные в настоящей заявке, продемонстрировали, что введение RAD1901 защищает от атрофии костной ткани у крыс после овариоэктомии (пример IV(A)). Соответственно, согласно определенным вариантам реализации способов ингибирования роста опухоли или регрессии опухоли, представленных в настоящей заявке, введение комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей не оказывает нежелательных эффектов в отношении костей, включая, например, нежелательное воздействие на плотность костной ткани, плотность поверхности костей, минеральной плотности костей, числа трабекул, толщины трабекул, расстояния между трабекулами, плотности соединительной ткани и/или кажущейся плотности костей субъекта, который получает лечение. Поскольку тамоксифен может быть связан с атрофией костной ткани у женщин в пременопаузальном периоде, и фулвестрант может нарушать структуру костей в связи с механизмом действия данного средства, комбинация одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей может особенно подходить для женщин в пременопаузальном периоде, опухолей, устойчивых к тамоксифену или антиэстрогеновой терапии, и пациентов, страдающих от остеопороза или подверженных высокому риску развития остеопороза.
[0094] Результаты, представленные в настоящей заявке, продемонстрировали, что RAD1901 выступал антагонистом стимуляции эстрадиолом тканей матки у крыс после овариоэктомии (пример IV(A)). Более того, у субъектов-людей, получавших лечение RAD1901 в дозе 200 мг или до 500 мг о.р.д., почти не наблюдалось изменений сигналов стандартизированного объема накопления (СУН) для тканей матки, мышц и костей, которые по существу не экспрессировали ER, до и после лечения (пример III(А)). Соответственно, согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения такое введение также не приводит к нежелательным эффектам в отношении других тканей, включая, например, ткани матки, мышц или молочной железы.
[0095] RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли и ингибитор CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), раскрытые в настоящей заявке, вводят в комбинации субъекту, который нуждается в таком введении. Фраза «в комбинации» означает, что RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения можно вводить до, в течение или после введения ингибитора CDK4 и/или CDK6. Например, RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и ингибитор CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), раскрытые в настоящей заявке, можно вводить с интервалом приблизительно одну неделю, с интервалом приблизительно 6 дней, с интервалом приблизительно 5 дней, с интервалом приблизительно 4 дня, с интервалом приблизительно 3 дня, с интервалом приблизительно 2 дня, с интервалом приблизительно 24 часа, с интервалом приблизительно 23 часа, с интервалом приблизительно 22 часа, с интервалом приблизительно 21 час, с интервалом приблизительно 20 часов, с интервалом приблизительно 19 часов, с интервалом приблизительно 18 часов, с интервалом приблизительно 17 часов, с интервалом приблизительно 16 часов, с интервалом приблизительно 15 часов, с интервалом приблизительно 14 часов, с интервалом приблизительно 13 часов, с интервалом приблизительно 12 часов, с интервалом приблизительно 11 часов, с интервалом приблизительно 10 часов, с интервалом приблизительно 9 часов, с интервалом приблизительно 8 часов, с интервалом приблизительно 7 часов, с интервалом приблизительно 6 часов, с интервалом приблизительно 5 часов, с интервалом приблизительно 4 часа, с интервалом приблизительно 3 часа, с интервалом приблизительно 2 часа, с интервалом приблизительно 1 час, с интервалом приблизительно 55 минут, с интервалом приблизительно 50 минут, с интервалом приблизительно 45 минут, с интервалом приблизительно 40 минут, с интервалом приблизительно 35 минут, с интервалом приблизительно 30 минут, с интервалом приблизительно 25 минут, с интервалом приблизительно 20 минут, с интервалом приблизительно 15 минут, с интервалом приблизительно 10 минут или с интервалом приблизительно 5 минут. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и ингибитор CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), раскрытые в настоящей заявке, вводят субъекту одновременно или по существу одновременно. Согласно определенным из данных вариантов реализации настоящего изобретения RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и ингибитор CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), раскрытые в настоящей заявке, можно вводить в качестве части одного состава.
[0096] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения субъекту вводят комбинацию RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей и один ингибитор CDK4 и/или CDK6. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения субъекту вводят комбинацию RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей и более одного ингибитора CDK4 и/или CDK6. Например, RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли можно сочетать с двумя или более ингибиторами CDK4 и/или CDK6 для лечения вариантов рака/опухолей.
(2) Доза
[0097] Терапевтически эффективное количество комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей для применения в способах, описанных в настоящей заявке, представляет собой количество, которое при введении в течение определенного периода времени приводит к достижению одного или нескольких терапевтических сравнительных критериев (например, замедления или прекращения роста опухоли, которое приводит к регрессии опухоли, прекращения симптомов и т.д.). Комбинацию для применения в способах, раскрытых в настоящей заявке, можно вводить субъекту один раз или несколько раз. Согласно вариантам реализации настоящего изобретения, в которых соединения вводят несколько раз, данные соединения можно вводить с заданным интервалом, например, ежедневно, через день, еженедельно или ежемесячно. В качестве альтернативы, данные соединения можно вводить с нерегулярными интервалами, например, по мере необходимости в зависимости от симптомов, здоровья пациента и т.п. Терапевтически эффективное количество комбинации можно вводить о.р.д. в течение одного дня, по меньшей мере 2 дней, по меньшей мере 3 дней, по меньшей мере 4 дней, по меньшей мере 5 дней, по меньшей мере 6 дней, по меньшей мере 7 дней, по меньшей мере 10 дней или по меньшей мере 15 дней. Необязательно статус рака или регрессию опухоли контролируют в течение или после лечения, например, посредством сканирования субъекта методом ФЭС-ПЭТ. Дозу комбинации, которую вводят субъекту, можно увеличить или уменьшить в зависимости от установленного статуса рака или регрессии опухоли.
[0098] В идеальном случае терапевтически эффективное количество не превышает максимально переносимую дозу, при которой 50% или более субъектов, получающих лечение, испытывают тошноту или другие реакции токсичности, которые предотвращают последующие введения лекарственных препаратов. Терапевтически эффективное количество для субъекта может варьировать в зависимости от множества факторов, включая множество и степень симптомов, пол, возраст, массу тела или общее состояние здоровья субъекта, способ введения и тип соли или сольвата, различия в восприимчивости к лекарственному препарату, конкретный тип заболевания и т.п.
[0099] Примеры терапевтически эффективного количества RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей для применения в способах, раскрытых в настоящей заявке, включают, без ограничения, дозы от приблизительно 150 до приблизительно 1500 мг, от приблизительно 200 до приблизительно 1500 мг, от приблизительно 250 до приблизительно 1500 мг или от приблизительно 300 до приблизительно 1500 мг о.р.д. в случае субъектов, которые страдают от устойчивых ER-зависимых опухолей или вариантов рака; дозы от приблизительно 150 до приблизительно 1500 мг, от приблизительно 200 до приблизительно 1000 мг или от приблизительно 250 до приблизительно 1000 мг или от приблизительно 300 до приблизительно 1000 мг о.р.д. в случае субъектов, которые страдают от ER дикого типа-зависимых опухолей и/или вариантов рака и устойчивых опухолей и/или вариантов рака; и дозы от приблизительно 300 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 300 до приблизительно 550 мг, от приблизительно 300 до приблизительно 600 мг, от приблизительно 250 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 250 до приблизительно 550 мг, от приблизительно 250 до приблизительно 600 мг, от приблизительно 200 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 200 до приблизительно 550 мг, от приблизительно 200 до приблизительно 600 мг, от приблизительно 150 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 150 до приблизительно 550 мг или от приблизительно 150 до приблизительно 600 мг в случае субъектов, страдающих от, в большинстве своем, ER дикого типа-зависимых опухолей и/или вариантов рака. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения доза соединения формулы I (например, RAD1901) или соли или сольвата указанного соединения для применения в раскрытых в настоящей заявке способах, общепринятая для взрослого субъекта, может составлять приблизительно 200 мг, 400 мг, от 30 мг до 2000 мг, от 100 мг до 1500 мг или от 150 мг до 1500 мг п.о., о.р.д. Данной ежедневной дозы можно достичь посредством однократного введения или нескольких введений.
[00100] Терапевтически эффективное количество или доза ингибитора CDK4 и/или CDK6, описанного в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), зависит от конкретного типа указанного ингибитора. Как правило, ежедневная доза ингибитора CDK4 и/или CDK6, описанного в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), варьирует от приблизительно 1 мг до приблизительно 1500 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 1200 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 1000 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 800 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 600 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 500 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 200 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 100 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 50 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 30 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 20 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 10 мг, от приблизительно 1 мг до приблизительно 5 мг, от приблизительно 50 мг до приблизительно 1500 мг, от приблизительно 100 мг до приблизительно 1200 мг, от приблизительно 150 мг до приблизительно 1000 мг, от приблизительно 200 мг до приблизительно 800 мг, от приблизительно 300 мг до приблизительно 600 мг, от приблизительно 350 мг до приблизительно 500 мг.
[00101] Абемациклиб
[00102] Введение доз RAD1901 с абемациклибом можно осуществлять с RAD1901 в дозе 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг в день. В частности, отмечают 200 мг, 400 мг, 500 мг, 600 мг, 800 мг и 1000 мг в день. При определенных обстоятельствах режим введения доз BID (д.р.д., два раза в день) является предпочтительным. Неожиданно длительный период полужизни RAD1901 у людей после п.о. введения делает данный вариант в особенности целесообразным. Соответственно, лекарственный препарат можно вводить в виде 200 мг д.р.д. - два раза в день (всего 400 мг суммарно в день), 250 мг д.р.д. (всего 500 мг суммарно в день), 300 мг д.р.д. (всего 600 мг суммарно в день), 400 мг д.р.д. (800 мг в день) или 500 мг д.р.д. (всего 1000 мг суммарно в день). Предпочтительным введением доз является пероральное введение. Доза абемациклиба может представлять собой от 50 мг до 500 мг в день или от 150 мг до 450 мг в день, и введение доз может быть ежедневным в циклах длительностью 28 дней или в течение менее 28 дней в циклах длительностью 28 дней, например, в течение 21 дня в цикле длительностью 28 дней или 14 дней в цикле длительностью 28 дней, или 7 дней в цикле длительностью 28 дней. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения абемациклиб вводят один раз в день или, предпочтительно, в режиме д.р.д., когда введение доз является пероральным. В случае введения доз д.р.д. дозы могут быть разделены 4 часами, 8 часами или 12 часами. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения абемациклиб вводят в дозе 150 мг д.р.д. перорально, причем рекомендуется, чтобы дозы были разделены интервалом в 12 часов.
[00103] Как было обнаружено и объяснено в настоящем изобретении, как представляется, существует значительная синергия между RAD1901 и ингибиторами cdk 4/6, и вследствие этого уменьшение дозы RAD 1901 и/или абемациклиба по сравнению с обычной рекомендуемой или одобренной дозой предусмотрено и описано в настоящей заявке. Например, RAD 1901 может быть рекомендован для лечения в форме монотерапии в дозах 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг или, более конкретно, в дозах 200 мг, 400 мг, 500 мг, 600 мг, 800 мг и 1000 мг в день. В комбинации уменьшение указанной дозы на указанную долю означает, что возможны дозы, на 25% - 75% меньшие, чем обычная доза. В качестве неограничивающего примера рекомендуемую дозу RAD1901 400 мг в день можно уменьшить до конечной дозы от 100 мг до 300 мг в день или 100 мг в день, 200 мг в день или 300 мг в день. Если дозу RAD1901 уменьшают, как описано, тот же процент уменьшения обычно используют вне зависимости от того, проводят ли введение доз д.р.д. или один раз в день. Например, дозу 400 мг д.р.д., уменьшенную на 50%, будут вводить в режиме 200 мг д.р.д. В некоторых исключениях уменьшение ежедневной рекомендуемой дозы д.р.д. может быть достаточным, чтобы сделать возможным введение суммарной ежедневной дозы в виде дозы, вводимой один раз в день. Например, нормальную дозу 300 мг д.р.д., которую вводят в комбинации с абемациклибом, можно уменьшить на 50%. Соответственно, дозу можно вводить в виде 150 мг д.р.д. или 300 мг один раз в день.
[00104] Аналогично, нормальную рекомендуемую дозу абемациклиба можно уменьшить при применении в комбинации с RAD1901. Дозу абемациклиба можно уменьшить и сочетать с нормальной рекомендованной для монотерапии дозой RAD1901 или уменьшенной дозой RAD1901, причем уменьшенная доза является на 25% - 75% меньшей, чем нормальная рекомендуемая доза, пример которой приведен непосредственно выше. Например, рекомендуемую дозу абемациклиба 150 мг д.р.д. можно ввести в виде дозы д.р.д., которая является на 25% - 75% меньшей, чем доза 150 мг д.р.д. Например, 150 мг абемациклиба д.р.д. можно уменьшить до дозы от 37,5 мг до 112,5 мг д.р.д. (общая дневная доза от 75 мг до 225 мг). В качестве альтернативы, может быть желательно уменьшить на некоторое количество частоту абемациклиба по сравнению с рекомендуемыми 28 днями в цикле. Например, частоту введения доз можно уменьшить до от 22 дней до 27 дней в цикле длительностью 28 дней или до 21 дня в цикле длительностью 28 дней, или частоту введения доз можно уменьшить до от 15 дней до 20 дней в цикле длительностью 28 дней или до 14 дней в цикле длительностью 28 дней, или частоту введения доз можно уменьшить до от 8 дней до 13 дней в цикле длительностью 28 дней или до всего 7 дней в цикле длительностью 28 дней. Дни введения доз могут являться последовательными или комбинированными по мере необходимости при данных обстоятельствах. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения общую дозу в течение интервала введения доз уменьшают на 25% - 75% от рекомендуемой дозы, и данное уменьшение может быть результатом менее частого введения доз, уменьшения дозы или комбинации указанных факторов. Например, рекомендуемый цикл введения доз 28 дней абемациклиба в дозе 150 мг д.р.д. (300 мг суммарно в день) приводит к общей дозе в течение 28 дней, составляющей 8400 мг (28 дней по 300 мг суммарно в день). Данное количество можно уменьшить до от 2100 мг в 28 дней до 6300 мг в 28 дней.
[00105] Рибоциклиб
[00106] Введение доз RAD1901 с рибоциклибом можно осуществлять с RAD1901 в дозах 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг в день. В частности, отмечают 200 мг, 400 мг, 500 мг, 600 мг, 800 мг и 1000 мг в день. При определенных обстоятельствах режим введения доз д.р.д. является предпочтительным. Неожиданно длительный период полужизни RAD1901 у людей после п.о. введения делает данный вариант в особенности целесообразным. Соответственно, лекарственный препарат можно вводить в виде 200 мг д.р.д. (400 мг суммарно в день), 250 мг д.р.д. (500 мг суммарно в день), 300 мг д.р.д. (600 мг суммарно в день), 400 мг д.р.д. (800 мг в день) или 500 мг д.р.д. (1000 мг суммарно в день). Предпочтительным введением доз является пероральное введение. Доза рибоциклиба может составлять от 200 мг до 1000 мг в день или от 250 мг до 750 мг в день, и введение доз может быть ежедневным в цикле длительностью 28 дней или менее 28 дней в цикле длительностью 28 дней, например, в течение 21 дня в цикле длительностью 28 дней или 14 дней в цикле длительностью 28 дней, или 7 дней в цикле длительностью 28 дней. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения дозу рибоциклиба вводят один раз в день, когда введение доз является пероральным. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения доза рибоциклиба для использования в комбинации с RAD1901 составляет 600 мг один раз в день, и интервал введения доз составляет 21 день в цикле длительностью 28 дней.
[00107] Как было обнаружено и объяснено в настоящей заявке, как представляется, существует значительная синергия между RAD1901 и ингибиторами cdk 4/6, и вследствие этого уменьшение дозы RAD 1901 и/или рибоциклиба по сравнению с обычной рекомендуемой или одобренной дозой предусмотрено и описано в настоящей заявке. Например, RAD 1901 может быть рекомендован для лечения в форме монотерапии в дозах 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг или, более конкретно, в дозах 200 мг, 400 мг, 500 мг, 600 мг, 800 мг и 1000 мг в день. В комбинации уменьшение указанной дозы на указанную долю означает, что возможны дозы, на 25% - 75% меньшие, чем обычная доза. В качестве неограничивающего примера рекомендуемую дозу RAD1901 400 мг в день можно уменьшить до конечной дозы от 100 мг до 300 мг в день или 100 мг в день, 200 мг в день или 300 мг в день. Если дозу RAD1901 уменьшают, как описано, тот же процент уменьшения обычно используют вне зависимости от того, проводят ли введение доз д.р.д. или один раз в день. Например, дозу 400 мг д.р.д., уменьшенную на 50%, будут вводить в режиме 200 мг д.р.д. В некоторых исключениях уменьшение ежедневной рекомендуемой дозы д.р.д. может быть достаточным, чтобы сделать возможным введение суммарной ежедневной дозы в виде дозы, вводимой один раз в день. Например, нормальную дозу д.р.д. 300 мг, которую вводят в комбинации с рибоциклибом, можно уменьшить на 50%. Соответственно, дозу можно вводить в виде 150 мг д.р.д. или 300 мг один раз в день.
[00108] Аналогично, нормальную рекомендуемую дозу рибоциклиба можно уменьшить при применении в комбинации с RAD1901. Дозу рибоциклиба можно уменьшить и сочетать с нормальной рекомендованной для монотерапии дозой RAD1901 или уменьшенной дозой RAD1901, причем уменьшенная доза является на 25% - 75% меньшей, чем нормальная рекомендуемая доза, пример которой приведен непосредственно выше. Например, рекомендуемую дозу рибоциклиба 600 мг о.р.д. можно ввести в виде дозы о.р.д., на 25% - 75% меньшей, чем доза 600 мг. Например, рекомендуемую дозу рибоциклиба 600 мг можно уменьшить до дозы от 150 мг до 450 мг. В качестве альтернативы, может быть желательно уменьшить на некоторое количество частоту рибоциклиба по сравнению с рекомендуемыми 21 днями из 28 дней в цикле. Например, частоту введения доз можно уменьшить до от 15 до 20 дней в цикле длительностью 28 дней или до 14 дней в цикле длительностью 28 дней, или частоту введения доз можно уменьшить до от 8 дней до 13 дней в цикле длительностью 28 дней или до 7 дней в цикле длительностью 28 дней. Дни введения доз могут являться последовательными или комбинированными по мере необходимости при данных обстоятельствах. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения общую дозу в течение интервала введения доз уменьшают на 25% - 75% от рекомендуемой дозы, и данное уменьшение может являться результатом менее частого введения доз, уменьшения дозы или комбинации указанных факторов. Например, рекомендуемый цикл введения доз 28 дней рибоциклиба (21 день в дозе 600 мг о.р.д.) приводит к общей дозе в течение 28 дней, составляющей 12600 мг (21 день введения по 600 мг суммарно в день). Данное количество можно уменьшить до от 3150 мг в цикле длительностью 28 дней до 9450 мг в цикле длительностью 28 дней.
[00109] Палбоциклиб
[00110] Введение доз RAD1901 с палбоциклибом можно осуществлять с RAD1901 в дозе 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг в день. В частности, отмечают 200 мг, 400 мг, 500 мг, 600 мг, 800 мг и 1000 мг в день. При определенных обстоятельствах режим введения доз д.р.д. является предпочтительным. Неожиданно длительный период полужизни RAD1901 у людей после п.о. введения делает данный вариант в особенности целесообразным. Соответственно, лекарственный препарат можно вводить в виде 200 мг д.р.д. (400 мг суммарно в день), 250 мг д.р.д. (500 мг суммарно в день), 300 мг д.р.д. (600 мг суммарно в день), 400 мг д.р.д. (800 мг в день) или 500 мг д.р.д. (1000 мг суммарно в день). Предпочтительным введением доз является пероральное введение. Доза палбоциклиба может представлять собой от 25 мг до 250 мг ежедневно или от 50 мг до 125 мг в день, или от 75 мг до 125 мг в день, или 75 мг в день, или 100 мг в день, или 125 мг в день. Введение доз может являться ежедневным в цикле длительностью 28 дней или менее 28 дней в цикле длительностью 28 дней, например, в течение 21 дня в цикле длительностью 28 дней или 14 дней в цикле длительностью 28 дней, или 7 дней в цикле длительностью 28 дней. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения дозы палбоциклиба вводят один раз в день, когда введение доз является пероральным. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения доза палбоциклиба для использования в комбинации с RAD1901 составляет 125 мг один раз в день, и интервал введения доз составляет 21 день в цикле длительностью 28 дней, или 100 мг один раз в день, и интервал введения доз составляет 21 день в цикле длительностью 28 дней, или 75 мг один раз в день, и интервал введения доз составляет 21 день в цикле длительностью 28 дней.
[00111] Как было обнаружено и объяснено в настоящей заявке, как представляется, существует значительная синергия между RAD1901 и палбоциклибом, и вследствие этого уменьшение дозы RAD 1901 и/или палбоциклиба по сравнению с обычной рекомендуемой или одобренной дозой предусмотрено и описано в настоящей заявке. Например, RAD 1901 может быть рекомендован для лечения в форме монотерапии в дозах 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000 мг или, более конкретно, в дозах 200 мг, 400 мг, 500 мг, 600 мг, 800 мг и 1000 мг в день. В комбинации уменьшение указанной дозы на указанную долю означает, что возможны дозы, на 25% - 75% меньшие, чем обычная доза. В качестве неограничивающего примера рекомендуемую дозу RAD1901 400 мг в день можно уменьшить до конечной дозы от 100 мг до 300 мг в день или 100 мг в день, 200 мг в день или 300 мг в день. Если дозу RAD1901 уменьшают, как описано, тот же процент уменьшения обычно используют вне зависимости от того, проводят ли введение доз д.р.д. или один раз в день. Например, дозу 400 мг д.р.д., уменьшенную на 50%, будут вводить в режиме 200 мг д.р.д. В некоторых исключениях уменьшение ежедневной рекомендуемой дозы д.р.д. может являться достаточным, чтобы сделать возможным введение суммарной ежедневной дозы в виде дозы, вводимой один раз в день. Например, нормальную дозу д.р.д. 300 мг, которую вводят в комбинации с палбоциклибом, можно уменьшить на 50%. Соответственно, дозу можно вводить в виде 150 мг д.р.д. или 300 мг один раз в день.
[00112] Аналогично, нормальную рекомендуемую дозу палбоциклиба можно уменьшить при применении в комбинации с RAD1901. Дозу палбоциклиба можно уменьшить и сочетать с нормальной рекомендованной для монотерапии дозой RAD1901 или уменьшенной дозой RAD1901, причем уменьшенная доза является на 25% - 75% меньшей, чем нормальная рекомендуемая доза, пример которой приведен непосредственно выше. Например, рекомендуемую дозу палбоциклиба 125 мг о.р.д. можно ввести в виде дозы о.р.д., на 25% - 75% меньшей, чем доза 125 мг. Например, рекомендуемую дозу палбоциклиба 125 мг можно уменьшить до дозы от 31,25 мг до 93,75 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения можно использовать конкретное заранее определенное уменьшение дозы от 125 мг до 100 мг в день или от 125 мг до 75 мг в день. В качестве альтернативы, может быть желательно уменьшить на некоторое количество частоту палбоциклиба по сравнению с рекомендуемыми 21 днями из 28 дней в цикле. Например, частоту введения доз можно уменьшить до от 15 до 20 дней в цикле длительностью 28 дней или до 14 дней в цикле длительностью 28 дней, или частоту введения доз можно уменьшить до от 8 дней до 13 дней в цикле длительностью 28 дней или до 7 дней в цикле длительностью 28 дней. Дни введения доз могут являться последовательными или комбинированными по мере необходимости при данных обстоятельствах. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения общую дозу в течение интервала введения доз уменьшают на 25% - 75% от рекомендуемой дозы, и данное уменьшение может являться результатом менее частого введения доз, уменьшения дозы или комбинации указанных факторов. Например, рекомендуемый цикл введения доз 28 дней палбоциклиба (21 день в дозе 125 мг о.р.д.) приводит к общей дозе в течение 28 дней 2625 мг (21 день введения по 125 мг суммарно в день). Данное количество можно уменьшить до от 656,25 мг в цикле длительностью 28 дней до 1968,75 мг в цикле длительностью 28 дней. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения рекомендуемую общую цикловую дозу в течение 28 дней 2625 мг можно уменьшить до 2100 мг в цикле длительностью 28 дней.
[00113] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения в терапевтически эффективном количестве комбинации можно использовать терапевтически эффективное количество любого соединения, вводимого в монотерапии. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения в связи со значительно улучшенным синергическим терапевтическим эффектом, который обеспечивает комбинация, терапевтически эффективные количества RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения и ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), при введении в комбинации могут являться меньшими, чем терапевтически эффективные количества RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения и ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), требуемые при введении в монотерапии; и одно или оба соединения можно вводить в дозе, меньшей, чем доза, при которой данные соединения будут в норме вводить при раздельном введении. Не опираясь на какую-либо конкретную теорию, считают, что комбинированная терапия обеспечивает значительно улучшенный эффект посредством уменьшения дозы по меньшей мере одного или всех RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения и ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), посредством этого устраняя или облегчая нежелательные токсичные побочные эффекты.
[00114] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения терапевтически эффективное количество RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения при введении в качестве части комбинации составляет от приблизительно 30% до приблизительно 200%, от приблизительно 40% до приблизительно 200%, от приблизительно 50% до приблизительно 200%, от приблизительно 60% до приблизительно 200%, от приблизительно 70% до приблизительно 200%, от приблизительно 80% до приблизительно 200%, от приблизительно 90% до приблизительно 200%, от приблизительно 100% до приблизительно 200%, от 30% до приблизительно 150%, от приблизительно 40% до приблизительно 150%, от приблизительно 50% до приблизительно 150%, от приблизительно 60% до приблизительно 150%, от приблизительно 70% до приблизительно 150%, от приблизительно 80% до приблизительно 150%, от приблизительно 90% до приблизительно 150%, от приблизительно 100% до приблизительно 150%, от приблизительно 30% до приблизительно 120%, от приблизительно 40% до приблизительно 120%, от приблизительно 50% до приблизительно 120%, от приблизительно 60% до приблизительно 120%, от приблизительно 70% до приблизительно 120%, от приблизительно 80% до приблизительно 120%, от приблизительно 90% до приблизительно 120%, от приблизительно 100% до приблизительно 120%, от 30% до приблизительно 110%, от приблизительно 40% до приблизительно 110%, от приблизительно 50% до приблизительно 110%, от приблизительно 60% до приблизительно 110%, от приблизительно 70% до приблизительно 110%, от приблизительно 80% до приблизительно 110%, от приблизительно 90% до приблизительно 110% или от приблизительно 100% до приблизительно 110% от терапевтически эффективного количества RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения при введении в монотерапии. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения терапевтически эффективное количество ингибитора CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), при введении в качестве части комбинации составляет от приблизительно 30% до приблизительно 200%, от приблизительно 40% до приблизительно 200%, от приблизительно 50% до приблизительно 200%, от приблизительно 60% до приблизительно 200%, от приблизительно 70% до приблизительно 200%, от приблизительно 80% до приблизительно 200%, от приблизительно 90% до приблизительно 200%, от приблизительно 100% до приблизительно 200%, от 30% до приблизительно 150%, от приблизительно 40% до приблизительно 150%, от приблизительно 50% до приблизительно 150%, от приблизительно 60% до приблизительно 150%, от приблизительно 70% до приблизительно 150%, от приблизительно 80% до приблизительно 150%, от приблизительно 90% до приблизительно 150%, от приблизительно 100% до приблизительно 150%, от приблизительно 30% до приблизительно 120%, от приблизительно 40% до приблизительно 120%, от приблизительно 50% до приблизительно 120%, от приблизительно 60% до приблизительно 120%, от приблизительно 70% до приблизительно 120%, от приблизительно 80% до приблизительно 120%, от приблизительно 90% до приблизительно 120%, от приблизительно 100% до приблизительно 120%, от 30% до приблизительно 110%, от приблизительно 40% до приблизительно 110%, от приблизительно 50% до приблизительно 110%, от приблизительно 60% до приблизительно 110%, от приблизительно 70% до приблизительно 110%, от приблизительно 80% до приблизительно 110%, от приблизительно 90% до приблизительно 110% или от приблизительно 100% до приблизительно 110% от терапевтически эффективного количества ингибитора CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), при введении в монотерапии.
[00115] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения варианты рака или опухоли являются устойчивыми ER-зависимыми вариантами рака или опухолями (например, содержащими мутантные домены связывания ER (например, ERα, содержащий одну или несколько мутаций, включая, но не ограничиваясь указанными, Y537X1, где X1 представляет собой S, N или С, D538G, L536Х2, где Х2 представляет собой R или Q, Р535Н, V534E, S463P, V392I, E380Q и комбинации указанных мутаций), варианты рака или опухоли, сверхэкспрессирующие ER, или случаи, в которых пролиферация опухоли и/или рака становится лиганд-независимой, или опухоли и/или варианты рака, которые прогрессируют при лечении другим ССРЭ (например, фулвестрантом, TAS-108 (SR16234), ZK191703, RU58668, GDC-0810 (ARN-810), GW5638/DPC974, SRN-927, ICI182782 и AZD9496), ингибиторами Неr2 (например, трастузумабом, лапатинибом, аботрастузумабом эмтанзином и/или пертузумабом), химиотерапией (например, абраксаном, адриамицином, карбоплатином, цитоксаном, даунорубицином, доксилом, элленсом, фторурацилом, гемзаром, хелавеном, икземпрой, метотрексатом, митомицином, микоксантроном, навельбином, таксолом, таксотером, тиотепой, винкристином и кселодой), ингибитором ароматазы (например, анастрозолом, эксеместаном и летрозолом), селективными модуляторами рецептора эстрогенов (например, тамоксифеном, ралоксифеном, лазофоксифеном и/или торемифеном), ингибитором ангиогенеза (например, бевацизумабом) и/или ритуксимабом.
[00116] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения доза RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения в комбинации с ингибитором CDK4 и/или CDK6, описанным в настоящей заявке (например, рибоциклибом, абемациклибом и палбоциклибом), для применения в способах, раскрытых в настоящей заявке, общепринятая для взрослого субъекта, может составлять от приблизительно 30 мг до 2000 мг, от 100 мг до 1500 мг или от 150 мг до 1500 мг п.о., о.р.д. Данной ежедневной дозы можно достичь посредством однократного введения или нескольких введений.
[00117] Комбинацию одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или его сольватов (например, гидрата) или солей можно вводить субъекту один раз или несколько раз. Согласно вариантам реализации настоящего изобретения, в которых соединения вводят несколько раз, данные соединения можно вводить с заданным интервалом, например, ежедневно, через день, еженедельно или ежемесячно. В качестве альтернативы, данные соединения можно вводить с нерегулярными интервалами, например, по мере необходимости в зависимости от симптомов, здоровья пациента и т.п.
(3) Состав
[00118] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли и ингибиторы CDK4 и/или CDK6, описанные в настоящей заявке (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), вводят в отдельных составах. Согласно определенным из данных вариантов реализации настоящего изобретения составы могут относиться к одному типу. Например, оба состава могут быть разработаны для перорального введения (например, посредством двух отдельных драже) или для инъекции (например, посредством двух отдельных инъекционных составов). Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и ингибиторы CDK4 и/или CDK6, описанные в настоящей заявке (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), могут быть приготовлены в состав в различных типах составов. Например, одно соединение может находиться в составе, разработанном для перорального введения, в то время как другое находится в составе, разработанном для инъекции.
[00119] Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли и ингибиторы CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), описанные настоящей заявке, вводят в качестве части единого состава. Например, RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и ингибиторы CDK4 и/или CDK6, описанные в настоящей заявке (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), приготовлены в состав в одном драже для перорального введения или в разовой дозе для инъекции. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения в настоящей заявке предложены комбинированные составы, содержащие RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и один или несколько ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб). Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения введение соединений в одном составе улучшает соблюдение больным режима и схемы лечения.
[00120] Терапевтически эффективное количество каждого соединения при введении в комбинации может являться меньшим, чем терапевтически эффективное количество каждого соединения, вводимого в монотерапии.
[00121] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения состав, содержащий RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли, один или несколько ингибиторов CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) или как RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли, так и один или несколько ингибиторов CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), может также содержать одно или несколько фармацевтических вспомогательных веществ, носителей, вспомогательных средств и/или консервантов.
[00122] RAD1901 или его сольваты (например, гидрат) или соли и ингибиторы CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) для применения в способах, раскрытых в настоящей заявке, можно приготовить в состав в единичных лекарственных формах, которые означают физически обособленные единицы, подходящие в качестве однократных доз для субъектов, лечение которых проводят, причем каждая единица содержит заранее определенное количество активного вещества, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, необязательно в сочетании с подходящим фармацевтическим носителем. Единичная дозированная форма может предназначаться для однократной ежедневной дозы или одной из множества ежедневных доз (например, приблизительно от 1 до 4 или более раз каждый день). Когда используют несколько ежедневных доз, единичная дозированная форма для каждой дозы может быть одинаковой или разной. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения соединения могут быть приготовлены в состав для контролируемого высвобождения.
[00123] RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и соли или сольваты ингибиторов CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба) для применения в раскрытых в настоящей заявке способах можно приготовить в состав согласно любому доступному общепринятому способу. Примеры предпочтительных лекарственных форм включают таблетку, порошок, измельченную гранулу, гранулу, покрытую таблетку, капсулу, сироп, пастилку, лекарственную форму для ингаляции, суппозиторий, инъекционное вещество, мазь, офтальмологическую мазь, глазные капли, назальные капли, ушные капли, горячий компресс, лосьон и т.п. В составе можно использовать обычно применяемые добавки, такие как разбавитель, связывающее вещество, разрыхляющее вещество, смазывающее вещество, красящее вещество, ароматизирующее вещество и, в случае необходимости, стабилизатор, эмульгирующее вещество, вещество, способствующее всасыванию, поверхностно-активное вещество, регулятор рН, антисептическое вещество, антиоксидант и т.п. Помимо этого, приготовление в состав также проводят посредством объединения композиций, которые, как правило, используют в качестве исходного материала для приготовления фармацевтических составов согласно общепринятым способам. Примеры данных композиций включают, например, (1) масло, такое как соевое масло, говяжье сало и синтетический глицерид; (2) углеводород, такой как жидкий парафин, сквалан и твердый парафин; (3) сложноэфирное масло, такое как октилдодецил миристиновая кислота и изопропил миристиновая кислота; (4) высший спирт, такой как цетостеариловый спирт и бегениловый спирт; (5) кремнийорганическую смолу; (6) кремнийорганическое масло; (7) поверхностно-активное вещество, такое как полиоксиэтиленовый эфир жирной кислоты, сорбитановый эфир жирной кислоты, глицериновый эфир жирной кислоты, полиоксиэтиленовый сорбитановый эфир жирной кислоты, твердое полиоксиэтиленовое касторовое масло и полиоксиэтиленовый полиоксипропиленовый блок-сополимер; (8) водорастворимую макромолекулу, такую как гидроксиэтилцеллюлоза, полиакриловая кислота, карбоксивиниловый полимер, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон и метилцеллюлоза; (9) низший спирт, такой как этанол и изопропанол; (10) многовалентный спирт, такой как глицерин, пропиленгликоль, дипропиленгликоль и сорбитол; (11) сахар, такой как глюкоза и тростниковый сахар; (12) неорганический порошок, такой как безводная кремниевая кислота, магний-алюминий силикат и силикат алюминия; (13) очищенную воду и т.п. Добавки для применения в вышеуказанных составах могут включать в качестве разбавителя, например, 1) лактозу, кукурузный крахмал, сахарозу, глюкозу, маннитол, сорбитол, кристаллическую целлюлозу, диоксид кремния; 2) в качестве связывающего вещества - поливиниловый спирт, поливиниловый эфир, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, аравийскую камедь, трагакантовую камедь, желатин, шеллак, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, поливинилпирролидон, блок-сополимер полипропиленгликоль-полиоксиэтилен, меглумин, цитрат кальция, декстрин, пектин и т.п.; 3) в качестве разрыхлителей - крахмал, агар, желатиновый порошок, кристаллическую целлюлозу, карбонат кальция, бикарбонат натрия, цитрат кальция, декстрин, пектин, карбоксиметилцеллюлозу/кальций и т.п.; 4) в качестве смазывающего вещества - стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль, диоксид кремния, гидрогенированное растительное масло и т.п.; 5) любые красители, добавление которых является фармацевтически приемлемым, являются подходящими в качестве красителей; 6) в качестве ароматизирующего вещества - какао-порошок, ментол, ароматизатор, масло перечной мяты, порошок корицы; 7) антиоксиданты, добавление которых является фармацевтически приемлемым, такие как аскорбиновая кислота или альфа-тофенол.
[00124] Один или несколько ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), и RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения для применения в раскрытых в настоящей заявке способах можно приготовить в состав в фармацевтической композиции в виде любого одного или нескольких из активных соединений, описанных в настоящей заявке, и физиологически приемлемого носителя (также обозначаемый фармацевтически приемлемый носитель или раствор, или разбавитель). Такие носители и растворы включают фармацевтически приемлемые соли и сольваты соединений, используемые в способах согласно настоящему изобретению, и смеси, содержащие два или более таких соединений, фармацевтически приемлемые соли соединений и фармацевтически приемлемые сольваты соединений. Такие композиции получают в соответствии с приемлемыми фармацевтическими процедурами, такими, как описанные в руководстве Pharmaceutical Sciences, 17th edition, ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Eaton, Pa. (1985), которое включено в настоящую заявку посредством ссылки.
[00125] Термин «фармацевтически приемлемый носитель» означает носитель, который не вызывает аллергической реакции или другого нежелательного эффекта в отношении пациентов, которым его вводят, и является совместимым с другими компонентами в составе. Фармацевтически приемлемые носители включают, например, фармацевтические разбавители, вспомогательные вещества или носители, соответствующим способом выбранные в соответствии с предполагаемой формой введения и с учетом общепринятых фармацевтических практик. Например, твердые носители/разбавители включают, но не ограничены указанными, камедь, крахмал (например, кукурузный крахмал, прежелатинизированный крахмал), сахар (например, лактозу, маннитол, сахарозу, декстрозу), целлюлозное вещество (например, микрокристаллическую целлюлозу), акрилат (например, полиметилакрилат), карбонат кальция, оксид магния, тальк или смеси указанных веществ. Фармацевтически приемлемые носители могут также включать незначительные количества вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие вещества, консерванты или буферы, которые увеличивают срок годности или эффективность терапевтического средства.
[00126] Один или несколько ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), и RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения в свободной форме могут превращаться в соль общепринятыми способами. Термин «соль», используемый в настоящей заявке, не ограничен, при условии, что соль образована с RAD1901 или сольватами (например, гидратом) или солями указанного соединения и является фармакологически приемлемой; предпочтительные примеры солей включают галоидоводородную соль (например, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид и т.п.), неорганическую кислую соль (например, сульфат, нитрат, перхлорат, фосфат, карбонат, бикарбонат и т.п.), органическую карбоксилатную соль (например, ацетатную соль, малатную соль, тартратную соль, фумаратную соль, цитратную соль и т.п.), органическую сульфонатную соль (например, метансульфонатную соль, этансульфонатную соль, бензолсульфонатную соль, толуенсульфонатную соль, камфорсульфонатную соль и т.п.), соль аминокислоты (например, аспартатную соль, глутаматную соль и т.п.), четвертичную аммониевую соль, соль щелочного металла (например, натриевую соль, калиевую соль и т.п.), соль щелочноземельного металла (магниевую соль, кальциевую соль и т.п.) и т.п. Помимо этого, гидрохлоридная соль, сульфатная соль, метансульфонатная соль, ацетатная соль и т.п. являются предпочтительными в качестве «фармакологически приемлемых солей» соединения согласно настоящему изобретению.
[00127] Изомеры RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения и/или ингибиторов CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), описанных в настоящей заявке (например, геометрические изомеры, оптические изомеры, ротамеры, таутомеры и т.п.), можно очистить с применением общеизвестных средств разделения, включая, например, перекристаллизацию, оптическое разрешение, такое как метод на основе диастереомерной соли, метод фракционирования ферментов, различные варианты хроматографии (например, тонкослойная хроматография, колоночная хроматография, хроматография на стекле и т.п.) с получением отдельного изомера. Термин «отдельный изомер» в настоящей заявке включает не только изомер, который характеризуется чистотой 100%, но также изомер, содержащий изомер, отличный от целевого, который существует даже после общепринятого процесса очистки. Иногда существует кристаллический полиморф RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения и/или ингибитора CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и все кристаллические полиморфы указанного соединения включены в настоящее изобретение. Кристаллический полиморф иногда является отдельным, а иногда представляет собой смесь, и оба указанных варианта включены в настоящую заявку.
[00128] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и/или ингибитор CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) могут находиться в форме пролекарства; это означает, что данное соединение должно подвергнуться некоторому изменению (например, окислению или гидролизу) для достижения своей активной формы. В качестве альтернативы, RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и/или ингибитор CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) может представлять собой соединение, полученное посредством преобразования родительского пролекарства в его активную форму.
(4) Путь введения
[00129] Пути введения RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения и/или ингибиторов CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), раскрытых в настоящей заявке, включают, но не ограничены указанными, местное введение, пероральное введение, внутрикожное введение, внутримышечное введение, интраперитонеальное введение, внутривенное введение, внутрипузырную инфузию, подкожное введение, трансдермальное введение и чресслизистое введение.
(5) Профилирование генов
[00130] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения способы ингибирования роста опухоли или регрессии опухоли, представленные в настоящей заявке, также включают профилирование гена субъекта, причем ген, профиль которого получают, представляет собой один или несколько генов, которые выбраны из группы, состоящей из ABL1, АКТ1, АКТ2, ALK, АРС, AR, ARID1A, ASXL1, ATM, AURKA, ВАР, ВАР1, BCL2L11, BCR, BRAF, BRCA1, BRCA2, CCND1, CCND2, CCND3, CCNE1, CDH1, CDK4, CDK6, CDK8, CDKN1A, CDKN1B, CDKN2A, CDKN2B, СЕВРА, CTNNB1, DDR2, DNMT3A, E2F3, EGFR, EML4, ЕРНВ2, ERBB2, ERBB3, ESR1, EWSR1, FBXW7, FGF4, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FLT3, FRS2, HIF1A, HRAS, IDH1, IDH2, IGF1R, JAK2, KDM6A, KDR, KIF5B, KIT, KRAS, LRP1B, МАР2K1, МАР2K4, MCL1, MDM2, MDM4, MET, MGMT, MLL, MPL, MSH6, MTOR, МYС, NF1, NF2, NKX2-1, NOTCH1, NPM, NRAS, PDGFRA, PIK3CA, PIK3R1, PML, PTEN, PTPRD, RARA, RBI, RET, RICTOR, ROS1, RPTOR, RUNX1, SMAD4, SMARCA4, SOX2, STK11, TET2, TP53, TSC1, TSC2 и VHL.
[00131] Согласно некоторым вариантам реализации в настоящем изобретении предложен способ лечения субпопуляции пациентов, страдающих от рака молочной железы, причем указанная субпопуляция характеризуется увеличенной экспрессией одного или нескольких из генов, раскрытых выше, и лечение указанной субпопуляции эффективной дозой комбинации одного или нескольких ингибиторов CDK4 и/или CDK6, описанных в настоящей заявке (например, рибоциклиба, абемациклиба и палбоциклиба), и RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения согласно вариантам реализации введения доз, описанным в настоящем изобретении.
(6) Корректировка дозы
[00132] Помимо установления способности RAD1901 ингибировать рост опухоли результаты, представленные в настоящей заявке, продемонстрировали, что RAD1901 ингибирует связывание эстрадиола с ER в матке и гипофизе (пример III(A)). В данных экспериментах связывание эстрадиола с ER в ткани матки и гипофиза оценивали посредством визуализации ФЭС-ПЭТ. После лечения RAD1901 наблюдаемый уровень связывания ER находился на фоновых уровнях или ниже фоновых уровней. Данные результаты позволили установить, что антагонистический эффект RAD1901 в отношении активности ER можно оценивать с применением сканирования в реальном времени. На основании данных результатов в настоящей заявке представлены способы мониторинга эффективности лечения RAD1901 или сольватами (например, гидратом) или солями указанного соединения в комбинированной терапии, раскрытой в настоящей заявке, посредством измерения связывания эстрадиола с ER в одной или нескольких тканях-мишенях, причем уменьшение или исчезновение связывания означает эффективность.
[00133] Также предложены способы корректировки дозы RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения в комбинированной терапии, раскрытой в настоящей заявке, на основании связывания эстрадиола с ER. Согласно определенным вариантам реализации данных способов связывание измеряют в определенной точке после одного или нескольких введений первой дозы соединения. Если воздействие на связывание эстрадиола с ER отсутствует или демонстрирует уменьшение ниже заранее определенного порога (например, уменьшение связывания по сравнению с исходным уровнем составляет менее 5%, менее 10%, менее 20%, менее 30% или менее 50%), первую дозу считают слишком низкой. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения данные способы включают дополнительный этап введения увеличенной второй дозы соединения. Данные этапы можно повторить с дозой, которую периодически увеличивают до достижения желаемого уменьшения связывания эстрадиола с ER. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения данные этапы можно включить в способы ингибирования роста опухоли, представленные в настоящей заявке. В данных способах связывание эстрадиола с ER может выступать в качестве посредника для ингибирования роста опухоли или в качестве дополнительного средства оценки ингибирования роста. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения данные способы можно использовать в сочетании с введением RAD1901 или сольватов (например, гидрата) или солей указанного соединения для целей, отличных от ингибирования роста опухоли, включая, например, ингибирование пролиферации раковых клеток.
[00134] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения в настоящей заявке представлены способы корректировки дозы RAD1901 или соли или сольвата (например, гидрата) указанного соединения в комбинированной терапии, причем указанный способ включает:
(1) введение первой дозы RAD1901 или соли или сольвата (например, гидрата) указанного соединения (например, от приблизительно 350 до приблизительно 500 или от приблизительно 200 до приблизительно 600 мг/день) в течение 3, 4, 5, 6 или 7 дней;
(2) обнаружение активности связывания эстрадиола с ER, например, с применением визуализации ФЭС-ПЭТ, как раскрыто в настоящей заявке; причем:
(i) если активность связывания ER является необнаруживаемой или находится ниже уровня заранее определенного порога, продолжение введения первой дозы (т.е. сохранение уровня дозы); или
(ii) если активность связывания ER является обнаруживаемой или находится выше уровня заранее определенного порога, введение второй дозы, которая является большей, чем первая доза (например, первая доза плюс от приблизительно 50 до приблизительно 200 мг) в течение 3, 4, 5, 6 или 7 дней, затем переход к этапу (3);
(3) обнаружение активности связывания эстрадиола с ER, например, с применением визуализации ФЭС-ПЭТ, как раскрыто в настоящей заявке; причем
(i) если активность связывания ER является необнаруживаемой или находится ниже уровня заранее определенного порога, продолжение введения второй дозы (т.е. сохранение уровня дозы); или
(ii) если активность связывания ER является обнаруживаемой или находится выше уровня заранее определенного порога, введение третьей дозы, которая является большей, чем вторая доза (например, второй дозы плюс от приблизительно 50 до приблизительно 200 мг) в течение 3, 4, 5, 6 или 7 дней, затем переход к этапу (4);
(4) повторение вышеуказанных этапов с использованием четвертой дозы, пятой дозы и т.д. до тех пор, пока не будет обнаруживаться какая-либо активность связывания ER.
[00135] Согласно определенным вариантам реализации настоящее изобретение включает применение визуализации ПЭТ для обнаружения и/или лечения дозами вариантов рака, чувствительных к ER или устойчивых к ER.
(7) Комбинации для способов, раскрытых в настоящей заявке
[00136] Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей RAD1901 или сольваты (например, гидрат) или соли указанного соединения и/или ингибиторы CDK4 и/или CDK6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб), раскрытые в настоящей заявке, в терапевтически эффективном количестве, как раскрыто в настоящей заявке, для комбинированных способов, изложенных в настоящей заявке.
Взаимодействия RAD1901-ERα
(1) Мутантный ERα в ER-положительных образцах опухоли молочной железы от пациентов, которые получали по меньшей мере одну линию эндокринного лечения
[00137] В пяти исследованиях, о которых сообщалось в последние два года, секвенировали в совокупности 187 метастазирующих ER-положительных образцов опухоли молочной железы от пациентов, которые получали по меньшей мере одну линию эндокринного лечения, и у 39 пациентов (21%) были обнаружены мутации ЛСД ER (Jeselsohn). Шесть наиболее частых мутаций ЛСД среди 39 пациентов показаны на фигуре 39 по материалам публикации Jeselsohn.
[00138] Частота всех мутаций ЛСД обобщена в таблице 9.
[00139] Компьютерное моделирование продемонстрировало, что взаимодействия RAD1901-ERα, вероятно, не нарушаются у мутантов ЛСД ERα, например, у мутанта Y537X, где X представлял собой S, N или С; D538G; и S463P, на который приходится приблизительно 81,7% мутаций ЛСД, обнаруженных в недавнем исследовании метастазирующих ER-положительных образцов опухоли молочной железы от пациентов, которые получали по меньшей мере одну линию эндокринного лечения (таблица 10, пример V).
[00140] В настоящей заявке представлены комплексы и кристаллы RAD1901, присоединенного к ERα и/или мутантному ERα, причем мутантный ERα содержит одну или несколько мутаций, включая, но не ограничиваясь указанными, Y537X1, где X1 представляет собой S, N или С, D538G, L536X2, где Х2 представляет собой R или Q, Р535Н, V534E, S463P, V392I, E380Q, и комбинации указанных мутаций.
[00141] Согласно определенным вариантам реализации способов, представленных в настоящей заявке, ЛСД ERα и мутантного ERα содержит AF-2. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения ЛСД содержит аминокислоты 299-554 ERα или состоит или состоит по существу из указанных аминокислот. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения ЛСД мутантного ERα содержит одну или несколько мутаций, включая, но не ограничиваясь указанными, Y537X1, где X1 представляет собой S, N или С, D538G, L536X2, где Х2 представляет собой R или Q, Р535Н, V534E, S463P, V392I, E380Q, и комбинации указанных вариантов. Термин «и/или» в настоящей заявке включает как случай «и», так и случай «или».
[00142] Следующие примеры приведены для лучшей иллюстрации заявленного изобретения, и их не следует истолковывать как ограничивающие объем настоящего изобретения. В тех случаях, когда упоминаются конкретные материалы, данные упоминания приведены исключительно для целей иллюстрации и не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Специалист в данной области техники может разработать эквивалентные способы или реактивы без приложения изобретательских усилий и не выходя за пределы объема настоящего изобретения. Следует понимать, что в процедуры, описанные в настоящей заявке, могут быть внесены многочисленные вариации без отклонения от объема настоящего изобретения. Авторы настоящего изобретения считают, что такие вариации включены в объем настоящего изобретения.
Примеры
Материалы и методы
Исследуемые соединения
[00143] RAD1901, использованный в примерах ниже, представляет собой дигидрохлорид (6R)-6-(2-(N-(4-(2-(этиламино)этил)бензил)-N-этиламино)-4-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидронафтален-2-ола, произведенный компанией IRIX Pharmaceuticals, Inc. (Флоренция, Южная Каролина). RAD1901 хранили в виде сухого порошка, приготовленного в состав для применения в виде гомогенной суспензии в 0,5% (масс./об.) метилцеллюлозы в деионизированной воде, и в случае моделей на животных вводили п.о. Тамоксифен, ралоксифен и эстрадиол (Е2) получали в компании Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури), и вводили посредством подкожной инъекции. Фулвестрант получали в компании Tocris Biosciences (Миннеаполис, Миннесота) и вводили посредством подкожной инъекции. Другие лабораторные реактивы заказывали в компании Sigma-Aldrich, если не указано обратное.
Линии клеток
[00144] Клетки MCF-7 (метастазирующей аденокарциномы молочной железы человека) заказывали в Американской коллекции типовых клеточных культур (Роквилл, Мэриленд) и общепринятым способом поддерживали в не содержащей феноловый красный минимальной питательной среде (minimal essential medium, MEM), содержащей 2 мМ L-глутамина и ССР (сбалансированный солевой раствор) Эрла, 0,1 мМ заменимых аминокислот и 1 мМ пирувата натрия с добавлением 0,01 мг/мл инсулина быка и 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния) при содержании СО2 5%.
[00145] Клетки T47D культивировали в СO2-инкубаторе при содержании СО2 5% в чашках размером 10 см до конфлюэнтности, составляющей приблизительно 75%, в среде роста RPMI с добавлением 10% ЭТС (эмбриональной телячьей сыворотки) и 5 мкг/мл инсулина человека.
Ксенотрансплантатные модели in vivo
[00146] Всех мышей содержали в стерильных условиях в индивидуально вентилируемых клетках со стерилизованным и не содержащим пыли наполнителем, с доступом к стерилизованной пище и воде без ограничения, при цикле темноты/света (циркадный цикл искусственного света 12-14 часов) и при контролируемой комнатной температуре и влажности. Опухоли измеряли два раза в неделю с помощью штангенциркуля с нониусом, и объемы рассчитывали с применением формулы: (L*W2)*0,52.
PDx модели
[00147] Некоторые примеры полученных от пациентов ксенотрансплантатных моделей (PDx моделей) показаны на фигуре 1. PDx модели с полученной от пациента опухолью рака молочной железы устанавливали из жизнеспособной ткани опухоли человека или жидкости, которую перевивали сериями в животных (бестимусные мыши (Nu (NCF)-Foxn1nu)) ограниченное количество раз для поддержания гетерогенности опухоли. Перед проведением исследования регистрировали объемы опухолей для каждого эксперимента, начиная приблизительно за одну неделю до предполагаемой даты начала. Когда опухоли достигали соответствующего диапазона исходного объема опухоли (ИОО) (150-250 мм3), животных рандомизировали на группы лечения и контроля и начинали введение доз (день 0, 8-10 субъектов в каждой группе); животных во всех исследованиях отслеживали индивидуально в течение всего эксперимента. Изначальное введение доз начинали в день 0; животным во всех группах вводили дозы по массе (0,01 мл на грамм; 10 мл/кг). Каждая группа получала лечение наполнителем (контроль, п.о., о.р.д. до конечного критерия оценки), тамоксифеном (1 мг/субъекта, п.к., о.р.д.д. (один раз в два дня) до конечного критерия оценки), фулвестрантом (Фаслодекс®; 1 мг/субъекта или 3 мг/субъекта при необходимости, п.к., о.р.н. X 5 и увеличивали при необходимости) или RAD1901 (30, 60 или 120 мг/кг субъекта, п.о., о.р.д. до конечного критерия оценки), как указано, с дня 0. Период лечения длился в течение 56-60 дней в зависимости от моделей. В питьевую воду для данных PDx моделей добавляли 17β-эстрадиол.
Эффективность средства
[00148] Для всех исследований, начиная с дня 0, размеры опухоли измеряли цифровым штангенциркулем, и данные, включая отдельные и средние расчетные объемы опухолей (средний ОО (объем опухоли) ± СОС, стандартная ошибка среднего), записывали для каждой группы; объем опухоли рассчитывали с применением формулы из публикации (Yasui et al. Invasion Metastasis 17:259-269 (1997)), которая включена в настоящую заявку посредством ссылки): ОО = ширина2 × длина × 0,52. Анализ каждой группы или исследование прекращали, когда расчетный средний объем опухоли группы достигал конечной точки объема опухоли (ОО) (конечная точка времени составляла 60 дней; и конечная точка объема составляла среднее значение для группы, составляющее 2 см3); отдельных мышей, объем опухоли которых достигал 2 см3 или более, исключали из исследования, а итоговое измерение включали в среднее значение для группы до тех пор, пока среднее значение не достигало конечной точки объема, или исследование не достигало конечной точки времени.
Расчеты эффективности и статистический анализ
[00149] Значения % ингибирования роста опухоли (%ИРО) рассчитывали в одной временной точке (когда контрольная группа достигала конечной точки объема опухоли или конечной точки времени) и приводили для каждой группы лечения (Т) по сравнению с контролем (С) с применением исходных (i) и конечных (f) измерений опухоли по формуле (In vivo methods for screening and preclinical testing. In: Teicher B, ed., Anticancer Drug Development Guide. Totowa, NJ: Humana. 2004: 99-123): %ИРО=1-Tf-Ti/Cf-Ci.
Статистический анализ
[00150] Исследования ИРО - однофакторный дисперсионный анализ ANOVA + критерий множественного сравнения Даннета (Corbett ТН et al).
Отбор образца
[00151] Опухоли отбирали в конечной точке. Один фрагмент быстро замораживали, тогда как другой фрагмент помещали в 10% ФЗН (формалин забуференный нейтральный) по меньшей мере на 24 часа и фиксировали формалином и заливали парафином (ФФЗП). Быстро замороженные образцы хранили при температуре -80°С; блоки ФФЗП хранили при комнатной температуре.
Вестернблоттинг
[00152] Клетки собирали, и экспрессию белка анализировали с применением стандартной методики. Опухоли собирали в указанные временные точки после последнего дня введения дозы, гомогенизировали в буфере RIPA с ингибиторами протеазы и фосфатазы с применением гомогенизатора Tissuelyser (Qiagen). Равные объемы белка разделяли в зависимости от молекулярной массы, переносили на нитроцеллюлозные мембраны и получали отпечаток промоканием со следующими антителами с применением стандартной методики:
- Рецептор эстрогенов (SantaCruz (НС-20); sc-543)
- Рецептор прогестеронов (Cell Signaling Technologies; 3153)
- Винкулин (Sigma-Aldrich, v9131)
[00153] Анализы методом кПЦР (количественной полимеразной цепной реакции) проводили следующим образом: клетки собирали, экстрагировали мРНК, и равные объемы использовали для синтеза кДНК и кПЦР с праймерами, специфичными для рецептора прогестеронов, GREB1 и TFF1 (LifeTech). Полосы количественно определяли с применением программного обеспечения ID Quant (GE).
Иммуногистохимия
[00154] Опухоли собирали, фиксировали формалином, заливали парафином. Залитые опухоли разрезали (6 мкМ) и окрашивали антителами, специфичными в отношении ER, PR и Неr2. Количественное определение проводили следующим образом: пять полей подсчитывали в отношении положительных клеток (0-100%) и интенсивности окрашивания (0-3+). Показатели по Н-шкале (0-300) рассчитывали с применением следующей формулы: % положительности * интенсивность.
[00155] Пример I. Комбинации RAD1901-палбо обеспечивали усиленное ингибирование роста опухоли в опухоли и/или раке, которые экспрессировали ER ДТ или мутантный ER (например, Y537S), при различной предшествующей эндокринной терапии.
[00156] I(A). Эффективность RAD1901 на ксенотрансплантатных моделях на животных
[00157] I(A)(i) Комбинации RAD1901-палбо демонстрировали улучшенное ингибирование роста опухоли на PDx моделях (от PDx-1 до PDx-12) вне зависимости от ER статуса и предшествующей эндокринной терапии
[00158] Фигура 1 демонстрирует эффекты ингибирования роста опухоли на различных PDx моделях для мышей, получавших лечение RAD1901 в монотерапии и/или комбинацией RAD1901-палбо. Проводили скрининг двенадцати полученных от пациентов ксенотрансплантатных моделей для исследования ответа на RAD1901 при множестве генетических фонов с варьирующими уровнями ER, PR и Неr2. Полное исследование эффективности проводили для PDx моделей, помеченных «*» (от PDx-1 до PDx-4 и PDx-12), с n=8-10. Данные PDx модели получали лечение наполнителем (отрицательный контроль), RAD1901 в дозе 60 мг/кг в течение 60 дней п.о., о.р.д. или комбинацией RAD1901-пaлбo с 60 мг/кг RAD1901 и палбоциклибом п.о., о.р.д. в течение 60 дней. Скрининговое исследование проводили для других PDx моделей (от PDx-5 по PDx-11), n=3, на получавших лечение наполнителем (отрицательный контроль) или RAD1901 в дозе 90 мг/кг, в течение 60 дней, п.о., о.р.д. Как продемонстрировано на фигуре 1, PDx модели, в которых рост запускался ER и дополнительным движущим механизмом (например, PR+ и/или Неr2+), получали пользу от вариантов лечения RAD1901. RAD1901 являлся эффективным при ингибировании роста опухоли на моделях с мутациями ER и/или с высоким уровнем экспрессии Her2 (PDx) вне зависимости от предшествующего лечения: для не получавших лечения (не получавшие рецептурных ЛП, лекарственных препаратов) или получавших лечение ингибитором ароматазы, тамоксифеном (там), химиотерапией (химио), ингибиторами Неr2 (Неr2и, например, трастузумабом, лапатинибом), бевацизумабом, фулвестрантом и/или ритуксимабом.
[00159] Комбинации RAD1901-палбо продемонстрировали усиленное ингибирование роста опухоли на PDx моделях, на которых монотерапия RAD1901 обеспечивала ИРО 64% или менее (PDx-2, PDx-5, PDx-7, PDx-8, PDx-9 и PDx-10). Указанные PDx модели включали модели, не получавшие лечения (PDx-2, ER++, PR++ и Неr2+), и модели, получавшие предшествующие варианты лечения ингибитором ароматазы (ИА, тамоксифеном (там), химиотерапию (химио), ингибиторами Неr2 (Неr2и, например, трастузумабом, лапатинибом), бевацизумабом, фулвестрантом и/или ритуксимабом (PDx-5, PDx-7, PDx-8, PDx-9 и PDx-10). PDx-5 модели экспрессировали мутантный ESR1, в то время как другие PDx модели экспрессировали ESR1 ДТ. PDx-2 и PDx-5 модели являлись PR+ и Неr2+, в то время как другие PDx модели являлись PR- и HER2+. Поскольку монотерапия RAD1901 обеспечивала ИРО 65% или более на PDx-6 и PDx-11 моделях, различия между лечением RAD1901 с палбоциклибом и без него не могут быть продемонстрированы на фигуре 1. См., например, пример (I)(A)(ii) и фигуру 3В, которые демонстрируют, что комбинация RAD1901-палбо вызвала более значительную регрессию опухоли, чем RAD1901 в монотерапии на PDx11 модели.
[00160] I(A)(ii) Комбинация RAD1901-палбо запускает большую регрессию, чем RAD1901 в монотерапии, на ксенотрансплантатных моделях, экспрессирующих ER ДТ
[00161] I(A)(ii)(l) RAD1901-палбо запускает большую регрессию, чем RAD1901 в монотерапии, на ксенотрансплантатах MCF-7, которые являлись восприимчивыми к лечению фулвестрантом.
Ксенотрансплантатная модель MCF7
[00162] За два дня до имплантации клеток мышам Balb/C-Nude инокулировали гранулы 17β-эстрадиола 0,18/высвобождение в течение 90 дней. Собирали клетки MCF7 (PR+, Неr2-), и 1×107 клеток имплантировали подкожно в правый бок мышей Balb/C-Nude. Когда средний размер опухоли достигал 200 мм3, мышей рандомизировали на группы лечения в зависимости от объема опухоли, и проводили лечение исследуемыми соединениями. Каждая группа получала лечение наполнителем (контроль, п.о., о.р.д. до конечного критерия оценки), фулвестрантом (Фаслодекс®; 3 мг/субъекта, п.к., о.р.н., X 5 и продолжали в случае необходимости), RAD1901 (30 мг/кг или 60 мг/кг субъекта, п.о., о.р.д. до конечного критерия оценки), палбоциклибом (45 мг/кг или 75 мг/кг, или 100 мг/кг, п.о., о.р.д. до конечного критерия оценки) или комбинацией RAD1901-палбо в дозах, как указано с дня 0. Период лечения длился в течение 28 дней.
[00163] Фигуры 2А-С демонстрируют, что на ксенотрансплантатной модели MCF7 комбинация RAD1901-палбо с RAD1901 в дозе 60 мг/кг п.о., о.р.д. и палбоциклиба в дозе 45 мг/кг п.о., о.р.д. RAD1901 (60 мг/кг п.о., о.р.д.) в значительной степени уменьшала размер опухоли на приблизительно 50% к дню 14. RAD1901 и палбоциклиб при введении в монотерапии демонстрировали эффективность по ингибированию роста опухоли.
[00164] Для подтверждения данных результатов проводили лечение ксенотрансплантатных мышей MCF7 наполнителем (отрицательный контроль), RAD1901 (30 или 60 мг/кг, п.о., о.р.д.), палбоциклибом (45 мг/кг, п.о., о.р.д.), комбинацией RAD1901 (30 или 60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.), фулвестрантом (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.) или комбинацией фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.) и палбоциклиба (45 мг/кг, п.о., о.р.д.). Размер опухоли измеряли в различные временные точки в течение 27 дней.
[00165] Результаты представлены на фигурах 2А-В. Лечение комбинацией RAD1901 (60 мг/кг) и палбоциклиба (45 мг/кг) вновь привело к значительной регрессии опухоли, с результатами, превосходящими лечение RAD1901, палбоциклибом или фулвестрантом в монотерапии, или комбинацией фулвестранта и палбоциклиба (фигуры 2А-В).
[00166] Фигура 2С демонстрирует, что комбинации RAD1901-палбо с RAD1901 в дозе 30 мг/кг или 60 мг/кг обеспечивали аналогичные эффекты, несмотря на то, что RAD1901 в монотерапии в дозе 30 мг/кг являлся не настолько эффективным, как RAD1901 в монотерапии в дозе 60 мг/кг, в отношении ингибирования роста опухоли. Указанные результаты свидетельствуют, что комбинации RAD1901-палбо с меньшей дозой RAD1901 (например, 30 мг/кг) было достаточно для увеличения до максимума эффектов в отношении ингибирования роста опухоли/регрессии опухоли на указанных ксенотрансплантатных моделях.
[00167] Лечение комбинацией RAD1901 и палбоциклиба также являлось более эффективным в отношении уменьшения экспрессии ER и PR in vivo на ксенотрансплантатных моделях MCF7, чем лечение RAD1901, палбоциклибом или фулвестрантом в монотерапии или лечение комбинацией фулвестранта и палбоциклиба (фигура 13); опухоли собирали через два часа после последнего введения дозы).
[00168] I(A)(ii)(2) RAD1901-палбо запускали большую регрессию опухоли, чем RAD1901 в монотерапии, на PDx-11 и PDx-2 моделях, которые являлись восприимчивыми к лечению фулвестрантом.
[00169] PDx модели с ER ДТ PDx-2 (PR+, Неr2+, не получавшие лечения) и PDx-11 (PR+, Неr2+, получавшие лечение ИА, фулвестрантом и химио) продемонстрировали различные чувствительности к фулвестранту (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.). PDx-2 и PDx-11 модели получали лечение комбинацией RAD 1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.), RAD1901 в монотерапии (60 мг/кг, п.о., о.р.д.), палбоциклибом в монотерапии (75 мг/кг, п.о., о.р.д.) или фулвестрантом в монотерапии (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.). PDx-11 модели также получали лечение комбинацией палбоциклиба (75 мг/кг, п.о., о.р.д.) и фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.).
[00170] На PDx-11 моделях введение фулвестранта или палбоциклиба в монотерапии в значительной степени ингибировало рост опухоли, причем у мышей, получавших лечение фулвестрантом, наблюдались лучшие эффекты в отношении ингибирования роста опухоли. Комбинация фул-палбо продемонстрировала незначительную регрессию опухоли. Неожиданно было установлено, что введение RAD1901 в монотерапии или в комбинации с палбоциклибом привело к значительной регрессии опухоли, причем комбинация обеспечила еще более значительные эффекты в отношении регрессии опухоли на PDx моделях с ESR1 дикого типа (фигура 3В)).
[00171] На PDx-2 моделях пероральное введение RAD1901 в монотерапии обеспечило лучшие эффекты ингибирования роста опухоли по сравнению с инъекцией фулвестранта в монотерапии (фигура 4А). Более того, введение RAD1901 или палбоциклиба в монотерапии в значительной степени ингибировало рост опухоли. Неожиданно было установлено, что введение RAD1901 в комбинации с палбоциклибом привело к еще более усиленному эффекту в отношении ингибирования роста опухоли (фигура 4В)).
[00172] Более того, на PDx-4 модели, которая являлась восприимчивой к лечению фулвестрантом (1 мг/дозу, о.р.н., п.к.), RAD1901-опосредованное ингибирование роста опухоли поддерживалось при отсутствии лечения по меньшей мере в течение двух месяцев после окончания периода лечения RAD1901 (30 мг/кг, п.о., о.р.д.), в то время как лечение эстрадиолом продолжали (фигура 5).
[00173] Таким образом, комбинация RAD1901-палбо, вероятно, приносит пользу пациенту при ингибировании роста опухоли после окончания лечения, в особенности, когда ингибиторы CDK4/6 (например, рибоциклиб, абемациклиб и палбоциклиб) можно вводить исключительно периодически в связи с побочными эффектами данных соединений ().
[00174] I(A)(iii) RAD1901-палбо запускает большую регрессию, чем RAD1901 в монотерапии, на ксенотрансплантатных моделях, экспрессирующих мутантный ER (ERα Y537S)
[00175] I(A)(iii)(1) RAD1901-палбо запускает большую регрессию, чем RAD1901 в монотерапии, на моделях PDx-5, которые являлись слабо восприимчивыми к лечению фулвестрантом.
[00176] PDx-5 модели получали согласно аналогичному протоколу, как описано выше для PDx моделей. Размеры опухоли каждой группы введения доз измеряли два раза в неделю с помощью штангенциркуля с нониусом, и объемы рассчитывали с применением формулы (L*W2)*0,52.
[00177] Ингибирование роста опухоли RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.), палбоциклибом (100 мг/кг, уменьшено до 75 мг/кг в середине исследования в связи с проблемами переносимости, п.о., о.р.д.) и RAD1901 (60 мг/кг, п.о., о.р.д.) в комбинации с палбоциклибом (100 мг/кг, уменьшено до 75 мг/кг в середине исследования в связи с проблемами переносимости) на PDx-5 моделях с мутантным ER (PDx модели с полученной от пациента опухолью рака молочной железы, содержащей мутацию рецептора эстрогенов Y537S, PR+, Неr2+, предшествующее лечение ингибитором ароматазы) оценивали с применением способа, описанного выше. В случае опухолей, экспрессирующих определенные мутации ERα (например, Y537S), комбинированное лечение RAD1901 и палбоциклибом являлось более эффективным в отношении ингибирования роста опухоли, чем лечение каждым средством в монотерапии (фигура 6А)). Данные PDx модели не являлись чувствительными к лечению фулвестрантом (3 мг/дозу) (фигура 6А). Комбинированное лечение RAD1901 и палбоциклибом являлось более эффективным, чем лечение каждым средством в монотерапии, в отношении запуска регрессии опухоли на RDx-5 моделях (фигуры 6В-С), демонстрируя изменение размера индивидуальной опухоли от исходного уровня в день 17 и день 56, соответственно).
[00178] PDx-5 получали лечение наполнителем (отрицательный контроль), фулвестрантом (Фаслодекс, 3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), RAD1901 (60 мг/кг или 120 мг/кг, п.о., о.р.д.), палбоциклибом (100 мг/кг, п.о., о.р.д., уменьшено до 75 мг/кг в середине исследования в связи с проблемами переносимости) или комбинацией RAD1901 (60 или 120 мг/кг, п.о., о.р.д.) и палбоциклиба (100 мг/кг, п.о., о.р.д., уменьшено до 75 мг/кг в середине исследования в связи с проблемами переносимости). Измеренные размеры опухолей показаны на (фигурах 7А-В). PDx-5 модели являлись устойчивыми к лечению фулвестрантом, но RAD1901 и палбоциклиб в монотерапии или в комбинации ингибировали рост опухоли. RAD1901 в дозе 60 мг/кг в монотерапии обладал по существу такой же эффективностью, как палбоциклиб в монотерапии в дозе 100 мг/кг (фигура 7А); в то время как RAD1901 в дозе 120 мг/кг в монотерапии обладал улучшенной эффективностью по сравнению с палбоциклибом в монотерапии в дозе 100 мг/кг (фигура 7В). RAD1901 в дозе 60 мг/кг п.о. обеспечивал значительное ингибирование роста опухоли (фигура 8). Более того, введение палбоциклиба в монотерапии или в комбинации с фулвестрантом в значительной степени ингибировало рост опухоли на мутантной PDx модели, несмотря на то, что комбинация дополнительно не усиливала ингибирование (фигура 8).
[00179] Неожиданно было установлено, что RAD1901 в монотерапии или в комбинации с палбоциклибом обеспечивал еще более значительное ингибирование опухоли, причем комбинация практически полностью ингибировала рост опухоли на мутантной PDx модели; и комбинации RAD1901-палбо с меньшей дозой RAD1901 (например, 60 мг/кг) было достаточно для увеличения до максимума эффектов в отношении ингибирования роста опухоли/регрессии опухоли на моделях PDx-5 (фигуры 7А-В).
[00180] Таким образом, результаты продемонстрировали, что RAD1901 являлся эффективной эндокринной основой, которая потенцировала ингибирование роста опухоли средствами направленного действия. Более того, RAD1901 продемонстрировал мощную противоопухолевую активность на PDx моделях, полученных от пациентов, которые проходили множество предшествующих вариантов эндокринной терапии, включая таковых, которые являлись нечувствительными к фулвестранту.
[00181] I(A)(iv) Оценка фармакокинетики вариантов лечения фулвестрантом в отношении мышей, не несущих опухоль.
[00182] Мышам вводили различные дозы фулвестранта; наблюдалась значительная экспозиция дозы в отношении субъектов (фигура 9).
[00183] Фулвестрант вводили бестимусным мышам в количестве 1, 3 или 5 мг/дозу подкожно в день 1 (Д1 рецептурных ЛП) и день 8 (Д8 рецептурных ЛП, n=4/уровень дозы). Кровь собирали в указанные временные точки в течение 168 часов после введения второй дозы, центрифугировали, и плазму анализировали методом жидкостной хроматографии - масс-спектрометрии.
[00184] I(B) RAD1901 стимулировал выживаемость на ксенотрансплантатной модели метастазов головного мозга на мышах (внутричерепные модели MCF-7).
[00185] Затем потенциальную способность RAD1901 преодолевать гематоэнцефалический барьер и ингибировать рост опухоли оценивали с применением ксенотрансплантатной модели внутричерепной опухоли MCF-7.
[00186] Самок бестимусных голых мышей (Crl:NU(NCr)-Foxn1nu) использовали для исследований ксенотрансплантатов опухоли. За три дня до имплантации опухолевых клеток всем исследованным животным подкожно между лопатками имплантировали гранулы эстрогена (0,36 мг Е2, высвобождение в течение 60 дней, Innovative Research of America, Сарасота, Флорида) с применением стерилизованного троакара. Клетки аденокарциномы молочной железы человека MCF-7 культивировали до середины фазы логарифмического роста в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональную телячью сыворотку, 100 единиц/мл пенициллина G, 100 мкг/мл стрептомицина сульфата, 2 мМ глутамина, 10 мМ HEPES, 0,075% бикарбоната натрия и 25 г/мл гентамицина. В день имплантации опухолевых клеток клетки трипсинизировали, осаждали центрифугированием и ресуспендировали в фосфатно-буферном солевом растворе при концентрации 5×107 клеток/мл. Каждая исследуемая мышь получала 1×106 клеток MCF-7, которые имплантировали внутричерепным способом.
[00187] Через пять дней после имплантации опухолевых клеток (обозначен как день 1 исследования) мышей рандомизировали на три группы по 12 животных в каждой, и проводили лечение наполнителем, фулвестрантом (0,5 мг/животное о.р.д.) или RAD1901 (120 мг/кг о.р.д.), как описано выше.
[00188] Конечная точка была определена как смертность или 3Х выживаемость контрольной группы в зависимости от того, какое событие наступит первым. Переносимость лечения оценивали посредством измерений массы тела и частых наблюдений клинических признаков нежелательных эффектов, вызванных лечением. Животным со снижением массы тела, превосходящим 30% для одного измерения, или превосходящей 25% для трех измерений, из соображений гуманности проводили эвтаназию, и данное событие классифицировали как смерть, связанную с лечением. Приемлемую токсичность определяли как среднее снижение массы тела в группе, составляющее менее 20% в течение исследования, и не более одной смерти, связанной с лечением, на десять животных, получивших лечение, или 10%. В конце исследования животным проводили эвтаназию посредством итоговой пункции сердца с анестезией изофлураном. Концентрацию RAD1901 и фулвестранта в плазме и опухоли определяли с применением ЖХ-МС/МС (жидкостной хроматографии - масс-спектрометрии).
[00189] Анализ выживаемости Каплан-Мейер продемонстрировал, что RAD1901 значительно увеличивал выживаемость по сравнению с фулвестрантом (Р<0,0001; фигура 10). Ни одно из животных в контрольной группе или группе фулвестранта не выжило к дню 20 и дню 34, соответственно, тогда как 41% (5/12) животных, получавших лечение RAD1901, выжили до конца исследования в день 54.
[00190] Концентрация RAD1901 в плазме составила 738±471 нг/мл, а во внутричерепной опухоли составила 462±105 нг/г, что подтверждает гипотезу, согласно которой RAD1901 способен эффективно преодолевать гематоэнцефалический барьер. Напротив, концентрации фулвестранта являлись по существу более низкими в плазме (21±10 нг/мл) и во внутричерепной опухоли (8,3±0,8 нг/г).
[00191] Пример II. RAD1901, предпочтительно, накапливается в опухоли и может быть доставлен в головной мозг.
[00192] На ксенотрансплантатах MCF-7, описанных в примере I(A)(i), также оценивали концентрацию RAD1901 в плазме и опухоли с применением ЖХ-МС/МС. В конце исследования концентрация RAD1901 в плазме составляла 344±117 нг/мл, а в опухоли - 11118±3801 нг/мл для уровня дозы 60 мг/кг. Аналогичное соотношение концентрации в опухоли к концентрации в плазме также наблюдалось для меньших уровней доз, когда концентрации в опухоли являлись приблизительно в 20-30 раз более высокими, чем в плазме. Уровни RAD1901 в плазме, опухоли и головном мозге для мышей, получавших лечение в течение 40 дней, обобщены в таблице 1. Значительное количество RAD1901 доставлялось в головной мозг получавших лечение мышей (например, см. соотношение ГМ/П (концентрация RAD1901 в головном мозге/концентрация RAD1901 в плазме)); это свидетельствует, что RAD1901 был способен преодолевать гематоэнцефалический барьер (ГЭБ). Неожиданно было установлено, что RAD1901, предпочтительно, накапливается в опухоли. См., например, соотношение О/П (концентрация RAD1901 в опухоли/ концентрация RAD1901 в плазме), представленное в таблице 1.
[00193] Пример III. RAD1901 ингибировал путь передачи сигналов посредством ER и вызывал деградацию ER.
[00194] III(А). RAD1901 уменьшал занятость ER в матке и гипофизе у здоровых субъектов-людей женского пола в постменопаузалъном периоде.
[00195] У субъектов наблюдались аменорея в течение по меньшей мере 12 месяцев и уровень ФСГ (фолликулостимулирующего гормона) в сыворотке, который соответствовал менопаузе. Возраст субъектов составлял 40-75 лет с ИМТ (индексом массы тела) 18,0-30 кг/м2. Матка субъектов являлась целостной. Исключали субъектов, у которых наблюдались доказательства клинически значимой патологии, увеличенный риск инсульта или венозное тромбоэмболическое событие в анамнезе, или которые использовали сопутствующие лекарственные препараты менее чем за 14 дней до поступления в клинический исследовательский центр (прием парацетамола был разрешен в течение до 3 дней до поступления).
[00196] ФЭС-ПЭТ проводили на исходном уровне и после 6 дней воздействия RAD1901 для оценки занятости ER в матке. RAD1901 оккупировал 83% и 92% ER в матке при уровнях дозы 200 мг (7 субъектов) и 500 мг (6 субъектов), соответственно.
[00197] Визуализация ФЭС-ПЭТ продемонстрировала значительное уменьшение связывания меченного эстрадиола как с маткой, так и с гипофизом после лечения RAD1901 200 мг или 500 мг (п.о., о.р.д., 6 дней).
[00198] В связи с высокой экспрессией ER в матке наблюдался мощный сигнал ФЭС-ПЭТ на исходном уровне до лечения RAD1901 (фигура 11А, поперечный вид скана ФЭС-ПЭТ матки субъекта 3, получавшего лечение уровнем дозы 200 мг, на исходном уровне; фигура 11В, сагиттальный вид и поперечный вид скана ФЭС-ПЭТ матки, соответственно, субъекта 7, получавшего лечение уровнем дозы 500 мг, на исходном уровне). Однако при сканировании через четыре часа после введения дозы в день 6 исследования матка была слабо заметна (на уровне фонового сигнала или близко к фоновому сигналу ФЭС-ПЭТ (фигура 11А), поперечный вид скана матки субъекта 3 в день 6; и фигура 11В, сагиттальный вид и поперечный вид скана матки, соответственно, субъекта 7 в день 6). Эти данные согласовывались с деградацией ER и/или конкуренцией за связывание с рецептором. Фигуры 11А-В также включают скан КТ матки, которой был получен в результате сканирования ФЭС-ПЭТ и который демонстрирует присутствие матки до и после лечения RAD1901.
[00199] Затем количественно определяли результаты сканирования ФЭС-ПЭТ матки, чтобы продемонстрировать изменение связывания ER после введения доз по сравнению с исходным уровнем для 7 субъектов (фигура 11(C)). Представлены данные субъектов 1-3 и субъектов 4-7 в качестве примеров группы дозы 200 мг и группы дозы 500 мг, соответственно. RAD1901 продемонстрировал устойчивую занятость ER при более низких уровнях дозы (200 мг).
[00200] На фигуре 12 продемонстрировано иллюстративное изображение скана ФЭС-ПЭТ матки (А) и гипофиза (В) перед (На исходном уровне) и после (После лечения) лечения RAD1901 в дозе 500 мг п.о., о.р.д., в течение шести дней. На фигуре 12А продемонстрирован скан ФЭС-ПЭТ матки при (а) боковом поперечном сечении; (b) продольном поперечном сечении; и (с) продольном поперечном сечении.
[00201] На скане ФЭС-ПЭТ матки и гипофиза субъекта после введения доз наблюдалось отсутствие заметного сигнала связывания ER в матке (фигура 12А, После лечения) и гипофизе (фигура 12В, После лечения), соответственно.
[00202] Таким образом, результаты продемонстрировали, что RAD1901 эффективно занимал ER у человека в дозе 200 и 500 мг п.о., о.р.д., в течение шести дней.
[00203] Стандартный уровень накопления (СУН) для матки, мышц и костей рассчитывали и обобщали для вариантов лечения RAD1901 в дозе 200 мг и 500 мг п.о., о.р.д. в таблицах 2 и 3, соответственно. После введения доз сигналы в матке были близки уровням от «тканей, отличных от тканей-мишеней», что свидетельствует о полном затухании накопления ФЭС-ПЭТ после лечения RAD1901. В тканях, которые в значительной степени не экспрессируют рецептор эстрогенов, практически не наблюдалось изменений на сканах ПЭТ до лечения по сравнению со сканами после лечения.
[00204] Таким образом, RAD1901 или его соль или сольват (например, гидрат) можно применять для лечения раковых и/или опухолевых клеток, которые характеризуются сверхэкспрессией ER (например, рака молочной железы, рака матки и рака яичников), без оказания отрицательных эффектов на другие органы (например, кости, мышцы). RAD1901 или его соль или сольват (например, гидрат) указанного соединения может особенно подходить для лечения метастазирующих вариантов рака и/или опухолей, которые характеризуются сверхэкспрессией ER, в других органах, например, исходного рака молочной железы, рака матки и/или рака яичников, который мигрировал в другие органы (например, кости, мышцы), для лечения поражений рака молочной железы, рака матки и/или рака яичников в других органах (например, костях, мышцах) без оказания отрицательных эффектов на указанные органы.
[00205] III(В). RAD1901 уменьшал экспрессию ER и ингибировал путь передачи сигналов посредством ER.
[00206] III(B)(i)(1) Комбинация RAD1901-палбо являлась более эффективной в отношении уменьшения экспрессии ER и PR на ксенотрансплантатных моделях MCF7, чем лечение RAD1901, палбоциклибом или фулвестрантом в монотерапии или комбинацией фул-палбо.
[00207] Лечение комбинацией RAD1901 и палбоциклиба являлось также более эффективным в отношении уменьшения экспрессии ER и PR in vivo на ксенотрансплантатных моделях MCF7 (как описано в примере I(A)(ii)), чем лечение RAD1901, палбоциклибом или фулвестрантом в монотерапии или лечение комбинацией фулвестранта и палбоциклиба (фигура 13); опухоли собирали через два часа после последнего введения дозы).
[00208] III(B)(i)(2) Сравнение RAD1901 и фулвестранта на линиях клеток MCF7 и T47D.
[00209] Эффекты RAD1901 и фулвестранта сравнивали с применением линий клеток MCF7 и T47D, обе из которых представляют собой линии клеток рака молочной железы человека, при различных концентрациях, 0,01 мкМ, 0,1 мкМ и 1 мкМ (фигура 14А для анализов линии клеток MCF7; и фигура 14В для анализов линий клеток T47D). В качестве маркеров использовали три гена-мишени ER, рецептора прогестеронов (PgR), регуляции роста эстрогеном в раке молочной железы 1 (growth regulation by estrogen in breast cancer, GREB1) и фактора «трилистника» 1 (trefoil factor, TFF1). RAD1901 вызывал деградацию ER и ингибировал передачу сигналов посредством ER (фигура 14). Неожиданно было установлено, что RAD1901 являлся сравнимым или более эффективным, чем фулвестрант, при ингибировании роста опухоли и запускал регрессию опухоли, как раскрыто выше в примере 1(A) и примере 1(B).
[00210] III(B)(i)(3) Лечение RAD1901 привело к деградации ER и отмене передачи сигналов посредством ER на ксенотрансплантатной модели MCF7, описанной выше в примере I(A)(ii)(1).
[00211] Лечение RAD1901 привело к деградации ER in vivo (фигуры 15А-С, t-критерий Стьюдента: *р-значение <0,05, **р-значение <0,01) и ингибировало передачу сигналов посредством ER in vivo (фигуры 15А и 15С, t-критерий Стьюдента: *р-значение <0,05, **р-значение <0,01).
[00212] В опухоли, которую отбирали от ксенотрансплантата MCF7 через 2 часа после введения последней дозы RAD1901 (30 мг/кг, 60 мг/кг, п.о., о.р.д.) или фулвестранта (3 мг/дозу, п.к., о.р.н.), наблюдалось значительное уменьшение экспрессии ER и PR (фигуры 15А-В). В опухоли, отобранной от ксенотрансплантата MCF7 через 8 часов после введения последней дозы лечения фулвестрантом, наблюдалась различная экспрессия PR и ER. Однако в опухоли, отобранной от ксенотрансплантата MCF7 через 8 часов после введения последней дозы лечения RAD1901, наблюдалась уменьшенная экспрессия PR и ER (фигуры 15А и 15С).
[00213] В опухоли, отобранной от ксенотрансплантата MCF7 через 8 часов или через 12 часов после введения однократной дозы RAD1901 (30 мг/кг, 60 мг/кг или 90 мг/кг, п.о., о.р.д.), наблюдалось быстрое уменьшение экспрессии PR (фигура 16А). В опухоли, отобранной от ксенотрансплантата MCF7 через 4 часа или через 24 часа после введения 7-ой дозы RAD1901 (30 мг/кг, 60 мг/кг или 90 мг/кг, п.о., о.р.д.), наблюдалось стойкое и стабильное ингибирование передачи сигналов посредством ER (фигура 16В). Количественное определение анализов вестернблоттинга опухоли, отобранной от ксенотрансплантата MCF7 в различные временные точки в течение лечения RAD1901 (30 мг/кг, 60 мг/кг или 90 мг/кг, п.о., о.р.д.), продемонстрировало дозозависимое уменьшение PR (фигура 16С).
[00214] Лечение RAD1901 вызвало быстрое уменьшение пролиферации на ксенотрансплантатных моделях MCF7. Например, опухоль, отобранную от ксенотрансплантатных моделей MCF7 через 8 часов после введения однократной дозы RAD1901 (90 мг/кг, п.о., о.р.д.) и через 24 часа после введения 4-ой дозы RAD1901 (90 мг/кг, п.о., о.р.д.), разрезали на срезы и окрашивали, чтобы продемонстрировать быстрое снижение уровня маркера пролиферации Ki67 (фигуры 17А-В).
[00215] Данные результаты свидетельствуют, что лечение RAD1901 приводит к деградации ER и ингибированию передачи сигналов посредством ER на ксенотрансплантатах ER ДТ in vivo.
[00216] III(B)(i)(4) Лечение RAD1901 привело к деградации ER и к отмене передачи сигналов посредством ER на PDx-4 моделях, описанных выше в примере I(A)(ii).
[00217] Лечение RAD1901 вызвало быстрое уменьшение пролиферации на PDx-4 моделях. Например, через четыре часа после введения последней дозы в последний день исследования эффективности в течение 56 дней в опухоли, отобранной от PDx-4 моделей, получавших лечение RAD1901 (30, 60 или 120 мг/кг, п.о., о.р.д.) или фулвестрантом (1 мг/животное, о.р.н.), которые разрезали на срезы, наблюдалось быстрое снижение уровня маркера пролиферации Ki67 по сравнению с PDx-4 моделями, получавшими лечение фулвестрантом (фигура 18).
[00218] Данные результаты свидетельствуют, что лечение RAD1901 приводит к деградации ER и ингибированию передачи сигналов посредством ER на ксенотрансплантатах ER ДТ in vivo.
[00219] III(B)(ii) Лечение RAD1901 привело к уменьшению передачи сигналов посредством ER на ксенотрансплантатных PDx-5 моделях с мутантным ER, описанных выше в примере I(А)(iii)(1).
[00220] Опухоли собирали в указанные временные точки после последнего дня введения дозы (если не указано обратное), гомогенизировали в буфере RIPA с ингибиторами протеазы и фосфатазы с применением гомогенизатора Tissuelyser (Qiagen). Равные объемы белка разделяли в зависимости от молекулярной массы, переносили на нитроцеллюлозные мембраны и получали отпечаток промоканием со следующим антителом, описанным в разделе «Материалы и методы»: рецептор прогестеронов (PR, Cell Signaling Technologies; 3153).
[00221] Проводили количественное определение полос с применением программного обеспечения 1D Quant (GE), и показатели ИГХ PR по шкале Оллреда, полученные на PDx-5 моделях, описанных в примере I(A)(iii)(1), показаны на фигуре 19. Фулвестрант оказывал незначительное влияние на экспрессию PR, тогда как RAD1901 продемонстрировал эффективность в дозах как 60 мг/кг, так и 120 мг/кг (п.о., о.р.д., III(B)(ii) - фигура 1).
[00222] Данные результаты свидетельствуют, что в случае опухолей, экспрессирующих определенные мутации ERα (например, Y537S), RAD1901 являлся более эффективным, чем фулвестрант, при ингибировании роста опухоли, в особенности эффективным при ингибировании роста опухолей, которые являлись слабо восприимчивыми к лечению фулвестрантом (например, в дозе 3 мг/дозу, п.к., о.р.н., фигура 6А для PDx-5). Более того, в случае опухолей, которые не отвечали хорошо на лечение фулвестрантом (например, PDx-5), RAD1901 являлся эффективным для уменьшения экспрессии PR in vivo, в то время как фулвестрант не являлся эффективным (фигура 19).
[00223] Пример IV. Влияние лечения RAD1901 на ткани матки и/или МПК
[00224] IV(A(1)): RAD1901 выступал в качестве антагониста стимуляции ткани матки эстрадиолом.
[00225] Утеротропные эффекты RAD1901 исследовали посредством оценки изменений массы матки, гистологии и экспрессии гена С3 у неполовозрелых крыс. Результаты репрезентативного исследования представлены на фигурах 20A-D.
Оценка утеротропной активности
[00226] Детенышей крыс Спрег-Доули отлучали от матери на 19 день жизни, рандомизировали в группы (n=4) и вводили наполнитель (водную метилцеллюлозу), Е2 (0,01 мг/кг), ралоксифен (3 мг/кг), тамоксифен (1 мг/кг), RAD1901 в монотерапии (от 0,3 до 100 мг/кг) или RAD1901 (от 0,01 до 10 мг/кг) в комбинации с Е2 (0,01 мг/кг), п.к. или п.о. в установленном порядке (см. раздел «Реактивы», выше), о.р.д., в течение 3 последовательных дней. Через двадцать четыре часа после введения последней дозы всем животным проводили эвтаназию посредством ингаляции диоксида углерода. Для каждого животного регистрировали массу тела и чистую массу матки. Аналогичные анализы также проводили с RAD1901 (от 0,03 до 100 мг/кг) на крысах и мышах (Charles River Laboratories, Монреаль, Квебек).
[00227] Свежую ткань матки от каждой крысы фиксировали в 4% параформальдегиде, обезвоживали этанолом и заливали в пластичный полимер JB4. Получали срезы толщиной 8 мкм и окрашивали 0,1% толуидиновым синим О. Толщину эпителия эндометрия измеряли с помощью микроскопа Zeiss Axioskop 40 с применением программы Spot Advanced; рассчитывали среднее из 9 измерений на образец.
Экспрессия гена компонента 3 (С3) комплемента в матке
[00228] Для определения относительных уровней экспрессии С3 в получавшей лечение ткани матки экстрагировали РНК из оставшейся ткани с применением набора для очистки РНК Micro to Midi Total RNA Purification Kit (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния) согласно инструкциям производителя. РНК количественно определяли, и проводили обратную транскрипцию равных объемов с применением набора High Capacity cDNA Archive Kit (Applied Biosystems, Фостер-Сити).
[00229] Количественную ПЦР проводили с применением системы ABI Prism 7300 (Applied Biosystems). ПЦР проводили с применением мастер-микс Taqman Universal с наборами зондов для С3 и для 18S рибосомальной РНК в качестве эталонного гена. Условия циклического температурного воздействия включали исходный этап денатурации при температуре 95°С в течение 10 мин., после чего следовали 40 циклов при температуре 95°С в течение 15 секунд и при температуре 60°С в течение 1 минуты.
[00230] Относительную экспрессию гена определяли посредством нормирования каждого образца к эндогенному контролю (18S) и сравнения с калибратором (наполнитель). Относительную экспрессию гена определяли с применением следующего уравнения: 2-ΔΔCt (где Ct = пороговый цикл или номер цикла, на котором продукт ПЦР был впервые обнаружен, ΔCt = нормированное значение образца, и ΔΔCt = нормированная разность между субъектом, получавшим дозу, и наполнителем). Определения экспрессии гена в пяти повторах проводили для каждой дозы во время каждого исследования.
[00231] Лечение Е2 (0,01 мг/кг), ралоксифеном (РАЛ, 3 мг/кг) или тамоксифеном (ТАМ, 1 мг/кг) привело к значительному увеличению чистой массы матки по сравнению с наполнителем в монотерапии, тогда как лечение RAD1901 в диапазоне доз от 0,3 до 100 мг/кг значительно не влияло на чистую массу матки (фигура 20А). Представленные данные (фигура 20А) представляют собой средние значения (±СОС); n=4 крыс на группу; Р по сравнению с наполнителем: *<0,05; по сравнению с Е2: <0,05. Также при введении в комбинации с Е2 (0,01 мг/кг) RAD1901 выступал в качестве антагониста Е2-опосредованной стимуляции матки дозозависимым способом, демонстрируя значительное ингибирование утеротропной активности в дозе 0,1 мг/кг и более и полное ингибирование в дозе 3 мг/кг. ЕС50 для RAD1901 составляла приблизительно 0,3 мг/кг. Аналогичные результаты были получены на мышах, когда дозы RAD1901 от 0,03 до 100 мг/кг также не оказывали эффекта в отношении чистой массы матки или толщины эпителия (данные не показаны).
[00232] Затем связанные с лечением изменения ткани матки исследовали посредством количественной микроскопической гистологии. Наблюдалось статистически значимое увеличение толщины эндометриального эпителия после лечения Е2 в дозах 0,01 и 0,3 мг/кг (фигура 20В). Значительное увеличение толщины эпителия также наблюдалось после лечения тамоксифеном (1 мг/кг) или ралоксифеном (3 мг/кг). Напротив, лечение RAD1901 не вызвало увеличения толщины эндометриального эпителия до наивысшей исследованной дозы 100 мг/кг. Иллюстративные изображения эпителия эндометрия представлены на фигуре 20С.
[00233] В соответствии с изменениями массы матки и толщины эндометриального эпителия Е2, тамоксифен и ралоксифен значительно увеличивали экспрессию гена регулируемого эстрогеном комплемента, С3 (фигура 20D). Напротив, RAD1901 не увеличивал экспрессию гена С3 ни в одной из исследованных доз (от 0,3 до 100 мг/кг). Более того, RAD1901 в дозах 1, 3 и 10 мг/кг значительно подавлял стимулированную Е2 экспрессию гена С3.
RAD1901 не стимулирует матку неполовозрелых самок крыс
[00234] Неполовозрелым самкам крыс вводили п.о., о.р.д. в течение 3 последовательных дней наполнитель (НАПОЛН), эстрадиол (Е2), Ралоксифен (РАЛ), Тамоксифен (ТАМ), RAD1901 или RAD1901+E2. Измеряли чистую массу матки. Представленные данные (фигура 20А) представляют собой средние значения (±СОС); n=4 крыс на группу; Р по сравнению с наполнителем: *<0,05; по сравнению с Е2: <0,05.
Пример II(A)(2). Лечение RAD1901 защищало от атрофии костной ткани у крыс после овариоэктомии
[00235] Специфичные в отношении костей эффекты RAD1901 исследовали на крысах после овариоэктомии.
[00236] Для получения модели постменопаузальной атрофии костной ткани проводили овариоэктомию на взрослых самках крыс Спрег-Доули при анестезии с симуляцией хирургического вмешательства в качестве контроля. После хирургического вмешательства крысы после овариоэктомии получали лечение о.р.д. в течение 4 недель наполнителем, Е2 (0,01 мг/кг) или RAD1901 (0,1, 0,3, 1, 3 мг/кг), которые вводили, как описано выше; группы включали 20 животных. Животные в группе симуляции хирургического вмешательства получали лечение наполнителем. Всем животным проводили эвтаназию посредством ингаляции диоксида углерода через 24 часа после введения последней дозы. Минеральную плотность костей оценивали на исходном уровне и снова через 4 недели лечения с применением двухэмиссионной рентгеновской абсорбциометрии PIXImus.
[00237] При вскрытии левую бедренную кость каждого животного отбирали, рассекали без присутствия мягких тканей и хранили в 70% этаноле перед проведением анализа. Подробную качественную и количественную 3-D оценку проводили с применением системы micro-CT40 (Scanco Systems, Уэйн, Пенсильвания). Для каждого образца получали 250 изображений срезов метафиза дистальной бедренной кости. Морфометрические параметры определяли с применением прямого 3-D подхода в предварительно выбранных областях для анализа. Параметры, которые определяли в трабекулярной кости, включали плотность костной ткани, плотность поверхности костей, число трабекул, толщину трабекул, расстояние между трабекулами, плотность соединительной ткани и кажущуюся плотность костей.
[00238] После овариоэктомии у не получавших лечение (получавших контроль - наполнитель) крыс наблюдалось уменьшение минеральной плотности костей как во всей полной бедренной кости, так и в поясничном отделе по сравнению с исходным уровнем (таблица 5). Лечение Е2 было связано с предотвращением атрофии костной ткани как в бедренной кости, так и в спинном хребте. Лечение RAD1901 привело к дозозависимому и статистически значимому подавлению вызванной овариоэктомией атрофии костной ткани (данные представлены для группы лечения 3 мг/кг). В дозах от 0,1 мг/кг до 3 мг/кг минеральная плотность костей у получавших лечение RAD1901 крыс была полной при отсутствии статистически значимых различий по сравнению с группой, получавшей лечение Е2.
[00239] Анализ дистальной бедренной кости методом микро-КТ (таблица 6) продемонстрировал, что овариоэктомия вызвала значительные изменения количества ключевых параметров микроархитектуры по сравнению с животными с симуляцией хирургической операции. Данные изменения соответствовали уменьшению массы костей и включали уменьшение объема костей, уменьшение числа трабекул, их толщины и плотности, а также увеличение разделения трабекул. В соответствии с сохранением минеральной плотности костей, которое наблюдалось после лечения RAD1901, в ключевых микроструктурных параметрах наблюдалось значительное сохранение архитектуры трабекул (таблица 6).
[00240] Пример IV(B): Исследование 1 фазы с увеличением дозы RAD101 у здоровых женщин в постменопаузалъном периоде
[00241] В исследовании 1 фазы оценивали безопасность, переносимость и фармакокинетику на 44 здоровых женщинах в постменопаузальном периоде. Дозолимитирующие токсичности (ДЛТ) не наблюдались, максимально переносимая доза (МПД) не была установлена. Экспозиция в плазме увеличивалась более чем пропорционально дозе в исследованном диапазоне доз.
Субъекты
[00242] 44 здоровых женщин в постменопаузальном периоде включали в качестве субъектов в данное исследование 1 фазы. У указанных субъектов характеризовались наблюдались аменорея в течение по меньшей мере 12 месяцев и уровень ФСГ в сыворотке, который соответствовал менопаузе. Возраст субъектов составлял 40-75 лет с ИМТ 18,0-30 кг/м2. Исключали субъектов, у которых наблюдались доказательства клинически значимой патологии, увеличенный риск инсульта или венозное тромбоэмболическое событие в анамнезе, или которые использовали сопутствующие лекарственные препараты менее чем за 14 дней до поступления в клинический исследовательский центр (прием парацетамола был разрешен в течение до 3 дней до поступления).
Введение доз
[00243] Субъекты получали лечение плацебо или по меньшей мере одну дозу п.о., о.р.д. после легкого завтрака в течение 7 дней при уровнях дозы 200 мг, 500 мг, 750 мг и 1000 мг, соответственно. Ключевые демографические показатели на исходном уровне 44 здоровых женщин в постменопаузальном периоде, включенных в исследование 1 фазы, обобщены в таблице 7.
Нежелательные явления, возникшие после начала лечения (НЯПНЛ)
[00244] Регистрировали НЯПНЛ, и наиболее частые (>10% пациентов в суммарной активной группе, у которых наблюдались любые связанные НЯПНЛ) нежелательные явления (НЯ) обобщены в таблице 8, «n» представляет собой количество субъектов с по меньшей мере одним связанным с лечением НЯ в данной категории, НЯ классифицировали согласно общей терминологии критериев нежелательных явлений (СТСАЕ) v4.0, и любого пациента с несколькими сценариями одного и того же предпочтительного термина подсчитывали только один раз и относили к наиболее тяжелой степени. Дозолимитирующая токсичность не наблюдалась, максимально переносимая доза (МПД) не была установлена.
Оценка фармакокинетики
[00245] Серии образцов крови отбирали в течение исследования для анализа RAD1901 в плазме. Образцы крови объемом по 5 мл каждый отбирали посредством баллонного внутривенного катетера или посредством прямой венопункции в пробирки, содержащие К3-EDTA в качестве антикоагулянта. Устойчивого состояния достигали на день 5 лечения. Оценивали геометрическое среднее (Geo-Mean) профилей RAD1901 концентрация в плазме - время. Результаты определения фармакокинетики в плазме групп, получавших лечение RAD1901 (200, 500, 750 или 1000 мг), в день 7 (N=35) исследования представлены в таблице 8 и на фигуре 21 в качестве примера. Медиана t1/2 находилась в диапазоне между 37,5 и 42,3 часов (таблица 8). После введения нескольких доз RAD1901 медиана tmax варьировала в диапазоне между 3 и 4 часами после введения доз.
[00246] Пример V(A)-1. Моделирование связывания RAD1901-ERα с применением избранных опубликованных структур ER.
[00247] Если не указано обратное, когда структуры представлены реберной моделью, каждый конец связи окрашен тем же цветом, что и атом, к которому присоединена данная связь, где серый цвет представляет собой углерод, красный - кислород, синий - азот и белый - водород. [00248] Четырнадцать опубликованных структур (т.е. моделей) лиганд-связывающего домена (ЛСД) ERα, образовавших комплексы с различными лигандами ER, выбирали из 96 опубликованных моделей посредством тщательной оценки. Одна из данных четырнадцати моделей представляла собой 3ERT (ЛСД ERα человека, присоединенный к 4-гидрокситамоксифену (ОНТ)). ОНТ представляет собой активный метаболит тамоксифена и СМРЭ первого поколения, который действует в качестве антагониста в ткани молочной железы.
[00249] В 3ERT (фигуры 21 и 22) сайт связывания ERα принимает вид трехслойного «сэндвича из спиралей», образующего гидрофобный карман, который содержит спираль 3 (Н3), спираль 5 (Н5) и спираль 11 (Н11) (фигура 21). Пунктирный ящик на фигуре 22 представляет собой сайт связывания и остатки в сайте связывания, которые являются важными или осуществляются в результате связывания ОНТ. ОНТ выступает в качестве антагониста посредством вытеснения Н12 в сайт, в котором связывается коактиватор (или коактиваторы) LXXLL. ОНТ оккупирует пространство, в норме заполненное L540, и модифицирует конформацию четырех остатков на С-конце спирали 11 (G521, Н524, L525 и М528). ОНТ также образует соляной мостик с D351, что приводит к нейтрализации заряда.
[00250] Другие тринадцать моделей ЛСД ERα-лиганд ER сравнивали с 3ERT. Различия в положениях остатков данных моделей обобщены в таблице 10. Наложение структур ERα четырнадцати моделей (фигура 23) демонстрирует, что данные структуры значительно отличаются в остатках Е380, М421, G521, М522, Н524, Y526, S527, М528, Р535, Y537, L540 и различных комбинациях указанных остатков.
[00251] Расчеты среднего квадратичного отклонения (СКО) для любой пары четырнадцати моделей обобщены в таблице 11. Структуры считали перекрывающимися, когда СКО структур составляло Таблица 11 демонстрирует, что все четырнадцать моделей характеризуются СКО<1,5 Применение анализа условного форматирования свидетельствует, что 1R5K и 3UUC являлись наименее подобными другим моделям (анализ не показан). Вследствие этого 1R5K и 3UUC считали уникальным, отдельным структурным кластером для исследования.
[00252] Остатки ERα, связанные лигандом на четырнадцати моделях, обобщены в таблице 12. В таблице 12 также представлена EC50 в комплексах ЛСД ERα - антагонист. Из четырнадцати моделей в тринадцати наблюдались взаимодействия водородной связи между лигандом и Е353; в двенадцати наблюдались пи-взаимодействия между лигандом и F404; в пяти наблюдались взаимодействия водородной связи между лигандом и D351; в шести наблюдались взаимодействия водородной связи между лигандом и Н524; в четырех наблюдались взаимодействия водородной связи между лигандом и R394; и в одной (3UUC) наблюдались взаимодействия между лигандом и Т347.
[00253] Каждую из четырнадцати моделей использовали для докинга случайной библиотеки из 1000 соединений плюс лиганд, с которым была опубликована модель (известный антагонист), для определения того, может ли модель обнаружить и отдавать предпочтение известному антагонисту. Если модель способна обнаружить известный антагонист, модель определяли как способную предсказывать положение ее собственного опубликованного лиганда. Затем рассчитывали EF50 для количественного определения силы модели, чтобы увидеть, насколько данная модель превосходила случайный выбор. RAD1901 состыковывали в выбранных моделях (например, фигуры 24-28). Определяли показатели докинга опубликованного лиганда и RAD1901 в моделях. Также определяли ЕС50. Визуальное изучение RAD1901 продемонстрировало, что данное соединение «подчинялось» взаимодействию, представленному с опубликованными лигандами в 1R5K, 1SJ0, 2JFA, 2BJ4 и 2OUZ. Пространственные конфликты не были отмечены. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения, например, в 1R5k и 2BJ4, RAD1901 обладал более высоким показателем докинга, чем опубликованный лиганд.
[00254] Результаты оценки девяти моделей (1ERR, 3ERT, 3UCC, 2IOК, 1R5K, 1SJ0, 2JFA, 2BJ4 и 2OUZ) обобщены в таблице 13.
[00255] 1ERR и 3ERT не могли предсказать верное положение своего кристаллизованного лиганда. RAD1901 не состыковывался в 3UCC. Тетрагидронафтален связывался в 2IOK-RAD1901 нетрадиционным способом.
[00256] Основные различия между моделями 1R5K, 1SJ0, 2JFA, 2BJ4 и 2OUZ наблюдались в остатках в С-конце спирали 11 (G521-M528).
[00257] На фигуре 24 представлено моделирование RAD1901-1R5K (а) и GW5-1R5K (b). RAD1901 связывался посредством взаимодействия водородной связи с Е353, R394 и L536; и посредством пи-взаимодействия с F404.
[00258] На фигуре 25 представлено моделирование RAD1901-1SJ0 (а) и E4D-1SJ0 (b). RAD1901 связывался посредством взаимодействия водородной связи с Е353 и D351; и посредством пи-взаимодействия с F404.
[00259] На фигуре 26 представлено моделирование RAD1901-2JFA (а) и RAL-2JFA (b). RAD1901 связывался посредством пи-взаимодействия с F404.
[00260] На фигуре 27 представлено моделирование RAD1901-2BJ4 (а) и OHT-2BJ4 (b). RAD1901 связывался посредством взаимодействия водородной связи с Е353 и R394; и посредством пи-взаимодействия с F404.
[00261] На фигуре 28 представлено моделирование RAD1901-2IOK (а) и IOK-2IOK (b). RAD1901 связывался посредством взаимодействия водородной связи с Е353, R394 и D351; и посредством пи-взаимодействия с F404.
[00262] Опубликованные лиганды в моделях имеют следующие структуры:
[00263] Пример V(A)-2. Докинг индуцированного соответствия (ДИС) ERα с RAD1901 и фулвестрантом
[00264] Конформацию связывания RAD1901 в ERα дополнительно оптимизировали посредством анализа ДИС пяти кристаллических структур ERα: 1R5K, 1SJ0, 2JFA, 2BJ4 и 2OUZ. В анализе ДИС учитывали гибкость рецептора (после связывания лиганда) для аккомодации его правильной конформаций связывания.
[00265] Библиотеку различных конформаций для каждого лиганда (например, RAD1901 и фулвестранта) получали посредством поиска локальных минимумов как функции вращений относительно вращающихся связей. Библиотека для RAD1901 содержала 25 различных конформаций.
[00266] Пять кристаллических структур ERα получали и минимизировали. Соответствующий лиганд в опубликованных рентгеновских структурах использовали для определения кармана связывания ERα.
[00267] Конформации RAD1901 состыковывали в полученные структуры ERα, где данным конформациям позволяли вызывать движения боковой цепи или остова к остаткам, расположенным в кармане связывания. Данные движения позволяли ERα изменять сайт связывания, так что он приобретал более близкую конформацию к форме и способу связывания конформаций RAD1901. В некоторых примерах при анализе ДИС допускали небольшие релаксации остова в структуре рецептора и значительные изменения конформации боковой цепи.
[00268] Эмпирическую оценочную функцию использовали для приближения свободной энергии связывания лиганда с целью получения показателя докинга, или Gscore. Gscore также известен как GlideScore, и в данном примере данный термин можно использовать взаимозаменяемо с показателем докинга. Показатель докинга представлял собой оценку аффинности связывания. Вследствие этого чем ниже значение показателя докинга, тем «лучше» лиганд присоединяется к своему рецептору. Показатель докинга от -13 до -14 соответствовал очень хорошему взаимодействию связывания.
[00269] Конформации RAD1901, полученные в результате анализа ДИС с 1R5K, 1SJ0, 2JFA, 2BJ4 и 2OUZ, соответственно, накладывали, чтобы продемонстрировать различия между ними (фигура 29-31, показаны нареберной модели). Все связи в каждой конформации RAD1901 на фигурах 29, 30 и 31(a) представлены одинаковым цветом.
[00270] Конформации RAD1901, полученные в результате анализа с 1R5K (синий) и 2OUZ (желтый), содержали группу RAD1901 N-бензил-N-этиланилин на передней стороне (фигура 29). Конформации RAD1901, полученные в результате анализа с 2BJ4 (зеленый) и 2JFA (розовый), содержали группу RAD1901 N-бензил-N-этиланилин на задней стороне (фигура 30). Конформации RAD1901, полученные в результате анализа с 2BJ4 (зеленый), 2JFA (розовый) и 1SJ0 (коричневый), являлись вполне аналогичными, что демонстрируется наложениями данных конформаций (фигура 31(a) и (b)). Показатели докинга ДИС RAD1901 обобщены в V(A) - таблице 5.
[00271] ДИС RAD1901 с 2BJ4 продемонстрировал взаимодействия водородной связи с Е353 и D351 и пи-взаимодействия с F404 (фигура 32(а)-(с)). На фигуре 32(a) представлены области в сайте связывания, подходящие для акцепторной группы водородной связи (красный), донорной группы водородной связи (синий) и гидрофобной группы (желтый). На фигуре 32(a)-(b) светло-синий цвет означает углерод для RAD1901. На фигуре 33(а)-(с) представлены взаимодействия белок-поверхность ДИС RAD1901 с 2BJ4. V(A) - фигура 33(a) и (b) представляют собой вид спереди, и фигура 33(c) представляет собой вид сбоку. Молекулярная поверхность RAD1901 окрашена синим цветом на фигуре 33(a) и зеленым - на фигуре 33(c). Фигура 33(b)-(с) представляет собой электростатическое представление доступной для растворителя поверхности ERα, где красный цвет представляет собой электроотрицательную, и синий представляет собой электроположительную поверхность.
[00272] Аналогичный анализ ДИС проводили для фулвестранта с 2BJ4, как описано выше. ДИС фулвестрант-2ВJ4 привел к получению Gscore, который составлял -14,945, и продемонстрировал взаимодействия водородной связи с Е353, Y526 и Н524 и пи-взаимодействия с F404 (фигура 34(а)-(с)). На фигуре 34(a) представлены области в сайте связывания, подходящие для акцепторной группы водородной связи (красный), донорной группы водородной связи (синий) и гидрофобной группы (желтый). На фигуре 34(a) светло-синий цвет означает углерод для RAD1901.
[00273] На фигуре 35(а)-(b) представлены RAD1901 и фулвестрант, состыкованный в 2BJ4 посредством ДИС, оба из которых образовывали пи-взаимодействия с F404 и взаимодействия водородной связи с Е353. Более того, RAD1901 содержал взаимодействие водородной связи с D351 (синий цвет представляет молекулярную поверхность RAD1901, фигура 35(b), в то время как фулвестрант содержал взаимодействие водородной связи с Y526 и Н524 (зеленый цвет представляет молекулярную поверхность фулвестранта, фигура 35(c). Наложения 2BJ4, состыкованного с RAD1901 и фулвестрантом, показаны на фигуре 36(а)-(b). На фигуре 36(a) зеленый цвет представляет собой молекулярную поверхность фулвестранта, и синий цвет представляет собой молекулярную поверхность RAD1901. На фигуре 36(b) коричневая структура представляет собой фулвестрант, и синяя структура представляет собой RAD1901.
[00274] Пример V(A)-3. Оценка моделирования избранных мутаций ERα.
[00275] Оценивали эффекты различных мутаций ERα в отношении С-конца лиганд-связывающего домена. Конкретные мутации ERα, оценку которых проводили, представляли собой мутант Y537X, где X представлял собой S, N или С; D538G; и S463P.
[00276] Y537 расположен в спирали 12. Данный остаток может регулировать связывание лиганда, гомодимеризацию и связывание ДНК, когда является фосфорилированным, и может позволить ERα избежать опосредованных фосфорилированием контролей и обеспечить клетке потенциальное селективное опухолегенное преимущество. Помимо этого, данный остаток может вызывать конформационные изменения, которые приводят к постоянной активации рецептора.
[00277] Мутация Y537S способствует транскрипционно активной закрытой конформации кармана независимо от того, занят карман лигандом или нет. Закрытый, но не занятый карман может обуславливать конститутивную активность ERα (Carlson et al. Biochemistry 36:14897-14905 (1997)). Ser537 устанавливает взаимодействие водородной связи с Asp351, которое приводит к изменению конформации спирали петли 11-12 и к заглублению Leu536 в недоступное для растворителя положение. Данное событие может способствовать конститутивной активности мутантного белка Y537S. Мутация поверхности Y537S не оказывает влияния на структуру кармана ЛСД.
[00278] Y537N распространен в ERα-отрицательном метастазирующем раке молочной железы. Мутация в данном сайте может позволить ERα избежать опосредованных фосфорилированием контролей и обеспечить клетке потенциальное селективное опухолегенное преимущество. В частности, замена Y537N вызывает конформационные изменения в ERα, которые могут имитировать связывание гормона, не нарушая способности рецептора димеризоваться, но предоставляя рецептору функцию конститутивной трансактивации (Zhang et al. Cancer Res 57:1244-1249 (1997)).
[00279] Y537C оказывает аналогичный эффект в отношении Y537N.
[00280] D538G может сдвигать весь энергетический ландшафт посредством стабилизации как активной, так и неактивной конформаций, несмотря на то, что более предпочтительной является активная конформация. Данное явление может приводить к конститутивной активности данного мутанта при отсутствии гормонов, как наблюдалось на устойчивых к гормонам вариантах рака молочной железы (Huang et al., "A newfound cancer activating mutation reshapes the energy landscape of estrogen-binding domain," J. Chem. Theory Comput. 10:2897-2900 (2014)).
[00281] Ни одна из данных мутаций, как ожидается, не оказывает влияния на лиганд-связывающий домен и специфично не препятствует связыванию RAD1901. Y537 и D538 могут вызывать конформационные изменения, которые приводят к конститутивной активации рецептора вне зависимости от связывания лиганда.
[00282] Пример V(B). Анализ связывания конструкций ERα дикого типа и мутанта ЛСД с RAD1901 и другими соединениями in vitro
[00283] Анализ связывания конструкций ERα дикого типа (ДТ) и мутантного ЛСД с RAD1901 in vitro продемонстрировал, что RAD1901 присоединяется к мутантному ERα с аналогичной аффинностью, что и к ERα ДТ.
[00284] Конструкции ERα ДТ и мутантного ЛСД получали посредством экспрессии и очистки соответствующих остатков ЛСД 302-552 с N-концевым тиоредоксином и метками 6xHis, которые отщеплялись протеазой TEV.
[00285] Метод флуоресцентной поляризации (ФП) использовали для определения связывания исследуемых соединений (RAD1901, фулвестранта, базедоксифена, ралоксифена, тамоксифена и AZD9496) с ERα согласно инструкциям производителя (Polar Screen, Invitrogen) с 2 нМ фторомона, 100 нМ конструкции ERα ДТ или мутантного ЛСД. Каждую серию проводили в двух повторах, и анализировали одно исследуемое соединение для определения IC50 для различных конструкций ERα (фигура 38 для анализа связывания RAD1901).
[00286] Как указано выше, вышеизложенное описание предназначено исключительно для иллюстрации различных вариантов реализации настоящего изобретения. Специфичные модификации, которые обсуждаются выше, не следует рассматривать в качестве ограничения объема настоящего изобретения. Для специалиста в данной области техники будет очевидно, что можно получить различные эквиваленты, изменения и модификации без выхода за рамки объема настоящего изобретения, при этом следует понимать, что такие эквивалентные варианты реализации включены в настоящую заявку. Все источники, ссылки на которые содержатся в настоящей заявке, включены посредством ссылки в той же мере, как если бы указанные источники были полностью изложены в настоящей заявке.
1. Способ лечения рака молочной железы у субъекта, страдающего от положительного по рецептору эстрогенов альфа рака, который содержит мутантный рецептор эстрогенов альфа, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества комбинации палбоциклиба и RAD1901 следующей структуры:
,
или его соли, или сольвата.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный рак молочной железы является устойчивым к лекарственным препаратам раком молочной железы и является также устойчивым к одному или более вариантам антиэстрогеновой терапии или терапии ингибитором ароматазы.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что указанный один или более антиэстрогенов выбраны из группы, состоящей из тамоксифена, торемифена и фулвестранта, и указанный один или более ингибиторов ароматазы выбраны из группы, состоящей из аромазина, летрозола и анастрозола.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что у указанного субъекта экспрессируется по меньшей мере один мутантный рецептор эстрогенов альфа, выбранный из группы, состоящей из D538G, Y537S, Y537N, Y537C, E380Q, S463P, L536R, L536Q, Р535Н, V392I и V534E.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный мутантный рецептор эстрогенов альфа выбран из группы, состоящей из Y537S, Y537N, Y537C, D538G, L536R, S463P и E380Q.
6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный мутантный рецептор альфа представляет собой Y537S.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный RAD1901 вводят в суммарной ежедневной дозе от 100 мг до 1000 мг.
8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанный RAD 1901 вводят в суммарной ежедневной дозе 100 мг, 200 мг, 300 мг, 400 мг, 500 мг, 600 мг, 700 мг, 800 мг, 900 мг или 1000 мг.
9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что указанная ежедневная доза доставляется в виде двух отдельных доз.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанные отдельные дозы представляют собой одинаковые дозы.
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный субъект представляет собой женщину в постменопаузальном периоде.
12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что для указанного субъекта впервые установлена необходимость лечения в результате анализа на предмет повышенной экспрессии одного или нескольких генов, выбранных из ABL1, АКТ1, АКТ2, ALK, АРС, AR, ARID1A, ASXL1, ATM, AURKA, ВАР, ВАР1, BCL2L11, BCR, BRAF, BRCA1, BRCA2, CCND1, CCND2, CCND3, CCNE1, CDH1, CDK4, CDK6, CDK8, CDKN1A, CDKN1B, CDKN2A, CDKN2B, СЕВРА, CTNNB1, DDR2, DNMT3A, E2F3, EGFR, EML4, ЕРНВ2, ERBB2, ERBB3, ESR1, EWSR1, FBXW7, FGF4, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FLT3, FRS2, HIF1A, HRAS, IDH1, IDH2, IGF1R, JAK2, KDM6A, KDR, KIF5B, KIT, KRAS, LRP1B, МАР2К1, МАР2К4, MCL1, MDM2, MDM4, MET, MGMT, MLL, MPL, MSH6, MTOR, MYC, NF1, NF2, NKX2-1, NOTCH1, NPM, NRAS, PDGFRA, PIK3CA, PIK3R1, PML, PTEN, PTPRD, RARA, RBI, RET, RICTOR, ROS1, RPTOR, RUNX1, SMAD4, SMARCA4, SOX2, STK11, TET2, TP53, TSC1, TSC2 и VHL.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанный один или несколько генов выбраны из АКТ1, АКТ2, BRAF, CDK4, CDK6, PIK3CA, PIK3R1 и MTOR.
14. Способ по п. 11, отличающийся тем, что указанный палбоциклиб вводят в ежедневной дозе от 25 мг до 250 мг.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что указанный палбоциклиб вводят в течение 21 дня в цикле длительностью 28 дней.